基因表達(dá)和基因重組-wenkub
2023-01-26 17:44:21 本頁面
【正文】 馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 ① 合成 cDNA ② 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。 （二）工具酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? T4DNA連接酶 ? 堿性磷酸酶 ? 末端轉(zhuǎn)移酶 ? Taq DNA聚合酶 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸內(nèi)切酶 識別特異序列，切割 DNA DNA連接酶 催化 DNA中相鄰的 5180。 λ噬菌體的生活史 溶菌生長途徑 (lysis pathway) 溶源菌生長途徑 (lysogenic pathway) 例 第 二 節(jié) 重組 DNA技術(shù) DNA Rebination Technique ? 相關(guān)概念 ? DNA克隆 ? 工具酶 ? 目的基因 ? 基因載體 ? 基本原理 ? 重組 DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 本節(jié)主要內(nèi)容 一 、 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone) 來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 一、同源重組 二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 （一）接合作用 當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞 、 或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時(shí) ， 質(zhì)粒 DNA從一個(gè)細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 的 DNA轉(zhuǎn)移稱為接合作用(conjugation)。 基因重組和基因工程 Geic Rebination and Geic Engineering 第 十 四 章 基因重組 ： 不同的 DNA分子間發(fā)生共價(jià)連接形成重組 DNA 分子。 可接合質(zhì)粒如 F 因子 (F factor) 質(zhì)粒 —— 細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 （二）轉(zhuǎn)化作用 通過自動獲取或人為地供給外源 DNA， 使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型 ， 稱為轉(zhuǎn)化作用 (transformation)。 獲取同一拷貝的過程稱為 克隆化 (cloning)，即 無性繁殖 。磷酸基和 3180。羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針 末端轉(zhuǎn)移酶 在 3180。 命名 Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 Ⅱ 類酶識別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 同功異源酶 來源不同的限制酶 ， 但能識別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。 編碼某種蛋白質(zhì) 研究某基因結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系 研究某基因與疾病的關(guān)系 按照人的愿望設(shè)計(jì)和建造非天然的基因表達(dá)體系。 克隆載體 (cloning vector)為使插入的外源 DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計(jì)的載體。 具有 自我復(fù)制 功能。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) （見第 22章） * 化學(xué)合成法獲取目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性內(nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因
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