【正文】 apⅠ13kbSouthern印跡雜交N H PN：正常； H：雜合子； P：患者（純合子）；黃色區(qū)域?yàn)樘结樐?三、脆性 X綜合征 GAGGAAG 3180。錄目 ?珠蛋白生成障礙性貧血癥基因密碼子 17突變的檢測(cè) DNA/Mspbp片段及分子量標(biāo)準(zhǔn)中低于 200錄1.I， Dra kb三種帶型。錄三、脆性 X綜合征n 脆性 n 男性和女性攜帶者增多到 52～ 200拷貝，相鄰的 CpG錄目 HAV系 RNA病毒，利用 RTPCR技術(shù)可從糞便中檢測(cè)出甲型肝炎病毒的基因組 RNA。DNA片段；設(shè)計(jì)位于可變區(qū)的引物擴(kuò)增某一亞型 HBV 錄目 錄第四節(jié) 腫瘤的基因診斷Gene Diagnosis of Malignant Tumors目 最常見的突變是第 1 1 59或第 61位密碼子的點(diǎn)突變。錄目 錄目 （ 1） PCRSSCP分析技術(shù)錄（一）乳腺癌5% ～ 10% 乳腺癌患者有家族遺傳性。錄目 在癌發(fā)展過程的不同階段發(fā)生不同的基因突變。coli）是結(jié)腸癌發(fā)生過程中第一個(gè)突變基因。DCC（ deletion（ 3）蛋白質(zhì)免疫印跡法： 檢測(cè)因基因突變而縮短了的 APC蛋白。bp長(zhǎng)，稱為小衛(wèi)星 DNA。 repeat， TR）組成， TR的核心序列同源性很高，等位 HVR的長(zhǎng)度由于 TR的重復(fù)次數(shù)不同而有很大的差別，具高度多態(tài)性。lengthfingerprinting）。n 以往在刑事案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中應(yīng)用的是血型、血清蛋白型、紅細(xì)胞酶型和 HLA分型，個(gè)體分辨能力不夠，只能排除，不能做到統(tǒng)一認(rèn)證。PI值表示爭(zhēng)議父作為親父比隨機(jī)男人作為親父的可能性大多少倍， PI值大于 1表示傾向肯定父子關(guān)系，數(shù)值越大，可能性越大；等于0時(shí)表示排除父子關(guān)系 。錄親權(quán)鑒定與 DNA指紋圖由此圖可推斷出： A和 C是親生女兒； B為妻子和其前夫所生； D為養(yǎng)女。錄本節(jié)內(nèi)容提要 一、基因治療的策略二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)三、基因干預(yù)四、基因治療的應(yīng)用研究五、基因治療的前景與問題目 replacement） 錄n 定向整合的條件 :轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列。類型 :n 在有缺陷基因的細(xì)胞中導(dǎo)入相應(yīng)的正?；?，而細(xì)胞內(nèi)的缺陷基因并未除去，通過導(dǎo)入正常基因的表達(dá)產(chǎn)物，補(bǔ)償缺陷基因的功能；n 向靶細(xì)胞中導(dǎo)入靶細(xì)胞本來不表達(dá)的基因，利用其表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的。（四）自殺基因治療 (SuicideHSV） Ⅰ 型胸苷激酶（ thymidine2.錄反轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)及生活周期（ 1）反轉(zhuǎn)錄病毒 目 p LTR由 U R和 U5三部分組成。l 錄目 錄錄腺病毒的優(yōu)點(diǎn)l 基因?qū)胄矢?，?duì)人類安全；l 宿主范圍廣；l 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞分裂無關(guān)；l 重組腺病毒可通過口服經(jīng)腸道吸收、或噴霧吸入或氣管內(nèi)滴注；l 腺病毒載體容量較大，可插入 l 靶向性差。一類單鏈線狀 DNA缺陷型病毒。ofAAV載體容量小，目前最多只能容納 5將 DNA與細(xì)胞或組織親和性的配體偶聯(lián)，可使 DNA具有靶向性。目 受體介導(dǎo)的反義 RNA基因治療有其自身的優(yōu)點(diǎn)，而在一定程度上補(bǔ)充了轉(zhuǎn)基因治療的不足。（ l）安全性高錄（二）核酶 (ribozyme) 目 錄與一般的反義 RNA相比，核酶具有較穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)，不易受到 RNA酶的攻擊。RNA） 或反義 RNA（ antisense錄研究基因功能的新工具 錄目 目 ?提高化療效果的輔助基因治療： 藥物增敏基因治療； 腫瘤的免疫基因治療激發(fā)機(jī)體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細(xì)胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。目 目 細(xì)胞內(nèi)氧化和解毒作用的酶系統(tǒng)： 臨床上對(duì)絕大多數(shù)病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段，在眾多開展的抗病毒治療方案中，抗病毒基因治療十分引人注目。 （ 4） RNA干擾技術(shù)。 腺苷酸合成酶等基因，導(dǎo)入細(xì)胞并持續(xù)表達(dá)，可以激活核酸酶 F， 降解病毒 RNA。 13:18:5913:18:5913:183/22/2023 1:18:59 PM1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 三月 21三月 21Monday, March 22, 2023很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 1:18:59 下午 1:18 下午 13:18:59三月 21楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 三月 211:18 下午 三月 2113:18March 22, 20231業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 13:18:5913:18:5913:18Monday, March 22, 20231知人者智，自知者明。 