基因表達(dá)和基因重組(已修改)
2025-01-15 17:44 本頁(yè)面
【正文】 基因重組和基因工程 Geic Rebination and Geic Engineering 第 十 四 章 基因重組 ： 不同的 DNA分子間發(fā)生共價(jià)連接形成重組 DNA 分子。 重組 DNA 質(zhì)粒 DNA 基因片段 重組 DNA技術(shù)發(fā)展史 pSC101 EcoRI Boyer 和 Cohen的實(shí)驗(yàn) 和pR65 大腸桿菌 pSC101 pR65 抗四環(huán)素 抗卡那霉素 EcoRI 抗卡那霉素基因 DNA連接酶 重組 DNA分子 培養(yǎng)平皿 四環(huán)素平板 卡那霉素基因 四環(huán)素 \卡那霉素基因 大腸桿菌 人體生長(zhǎng)激素釋放激素 (SS) 抑制和調(diào)節(jié)多種激素的作用 從動(dòng)物腦中提取 : 5mg50萬(wàn)只羊腦 基因工程 9升大腸桿菌 培養(yǎng)液 SS基因 基因載體 重組體 分 切 接 轉(zhuǎn) 篩 表 SS 第 一 節(jié) DNA的重組 DNA Rebination DNA重組 接合作用 (conjugation) 轉(zhuǎn)化作用 (transformation) 轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 (transduction) 轉(zhuǎn) 座 (transposition) 同源重組 (homologous rebination) 位點(diǎn)特異的重組 (sitespecific rebination) 發(fā) 生 在 同 源 序 列 間 的 重 組 稱 為 同 源 重 組(homologous rebination)， 又稱基本重組 。 是最基本的 DNA重組方式 ， 通過(guò)鏈的斷裂和再連接 ， 在兩個(gè) DNA分子同源序列間進(jìn)行單鏈或雙鏈片段的交換 。 一、同源重組 二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 （一）接合作用 當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞 、 或細(xì)菌通過(guò)菌毛相互接觸時(shí) ， 質(zhì)粒 DNA從一個(gè)細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 的 DNA轉(zhuǎn)移稱為接合作用(conjugation)。 可接合質(zhì)粒如 F 因子 (F factor) 質(zhì)粒 —— 細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 （二）轉(zhuǎn)化作用 通過(guò)自動(dòng)獲取或人為地供給外源 DNA， 使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型 ， 稱為轉(zhuǎn)化作用 (transformation)。 例：溶菌時(shí)，裂解的 DNA片段被另一細(xì)菌攝取。 （三）轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 當(dāng)病毒從被感染的 （ 供體 ） 細(xì)胞釋放出來(lái) 、 再次感染另一 （ 供體 ） 細(xì)胞時(shí) ， 發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的 DNA轉(zhuǎn)移及基因重組即為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用(transduction)。 λ噬菌體的生活史 溶菌生長(zhǎng)途徑 (lysis pathway) 溶源菌生長(zhǎng)途徑 (lysogenic pathway) 例 第 二 節(jié) 重組 DNA技術(shù) DNA Rebination Technique ? 相關(guān)概念 ? DNA克隆 ? 工具酶 ? 目的基因 ? 基因載體 ? 基本原理 ? 重組 DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 本節(jié)主要內(nèi)容 一 、 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone) 來(lái)自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 獲取同一拷貝的過(guò)程稱為 克隆化 (cloning)，即 無(wú)性繁殖 。 （一） DNA克隆 技術(shù)水平： 分子克隆 (molecular clone) 即 DNA 克隆 細(xì)胞克隆 個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物） DNA克隆 應(yīng)用酶學(xué)的方法 ， 在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì) （ 同源的或異源的 、 原核的或真核的 、 天然的或人工的 DNA） 與載體 DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 —— 復(fù)制子 (replicon)， 繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞 ， 篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 ， 再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA分子 ， 也稱 基因克隆或重組 DNA (reb
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