【正文】 建立PCR技術(shù)。 液體培養(yǎng)基中細(xì)菌細(xì)胞濃度一般只能達(dá)到108~109個(gè)/mL。 （ ） 微生物都是單倍體?；罹妹浪{(lán)或TTC染色，死菌常用革蘭氏染色法（鑒別染色法，屬正染色）和莢膜染色法（負(fù)染色）。分述如下：（1）細(xì)胞壁①證明細(xì)胞壁存在的方法：a、染色后再光鏡下觀察；b、細(xì)菌超薄切片，電鏡觀察。短肽尾：連在N乙酰胞壁酸（M）分子上。（2）細(xì)胞膜和間體細(xì)菌細(xì)胞膜不同于真核細(xì)胞膜的功能有（要特別關(guān)注）：①合成細(xì)胞壁各種組分（LPS、肽聚糖、磷壁酸）和莢膜等大分子的場(chǎng)所；②氧化磷酸化或光合磷酸化的產(chǎn)能基地；③許多酶（如β半乳糖苷酶、有關(guān)細(xì)胞壁和莢膜的合成酶、ATP酶）和電子傳遞鏈組分的所在部位；④鞭毛的著生點(diǎn)和提供其運(yùn)動(dòng)所需的能量等。（6）鞭毛和菌毛（都由蛋白質(zhì)構(gòu)成）鞭毛：①數(shù)目一至十根，長(zhǎng)在膜上，具運(yùn)動(dòng)功能（半固體直立柱培養(yǎng)基中用穿刺接種后，則穿刺線周圍有呈渾濁的擴(kuò)散區(qū)；平板培養(yǎng)基上菌落形狀大而薄且不規(guī)則，邊緣不平整。②產(chǎn)芽孢細(xì)菌主要為革蘭氏陽性桿菌，如枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、破傷風(fēng)梭菌。5．細(xì)菌的菌落菌落：?jiǎn)蝹€(gè)微生物細(xì)胞或孢子在固體培養(yǎng)基上繁殖形成的肉眼可見的群體菌苔：指多個(gè)同種菌落連成一片細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，其細(xì)胞間隙中充滿著毛細(xì)管水，故菌落為濕潤(rùn)，較光滑、較透明、較黏稠、易挑取、質(zhì)地均勻。3．細(xì)胞壁中含有肽聚糖，構(gòu)造更似革蘭氏陰性細(xì)菌，對(duì)青霉素和溶菌酶敏感。5．線粒體有氧時(shí)形成很多結(jié)構(gòu)完整的線粒體，缺氧時(shí)，只能形成無嵴的線粒體。其中前四者可產(chǎn)生無性孢子，后四者可產(chǎn)生有性孢子。⑤活細(xì)胞內(nèi)寄生?？莅撸菏侵参锶~片上的植物病毒群體。刺突、尾板固著于細(xì)胞表面，一個(gè)細(xì)菌表面有多個(gè)吸附位點(diǎn)，脂多糖、脂蛋白、磷壁酸、鞭毛、菌毛都有可能成為吸附位點(diǎn)。這一點(diǎn)與噬菌體不同。+DNA或+RNA是指與mRNA核苷酸序列一致，而DNA或RNA是指與mRNA核苷酸序列互補(bǔ)。（3）平穩(wěn)期：感染后的宿主已全部裂解，噬菌體效價(jià)達(dá)到最高點(diǎn)后的時(shí)期。2．?dāng)M病毒是一類包裹在植物病毒粒子中的類病毒，它侵染的對(duì)象不是高等動(dòng)植物，而是小小的植物病毒，故稱分子寄生物，擬病毒為環(huán)狀單鏈RNA，必須與輔助病毒結(jié)合才能感染和復(fù)制。7．鼠疫：由鼠疫桿菌引起，借鼠蚤傳播的烈性傳染病，為G—。自養(yǎng)微生物和自養(yǎng)植物的碳源和氮源都是無機(jī)物，但異養(yǎng)微生物的氮源也可是無機(jī)氮化物。請(qǐng)注意：把這一組概念同按營(yíng)養(yǎng)方式來劃分的自養(yǎng)型和異養(yǎng)型區(qū)分開來。其中基團(tuán)移位是一種特殊的主動(dòng)運(yùn)輸方式，其特點(diǎn)是物質(zhì)經(jīng)過化學(xué)修飾才進(jìn)行跨膜運(yùn)輸（一般的運(yùn)輸不需要經(jīng)過化學(xué)修飾），這一特殊的方式是在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH可用磷酸緩沖液如K2HPO4/KH2PO4或CaCO3作為備用堿進(jìn)行調(diào)節(jié)，也可用NaHCO3調(diào)節(jié)。