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【正文】 抗原抗體反應(yīng)其次是特異性,抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)之間。ELISA、酶標(biāo)儀、洗板機(jī),第一頁(yè)，共四十九頁(yè)。,第二頁(yè)，共四十九頁(yè)。,免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用 由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣。,第八頁(yè)，共四十九頁(yè)。 其方法簡(jiǎn)單，方便訊速，特異性強(qiáng)。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。 6. 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。,第十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。,雙抗原夾心法測(cè)抗體,用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。 良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。,第二十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。最好用層析純化的抗體，這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進(jìn)行反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果本底淺淡。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液。AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4甲基傘酮），可用于ELISA作熒光測(cè)定，敏感度較高于用顯色底物的比色法。例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。 注意每孔的加液量：以加滿為宜，但不可溢出，一般為每控300微升。,第三十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。 結(jié)果以光密度（oplical density，OD/吸光度（absorbence，A）表示，兩者含義相同。 在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。一般ELISA都是使用常用的熒光素，對(duì)科研工作者來(lái)講濾光片較好。,酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家,第四十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。 操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。 嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。顯色是酶催化無(wú)色的底物生成有色產(chǎn)物的溫育反應(yīng)。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。 不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。,上機(jī)操作 開(kāi)機(jī) → 機(jī)器自檢 → 進(jìn)入主菜單MainMenu → 按READ功能鍵 → 選擇要做項(xiàng)目的編號(hào)及名稱→輸入要做的樣本數(shù)量→ 按ENTER 鍵 → 把檢測(cè)板放入機(jī)器運(yùn)載臺(tái)上 →打印機(jī)打印出結(jié)果（打印機(jī)要打開(kāi)并放好紙）→取走檢測(cè)板，按ENTER鍵→ 選擇要做項(xiàng)目的編號(hào)及名稱 →按MainMenu鍵，進(jìn)入主菜單MainMenu → 操作結(jié)束,Biotek ELx800 酶標(biāo)儀的使用,第四十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。 Bio－Tek 公司：與MD公司伯仲之間，產(chǎn)品質(zhì)量過(guò)硬，做工精細(xì)。,酶標(biāo)儀配件,光源： 氙閃燈（波譜寬、低熱輻射、壽命長(zhǎng)，但是可見(jiàn)區(qū)能量低） 鹵素?zé)簦ú荒苡糜谧贤鈪^(qū)，可見(jiàn)區(qū)能量強(qiáng)）,ELx800光源： 鹵鎢燈光源,第四十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。,美國(guó)寶特Bio－Tek ELX800 全自動(dòng)酶標(biāo)儀,鍵盤格式,第四十頁(yè)，共四十九頁(yè)。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。 建議用戶采用兩點(diǎn)吸液與底部沖洗方式，以得到好的洗滌效果。洗滌的次數(shù)一般為3～4次，有時(shí)甚至需洗5～6次。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。 陽(yáng)性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相一致，多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)。,第二十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。 DH2一般為無(wú)色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物。 酶結(jié)合物保留活性部分和催化能力，底物易于制備和保存，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測(cè)定等。 常用封閉劑：0.05%0.5%的BSA。,第二十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。,第二十頁(yè)，共四十九頁(yè)。 測(cè)定某一特定的物質(zhì)，而不需
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