基因表達(dá)和基因重組(完整版)
【正文】 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome, YAC) 細(xì)菌人工染色體 (bacterial artificial chromosome, BAC) 動(dòng)物病毒 DNA改造的載體 （如腺病毒，腺病毒相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒） 其他 二 、 重組 DNA技術(shù)基本原理 基本原理 目的基因的獲取 DNA導(dǎo)入受體菌 外源基因與載體的連接 克隆載體的選擇和構(gòu)建 重組體的篩選 克隆基因的表達(dá) 以 質(zhì) 粒 為 載 體 的 DNA 克 隆 過(guò) 程 （一）目的基因的獲取 1. 化學(xué)合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列 。 3180。 3180。 3180。C 重組體 4. 人工接頭 (linker)連接 由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接 。 方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測(cè)試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 （五）遺傳疾病的預(yù)防 欲以基因工程方法高效表達(dá)人胰島素，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。 三、重組技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 （二）生 物制藥 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長(zhǎng)因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長(zhǎng)與分化 生長(zhǎng)素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類(lèi)白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 3180。 3180。 3180。C 重組體 配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點(diǎn)連接相似。 存在于細(xì)菌染色體外的 小型 環(huán)狀 DNA分子。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 同尾酶 （三）目的基因 目的基因 需要克隆的 DNA片段。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 ① 合成 cDNA ② 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。 λ噬菌體的生活史 溶菌生長(zhǎng)途徑 (lysis pathway) 溶源菌生長(zhǎng)途徑 (lysogenic pathway) 例 第 二 節(jié) 重組 DNA技術(shù) DNA Rebination Technique ? 相關(guān)概念 ? DNA克隆 ? 工具酶 ? 目的基因 ? 基因載體 ? 基本原理 ? 重組 DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 本節(jié)主要內(nèi)容 一 、 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone) 來(lái)自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 基因重組和基因工程 Geic Rebination and Geic Engineering 第 十 四 章 基因重組 ： 不同的 DNA分子間發(fā)生共價(jià)連接形成重組 DNA 分子。
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