如培養(yǎng)真菌的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。（3）按功能可分為：選擇性培養(yǎng)基、鑒別性培養(yǎng)基。2．HMP途徑不經(jīng)EMP和TCA途徑而徹底氧化葡萄糖可產(chǎn)生大量的能量，1分子葡萄糖徹底氧化生成35ATP。（2）無氧呼吸：①氫受體為無機(jī)氧化物（個(gè)別為有機(jī)氧化物）；②產(chǎn)能效率低；③遞氫的是部分呼吸鏈；④氫受體為無機(jī)氧化物的無氧呼吸又分為硝酸鹽呼吸（如反硝化細(xì)菌）、硫酸鹽呼吸、硫呼吸、鐵呼吸、碳酸鹽呼吸；⑤氫受體為有機(jī)物的常常是延胡索酸呼吸，此時(shí)的產(chǎn)物是琥珀酸。由于發(fā)酵都是通過底物水平磷酸化產(chǎn)能，因而產(chǎn)能效率低。三、分解代謝和合成代謝的聯(lián)系分解代謝和合成代謝關(guān)系密切，是相反的過程。厭氧乙酰CoA途徑又稱活性乙酸途徑。（3）豆科植物根瘤菌則通過豆血紅蛋白。兩種方法中都要使樣品干燥。間接法：為活菌計(jì)數(shù)法（直接法中活菌、死菌皆被統(tǒng)計(jì)）。2．典型生長(zhǎng)曲線（適合于單細(xì)胞微生物）生長(zhǎng)速率常數(shù)：指每小時(shí)分裂的代數(shù)（用R表示）根據(jù)R的不同可把典型生長(zhǎng)曲線分成延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。穩(wěn)定期到來的原因：①營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)限制因子的耗盡；②營(yíng)養(yǎng)物的比例失調(diào)；③有害代謝產(chǎn)物（如酸、醇、毒素、H2O2等）的積累；④PH、氧化還原勢(shì)等物化條件越來越不適宜。耐氧菌既無呼吸鏈，也無過氧化氫酶，有氧時(shí)，產(chǎn)生了O2—，由于具有SOD和過氧化物酶，可通過 O2— →H2O2→H2O這一途徑解除O2—的毒害。四、微生物培養(yǎng)法厭氧菌培養(yǎng)的三大件：厭氧罐技術(shù)、厭氧手套箱技術(shù)、亨蓋特滾管技術(shù)。具體措施有低溫、缺氧、干燥、高滲透壓、高酸度、防腐劑等。LTH用于牛奶消毒只要在63℃下30min即可。 ）越大，消毒效果越好，某藥劑的p放線菌酮抑制真核生物核糖體60s亞單位的功能相似的酶。2．1952年A（現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有線狀的質(zhì)粒）（2）特點(diǎn)：①具超螺旋結(jié)構(gòu)；②～300kb(約為核基因組的1%)。②R質(zhì)粒（R因子）：由兩個(gè)相連的DNA片段組成，即抗性轉(zhuǎn)移因子（RTF）和抗性決定子（含抗藥性基因）。但實(shí)際上，細(xì)菌對(duì)藥物的這種抗性突變與接觸藥物無關(guān)，這是細(xì)菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生自發(fā)突變的結(jié)果。結(jié)果：來自甲管的50皿中，各皿中抗性菌落數(shù)相差極大，而來自乙管的各皿間數(shù)目基本相同。③涂布并噴T1：取6個(gè)平板用涂布器均勻涂布一遍。②影?。河冒袦缇z絨布的木質(zhì)圓柱為印章，沾取平板1上的菌落，先接種到不含鏈霉素的平板2上，在接種到含鏈霉素的選擇性培養(yǎng)基平板3上（注意：順序不能反過來）③培養(yǎng)后，3上出現(xiàn)了抗鏈霉素菌落，挑取2上的對(duì)應(yīng)菌落至不含鏈霉素的培養(yǎng)液4中培養(yǎng)，再涂布在平板5上。5．