基因表達(dá)和基因重組-wenkub.com
2025-01-05 17:44 本頁(yè)面
【正文】 方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測(cè)試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 （五）遺傳疾病的預(yù)防 欲以基因工程方法高效表達(dá)人胰島素，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。 三、重組技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 （二）生 物制藥 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長(zhǎng)因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長(zhǎng)與分化 生長(zhǎng)素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類(lèi)白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。C 重組體 4. 人工接頭 (linker)連接 由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接 。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。C 重組體 配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點(diǎn)連接相似。 舉例： pBR322質(zhì)粒 質(zhì)粒 宿主細(xì)胞 ori 抗 Amp 宿主細(xì)菌 含 Amp培養(yǎng)基 多克隆位點(diǎn) + 多種酶切口 多克隆位點(diǎn) 限制性內(nèi)切酶 單一酶切口 多克隆位點(diǎn) ori 復(fù)制起始點(diǎn) 遺傳標(biāo)記 Amp polylinker 基因載體 λ噬菌體 DNA改造系統(tǒng) λgt系列（插入型，適用 cDNA克?。? EMBL系列（置換型，適用基因組克?。? 噬菌體 (phage) M13噬菌體 DNA改造系統(tǒng)（含 lacZ基因） M13mp系列 pUC系列 粘性質(zhì)粒 (cosmid) 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome, YAC) 細(xì)菌人工染色體 (bacterial artificial chromosome, BAC) 動(dòng)物病毒 DNA改造的載體 （如腺病毒，腺病毒相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒） 其他 二 、 重組 DNA技術(shù)基本原理 基本原理 目的基因的獲取 DNA導(dǎo)入受體菌 外源基因與載體的連接 克隆載體的選擇和構(gòu)建 重組體的篩選 克隆基因的表達(dá) 以 質(zhì) 粒 為 載 體 的 DNA 克 隆 過(guò) 程 （一）目的基因的獲取 1. 化學(xué)合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列 。 存在于細(xì)菌染色體外的 小型 環(huán)狀 DNA分子。 （四） 基因載體 定義： 為攜帶目的基因，實(shí)現(xiàn)其無(wú)性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 同尾酶 （三）目的基因 目的基因 需要克隆的 DNA片段。 分類(lèi) Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名 ， 用大寫(xiě)； 第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫(xiě)； 第四個(gè)字母代表株； 用羅
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