三月 21三月 2113:18:5913:18:59March 22, 20231意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 22 三月 20231:18:59 下午 13:18:59三月 211比不了得就不比，得不到的就不要。錄目 錄目 目 錄（三）病毒性疾病的基因治療研究 據(jù)統(tǒng)計(jì)， 75%的人類傳染病是由病毒引起的。細(xì)胞色素 P450（ cytochrome自殺基因治療是目前腫瘤基因治療領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)之一?；驹恚?向腫瘤細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入某些真核細(xì)胞中不存在的酶基因（自殺基因），這些基因表達(dá)的特異性酶可以催化對(duì)真核細(xì)胞無毒或低毒的藥物前體，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸种坪怂岷铣尚?yīng)的抗代謝藥物，進(jìn)而選擇性地使轉(zhuǎn)染了 “自殺基因 ”的腫瘤細(xì)胞 “自殺 ”。錄自殺基因治療目 n 苯丙酮酸尿癥和其他先天性代謝缺陷病 n 腺苷脫氨酶 (ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶 體外化學(xué)合成 。interferingRISC)。RNA干擾過程主要有 2個(gè)步驟：目 interference， 錄（三）干擾 RNA （ 2）核酶的基本組成：用于基因治療的核酶分子由三個(gè)部分組成，中間是保守序列（能夠組成酶活性結(jié)構(gòu)域），兩端是引導(dǎo)序列 。天然核酶多為單一的 RNA分子，具有自我剪切作用。（ 2）反義 RNA設(shè)計(jì)和制備方便 （ 1）體外合成反義 RNA， 直接作用于培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞吸收 RNA后，發(fā)揮作用。1.目 受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移技術(shù)示意圖目 脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移示意圖目 （ 1）脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)錄目 錄常用基因治療載體錄AAV載體是目前正在研究的一類新型安全載體，它對(duì)人類無致病性。DNAREP：病毒復(fù)制基因 ,AAV 快的細(xì)胞，導(dǎo)入的重組病毒載體，隨分裂而丟失的機(jī)會(huì)增多，表達(dá)時(shí)間相對(duì)較短。錄宿主細(xì)胞范圍廣，可感染分裂和非分裂終末分化細(xì)胞，如神經(jīng)元等。錄錄能合成包裝蛋白，用于反轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝，但本身卻不能包裝成輔助病毒顆粒。在 R內(nèi)還有 poly(A)加尾信號(hào)。目 錄目 錄?TK/GCVinterference） 定義： 采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá)，或者通過破壞某個(gè)基因的結(jié)構(gòu)而使之不能表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的?；蛲粗亟M技術(shù)目 定義： 指將特定的目的基因?qū)胩囟?xì)胞，通過定位重組，導(dǎo)入的正?；颍灾脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因。cell)基因治療216。 目 2． DNA指紋圖與親權(quán)鑒定錄目 錄目 錄人類 DNA指紋圖目 一、 DNA指紋與多態(tài)性遺傳標(biāo)記目 錄目 二、常見腫瘤的基因診斷目 抑癌基因 DPC4和MADR2也可能會(huì)因 18q等位基因丟失而失活。突變提高乳腺癌易感性。 70% 的缺失或插入導(dǎo)致編碼序列的框移和翻譯提前終止。在結(jié)直腸癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌，都可見異常的p53基因蛋白。錄一、原癌基因與抑癌基因的檢測(cè)1．原癌基因的檢測(cè)錄目 3． Souhern印跡雜交法4． PCR擴(kuò)增 島的異常甲基化。錄目 kb和 16錄二、血友?。?Hemophilia）n 甲型血友病是由于血漿凝血因子 VIII（FVIII）缺陷造成。bT； 2： bA/錄目 錄目 ACT5180。目 錄一、血紅蛋白?。?hemoglobinopathy） SNP(singleRFLP（基于核酸分子雜交技術(shù)）② 錄（二）間接診斷途徑① 致病基因未知或基因結(jié)構(gòu)不確定② 致病突變機(jī)制不清③ 致病位點(diǎn)不便檢測(cè)目 ASPCR（ allele 錄目 chip)目 DNA序列測(cè)定（ DNApolymorphism,錄目 熒光定量 PCR熒光標(biāo)記引物目 Taq DNA聚合酶變性延伸 退火目 目 6.(FISH寡核苷酸中的堿基錯(cuò)配會(huì)大大影響雜交分子的穩(wěn)定性，可用人工合成的針對(duì)正常和突變ASO探針進(jìn)行反向斑點(diǎn)雜交，檢測(cè)點(diǎn)突變， 大大提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性。先將探針固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，將樣品 RNA或 DNA標(biāo)記變性后進(jìn)行雜交。dotblotting）錄目 錄目 blotting ） n DNA序列測(cè)定（ DNA 應(yīng)用廣泛性目 基因診斷檢測(cè)的目標(biāo)分子是 DNA、RNA，也可以是蛋白質(zhì)或者多肽。錄目 錄第一節(jié) 基因診斷學(xué)基礎(chǔ)Basis of Gene Diagnostics目 錄目 錄基因診斷之父 — 簡(jiǎn)悅威 目 錄目 sequencin