誘變劑和致癌物的檢測(cè)——Ames試驗(yàn)“三致”作用（致突變、致畸變和致癌變）可通過艾姆氏試驗(yàn)檢出，步驟為：①將可疑“三致”試樣與鼠肝勻漿（含加氧酶等）保溫一段時(shí)間后，吸入濾紙片中。轉(zhuǎn)染是指用病毒核酸去感染其宿主細(xì)胞或其原生質(zhì)體，可增殖出一群正常病毒的后代的現(xiàn)象。3．接合（1）概念：細(xì)菌的接合是指雄性細(xì)胞（供體菌）通過性菌毛與雌性細(xì)胞（受體菌）直接接合，把F質(zhì)?；蚱鋽y帶的不同長(zhǎng)度的核基因片斷傳遞給后者，使后者獲得若干新遺傳性狀的現(xiàn)象。衰退的防止：①控制傳代次數(shù)；②創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件；③利用不易衰退的細(xì)胞傳代；④采用有效的菌種保藏方法。飲用水的微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)不超過100個(gè)/mL（37℃，培養(yǎng)24h），大腸菌群數(shù)不超過3個(gè)/L（37℃，培養(yǎng)48h）注意：上述標(biāo)準(zhǔn)要把握3點(diǎn)：①細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)必須同時(shí)符合才是合格的飲用水；②必須按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)；③大腸菌群并不一定全是大腸桿菌。在PCR技術(shù)中用到的耐高溫DNA聚合酶就是取自嗜熱菌（最常見的是“Taq”酶，現(xiàn)在多用pfu酶）。（5）嗜鹽微生物必須在高鹽濃度下才能生長(zhǎng)的微生物。實(shí)例：①如纖維素分解菌和好氧性自生固氮菌（前者可為后者提供有機(jī)酸碳源，后者可為前者提供有機(jī)氮源，分開可獨(dú)立生活）；②人體腸道中正常菌群與人。（2）微生物在氮素循環(huán)中的作用①生物固氮（N2→NH3）；②硝化作用（NH3→HNO2→HNO3）；③同化性硝酸鹽還原作用（NO3—→NH4+→含氮有機(jī)物，所有綠色植物、多數(shù)真菌和部分原核生物可進(jìn)行此反應(yīng)）；④氨化作用（含氮有機(jī)物→NH3）；⑤銨鹽同化作用（NH4+→含氮有機(jī)物）；⑥異化性硝酸鹽還原作用（NO3—→NO2—）；⑦反硝化作用（NO3—→NN2O）；⑧亞硝酸氨化作用（NO2—→NH3）。2．用微生物治理污染原理：微生物污水處理是指微生物以污水中的有機(jī)物作為營(yíng)養(yǎng)物，將其分解利用，使微生物大量生長(zhǎng)繁殖，從而使污水得到凈化，以供重新利用。生物膜是指生長(zhǎng)在潮濕、通氣的固體表面上的一層由多種活微生物構(gòu)成的粘滑、暗色菌膜，能氧化分解污水中的有機(jī)物或某些有毒物質(zhì)。2．決定傳染病結(jié)局的三大因素：病原體、宿主的免疫力、環(huán)境因素（1）病原體：病原體能否引起宿主患傳染病，取決于它的毒力、侵入數(shù)量和侵入門徑。沼氣發(fā)酵又稱甲烷形成，就其生物化學(xué)本質(zhì)來說就是產(chǎn)甲烷菌在厭氧條件下，利用H2還原CO2以產(chǎn)生CH4的過程。（2）COD：即化學(xué)需氧量，也是表示水中有機(jī)物含量的間接指標(biāo)，是指1L污水中的有機(jī)物，利用強(qiáng)氧化劑（如K2Cr2O7或KMnO4）進(jìn)行氧化時(shí)所消耗氧的mg數(shù)。4．磷素循環(huán)細(xì)胞內(nèi)含磷最多的成分是RNA分子。常見實(shí)例：①噬菌體與宿主細(xì)菌；②蛭弧菌寄生在其他細(xì)菌內(nèi)；③冬蟲夏草（真菌寄生于昆蟲）4．拮抗：指由某種生物所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長(zhǎng)發(fā)育甚至殺死它們的一種相互關(guān)系。