基因表達(dá)和基因重組-文庫吧在線文庫
【正文】 3180。 3180。 3180。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) （見第 22章） * 化學(xué)合成法獲取目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性內(nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 * 從基因組 DNA文庫獲取目的基因 cDNA文庫 以 mRNA 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與 mRNA互補(bǔ)的 DNA，再復(fù)制成雙鏈 cDNA，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，即獲得 cDNA文庫。 克隆載體 (cloning vector)為使插入的外源 DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計(jì)的載體。 命名 Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 Ⅱ 類酶識別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 同功異源酶 來源不同的限制酶 ， 但能識別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。磷酸基和 3180。 可接合質(zhì)粒如 F 因子 (F factor) 質(zhì)粒 —— 細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 （二）轉(zhuǎn)化作用 通過自動獲取或人為地供給外源 DNA， 使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型 ， 稱為轉(zhuǎn)化作用 (transformation)。 一、同源重組 二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 （一）接合作用 當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞 、 或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時(shí) ， 質(zhì)粒 DNA從一個(gè)細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 的 DNA轉(zhuǎn)移稱為接合作用(conjugation)。 （二）工具酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? T4DNA連接酶 ? 堿性磷酸酶 ? 末端轉(zhuǎn)移酶 ? Taq DNA聚合酶 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸內(nèi)切酶 識別特異序列，切割 DNA DNA連接酶 催化 DNA中相鄰的 5180。 分類 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名 ， 用大寫； 第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫； 第四個(gè)字母代表株； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 （四） 基因載體 定義： 為攜帶目的基因，實(shí)現(xiàn)其無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 舉例： pBR322質(zhì)粒 質(zhì)粒 宿主細(xì)胞 ori 抗 Amp 宿主細(xì)菌 含 Amp培養(yǎng)基 多克隆位點(diǎn) + 多種酶切口 多克隆位點(diǎn) 限制性內(nèi)切酶 單一酶切口 多克隆位點(diǎn) ori 復(fù)制起始點(diǎn) 遺傳標(biāo)記 Amp polylinker 基因載體 λ噬菌體 DNA改造系統(tǒng) λgt系列（插入型，適用 cDNA克?。? EMBL系列（置換型，適用基因組克隆） 噬菌體 (phage) M13噬菌體 DNA改造系統(tǒng)（含 lacZ基因） M13mp系列 pUC系列 粘性質(zhì)粒 (cosmid)
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