【正文】 置注射器的最小吸取量： 毫升四、單細(xì)胞（孢子）分離t 一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行；t 操作難度與細(xì)胞或個體的大小成反比；五、選擇培養(yǎng)分離微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化：t 抑制大多數(shù)其它微生物的生長；t 使待分離的微生物生長更快； 使待分離的微生物在群落中的數(shù)量上升，方便用稀釋法對其進(jìn)行純化。試列舉在顯微觀察中通過改變樣 品的反差以改善觀察效果的技術(shù)及方法。細(xì)胞壁堅韌，菌體較硬。用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。B、磷壁酸革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁上特有的化學(xué)成分，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。貯藏磷元素；增強(qiáng)某些致病菌對宿主細(xì)胞的粘連、避免被白細(xì)胞吞噬以及抗補(bǔ)體的作用；可作為細(xì)菌分類、鑒定的依據(jù)革蘭氏陽性細(xì)菌特異表面抗原的物質(zhì)基礎(chǔ)；噬菌體的特異性吸附受體；能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)自溶素(autolysin)的活力，防止細(xì)胞因自溶而死亡。類脂A是革蘭氏陰性細(xì)菌致病物質(zhì)——內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ)；具有控制某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的部分選擇性屏障功能；許多噬菌體在細(xì)胞表面的吸附受體；C、外膜蛋白(outer membrane protein) 嵌合在LPS和磷脂層外膜上的蛋白。用抗酸性染色對宿主體內(nèi)的分枝桿菌病原體進(jìn)行檢測6）細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌： （參見P46）缺壁突變——L型細(xì)菌實驗室或宿主體內(nèi)形成 基本去盡——原生質(zhì)體（G+）缺壁細(xì)菌 人工去壁部分去除——球狀體（G）在自然界長期進(jìn)化中形成——枝原體（1）L型細(xì)菌（Lform of bacteria）細(xì)菌在某些環(huán)境條件下（實驗室或宿主體內(nèi)）通過自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷變異型。（4）枝原體(Mycoplasma)在長期進(jìn)化過程中形成的、適應(yīng)自然生活條件的無細(xì)胞壁的原核生物。當(dāng)磷脂分子中二者同時存在時，在一定條件下就阻礙了形成晶格結(jié)構(gòu)所需要的有秩序排列。hopanoid類甾醇，其作用被認(rèn)為也是穩(wěn)定細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)90%的化石燃料的前體物質(zhì)是kerogen（油原，或稱油母巖質(zhì)）Kerogen中細(xì)菌特有的hopanoid類甾醇占有很高的比例Kerogen是由于細(xì)菌的活動而形成在地下沉積物中細(xì)菌特有的hopanoid類甾醇的含量高達(dá)101112噸，與目前地球上存在的活的生物（living organisms）體內(nèi)含有的有機(jī)碳的含量總和相當(dāng)。PHB于1929年被發(fā)現(xiàn)，至今已發(fā)現(xiàn)60屬以上的細(xì)菌能合成并貯藏。由含精氨酸和天冬氨酸殘基（1:1）的分枝多肽所構(gòu)成，分子量在25000～125000。3）磁小體(megnetosome) （參見P50）趨磁細(xì)菌細(xì)胞中含有的大小均勻、數(shù)目不等的Fe3O4顆粒，外有一層磷脂、蛋白或糖蛋白膜包裹。二種蛋白質(zhì)相互交連，形成一個堅硬的結(jié)構(gòu)，可耐受一定的壓力。（相差顯微鏡直接觀察；芽孢染色）3）芽孢的形成與芽孢的萌發(fā)過程 （參見P5354）4）芽孢的耐熱機(jī)制 （參見P55）芽孢與母細(xì)胞相比不論化學(xué)組成、細(xì)微結(jié)構(gòu)、生理功能等方面都完全不同（表33）滲透調(diào)節(jié)皮層膨脹學(xué)說芽孢衣對多價陽離子和水分的透性很差皮層的離子強(qiáng)度很高，產(chǎn)生極高的滲透壓奪取芽孢核心的水分，結(jié)果造成皮層的充分膨脹。 