%。（3）嗜酸微生物嗜酸菌只能生活在低PH（﹤4）條件下，在中性下即死亡。腐爛（腐敗）：細(xì)菌、酵母菌引起的物體變軟、發(fā)臭性的變化。最有效的保藏方法：冷凍干燥保藏法和液氮保藏法。（3）三種接合類型①F+F—→F++F+②HfrF———→Hfr+F—③F′F—→F′+F′ 4．原生質(zhì)體融合通過人工的方法，使遺傳性狀不同的兩種細(xì)胞的原生質(zhì)體發(fā)生融合和遺傳重組，形成具有雙親性狀的融合子。一般用溫和噬菌體作為普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)的媒介。③經(jīng)培養(yǎng)后，如果平板上無大量菌落產(chǎn)生，說明試樣中不含誘變劑；如果紙片周圍有一抑制圈，外周出現(xiàn)大量菌落，說明試樣中有某種高濃度的誘變劑存在；在紙片周圍長(zhǎng)有大量菌落，說明試樣中有濃度適當(dāng)?shù)恼T變劑存在。（2）常見誘變劑：①堿基類似物：可引起置換，如5溴尿嘧啶（Bu）是胸腺嘧啶類似物。分析：在接觸噬菌體之前，抗性突變型已經(jīng)出現(xiàn)并分裂了數(shù)次，重新涂布會(huì)把它們分散開并各自成菌落。結(jié)論：噬菌體僅起著淘汰原始的未突變的敏感菌和甄別抗噬菌體突變型的作用。甲管的菌液先分裝在50支小試管中（），與乙管同時(shí)保溫24～36h。其他還有如Ri質(zhì)粒、mega質(zhì)粒、降解性質(zhì)粒。coli等細(xì)菌決定性別并有轉(zhuǎn)移能力的質(zhì)粒。3．1956年植物病毒的重建實(shí)驗(yàn)證明了在RNA病毒中，遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)也是核酸——RNA。寡霉素抑制線粒體的ATP酶?；前返慕Y(jié)構(gòu)與細(xì)菌的生長(zhǎng)因子——對(duì)氨基苯甲酸（PABA）高度相似，兩者間會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用。7．化學(xué)殺毒劑、消毒劑和治療劑了解下列三個(gè)概念：最低抑制濃度、半致死劑量、最低致死劑量。其中火焰灼燒法是一種最徹底的干熱滅菌法，接種環(huán)、接種針的滅菌。分為殺菌和溶菌兩種，殺菌的結(jié)果是菌體全死，形體尚存，尚可計(jì)數(shù)；溶菌指菌體殺死后，細(xì)胞發(fā)生了溶化，消失的現(xiàn)象。3．PH根據(jù)不同微生物的最適PH的不同可分為嗜堿微生物、耐堿微生物、嗜酸微生物、耐酸微生物。3．微生物的連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)是相對(duì)于典型生長(zhǎng)曲線所采用的單批培養(yǎng)而言的，要點(diǎn)是防止單批培養(yǎng)中穩(wěn)定期到來的原因出現(xiàn)。（2）指數(shù)期（又稱對(duì)數(shù)期）特點(diǎn)：①R最大（R﹥0且為一常數(shù)）故代謝時(shí)間最短；②細(xì)胞平衡生長(zhǎng)（菌體各部分的成分均勻，故生物學(xué)性狀最典型）；③酶系活躍，代謝旺盛。⑤美藍(lán)等特殊染料染色后，在顯微鏡下進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，一定要先按比例稀釋待測(cè)樣品，且要充分混勻。青霉素的抑菌機(jī)理：轉(zhuǎn)肽作用可被青霉素抑制，青霉素是肽聚糖單體五肽尾末端的D丙氨酰D丙氨酸的結(jié)構(gòu)類似物，兩者之間競(jìng)爭(zhēng)轉(zhuǎn)肽酶的活性中心。2．生物固氮只有原核生物和古細(xì)菌類才有固氮能力。如與EMP途徑和TCA循環(huán)有關(guān)的回補(bǔ)順序的有10條，它們分別圍繞著回補(bǔ)磷酸烯醇式丙酮酸和草酰乙酸這兩種關(guān)鍵性中間代謝物來進(jìn)行。（想一想這是為什么？）2．光能營(yíng)養(yǎng)微生物 產(chǎn)氧 真核生物：藻類及其他綠色植物光能營(yíng)養(yǎng)型生物 原核生物：藍(lán)細(xì)菌 不產(chǎn)氧：光合細(xì)菌（厭氧菌）、嗜藍(lán)菌（1） 非循環(huán)光合磷酸化各種綠色植物、藻類核藍(lán)細(xì)菌共有，特點(diǎn)有：①電子傳遞途徑屬非循環(huán)式；②在有氧條件下進(jìn)行；③含PSⅠ和PSⅡ兩個(gè)光合系統(tǒng)；④PSⅡ產(chǎn)ATP和氧氣，PSⅠ產(chǎn)還原力，還原為NADPH2中的[H]來自H2O分子的光解產(chǎn)物H+和電子。②通過HMP途徑的發(fā)酵。只有琥珀酸脫氫酶例外，位于線粒體內(nèi)膜或細(xì)菌質(zhì)膜上。如伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基（EMB）可用來鑒別大腸桿菌，伊紅為酸性染料且可發(fā)綠色熒光，美藍(lán)為堿性染料，低酸度時(shí)兩者可結(jié)合，可作為產(chǎn)酸指示劑，當(dāng)然是伊紅直接與菌體表面結(jié)合（產(chǎn)生的有機(jī)酸使菌體表面帶H+），而且這兩種染料還可以抑制G+細(xì)菌和一些難培養(yǎng)的G菌，從這一點(diǎn)來看，本培養(yǎng)基也屬于抑制性選擇培養(yǎng)基。本分類一般指前三種培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基是一種現(xiàn)代培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基加的凝固劑較少，%的瓊脂即可，可用于細(xì)菌動(dòng)力觀察、趨化性研究、細(xì)菌和酵母菌（因其為水生性）的菌種保藏、噬菌體的效價(jià)測(cè)定。組合培養(yǎng)基（合成培養(yǎng)基）可用于分類、鑒定。1．選用和設(shè)計(jì)培養(yǎng)基的四原則：目的明確、營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)、理化適宜、經(jīng)濟(jì)節(jié)約。6．水所有微生物代謝活動(dòng)中都需要水，其中一部分自養(yǎng)型微生物可利用水中的氫來還原CO2以合成糖類如藍(lán)細(xì)菌、硝化細(xì)菌。氮源一般不作能源，少數(shù)自養(yǎng)微生物利用銨鹽，硝酸鹽作為氮源及能源。（ ）2．一個(gè)噬菌斑含有一個(gè)噬菌體。2．禽流感：在動(dòng)物間傳播，目前引起人們關(guān)注的是一種高致病性的H5N1病毒（ssRNA）3．非典：主要是由SARS冠狀病毒（SARSCoV）引起，SARS病毒是單股正鏈RNA病毒（+ssRNA），為有包膜的病毒。溫和噬菌體的特點(diǎn)：①為dsDNA；②具整合能力（處于整合態(tài)的噬菌體核酸，稱作前噬菌體）；③具同步復(fù)制能力。通常以感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，以噬菌體效價(jià)（噬菌斑數(shù)/mL）為縱坐標(biāo)畫出的曲線。dsDNA→+mRNA，如Φx174；第Ⅲ型：177。植物病毒侵入都是被動(dòng)的，可通過①昆蟲刺吸式口器損傷細(xì)胞；②借帶病汁液等植物傷口相接觸；③借人工嫁接時(shí)的傷口等三種方式而侵入。6．噬菌體的繁殖：吸附→侵入→增殖→成熟→裂解烈性噬菌體：凡在短時(shí)間內(nèi)能連續(xù)完成這五個(gè)階段而實(shí)現(xiàn)其繁殖的噬菌體。每一個(gè)噬菌斑一般是由一個(gè)噬菌體粒子形成的。 第三章 病毒和亞病毒（非細(xì)胞型微生物） 病毒：核酸（一種）、蛋白質(zhì)非細(xì)胞生物 類病毒 亞病毒 擬病毒：RNA（不具單獨(dú)侵染性）