經(jīng)特殊的莢膜染色，特別是負(fù)染色（又稱背景染色） 后可在光學(xué)顯微鏡清楚地觀察到它的存在。（3）細(xì)菌的趨避運(yùn)動鞭毛的功能是運(yùn)動，這是原核生物實現(xiàn)其趨性（taxis）即趨向性的最有效方式。性毛一般見于革蘭氏陰性細(xì)菌的雄性菌株（即供體菌）中，其功能是向雌性菌株（即受體菌）傳遞遺傳物質(zhì)。（參見P 30）三、細(xì)胞結(jié)構(gòu)在細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能上，古生菌既有類似真細(xì)菌之處，也有類似真核生物之處，還具有一些自己獨特的特點。霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲（hypha）構(gòu)成。其生長過程只表現(xiàn)為菌絲的延長和細(xì)胞核的裂殖增多以及細(xì)胞質(zhì)的增加。4）附著枝：若干寄生真菌由菌絲細(xì)胞生出12個細(xì)胞的短枝，以將菌絲附著于宿主上，這種特殊的結(jié)構(gòu)即附著枝。含有蟲草酸，是名貴中藥。c）減數(shù)分裂：具有雙倍體的細(xì)胞核經(jīng)過減數(shù)分裂，核中的染色體數(shù)目又恢復(fù)到單倍體狀態(tài)。有一些霉菌，至盡尚未發(fā)現(xiàn)其生活史中有有性繁殖階段，這類真菌稱為半知菌接合孢子、孢囊孢子、子囊孢子、分生孢子霉菌孢子與細(xì)菌芽孢的比較二、 酵母菌（一）概念酵母菌（yeast）是一群單細(xì)胞的真核微生物。（五）繁殖方式和生活史無性繁殖1）芽殖主要的無性繁殖方式，成熟細(xì)胞長出一個小芽，到一定程度后脫離母體繼續(xù)長成新個體。微生物、動物、植物之間存在“營養(yǎng)上的統(tǒng)一性”二、營養(yǎng)物質(zhì)及其生理功能微生物與動植物營養(yǎng)要素的比較微生物細(xì)胞的化學(xué)成分及分析微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)及其生理功能（略，詳見P75~81）三、微生物的營養(yǎng)類型生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì) 自養(yǎng)型生物 異養(yǎng)型生物生物生長過程中能量的來源 光能營養(yǎng)型 化能營養(yǎng)型光能自養(yǎng)型：以光為能源，不依賴任何有機(jī)物即可正常生長光能異養(yǎng)型：以光為能源，但生長需要一定的有機(jī)營養(yǎng)化能自養(yǎng)型：以無機(jī)物的氧化獲得能量，生長不依賴有機(jī)營養(yǎng)物化能異養(yǎng)型：以有機(jī)物的氧化獲得能量，生長依賴于有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)微生物營養(yǎng)類型(Ⅰ) （參見P81）微生物的營養(yǎng)類型(Ⅱ) （參見P82）1．光能無機(jī)自養(yǎng)型（光能自養(yǎng)型）能以CO2為主要唯一或主要碳源；進(jìn)行光合作用獲取生長所需要的能量；以無機(jī)物如HH2S、S等作為供氫體或電子供體，使CO2還原為細(xì)胞物質(zhì)；光能例如，藻類及藍(lán)細(xì)菌等和植物一樣，以水為電子供體（供氫體），進(jìn)行產(chǎn)氧型的光合作用，合成細(xì)胞物質(zhì)。有機(jī)物通常既是碳源也是能源；大多數(shù)細(xì)菌、真菌、原生動物都是化能有機(jī)異養(yǎng)型微生物；所有致病微生物均為化能有機(jī)異養(yǎng)型微生物；腐生型(metatrophy)：（參見P82）可利用無生命的有機(jī)物(如動植物尸體和殘體)作為碳源；寄生型(paratrophy)：寄生在活的寄主機(jī)體內(nèi)吸取營養(yǎng)物質(zhì),離開寄主就不能生存；在腐生型和寄生型之間還存在中間類型： 兼性腐生型(facultive metatrophy)； 兼性寄生型(facultive paratrophy)；不同營養(yǎng)類型之間的界限并非絕對（P82）：異養(yǎng)型微生物并非絕對不能利用CO2；自養(yǎng)型微生物也并非不能利用有機(jī)物進(jìn)行生長；有些微生物在不同生長條件下生長時,其營養(yǎng)類型也會發(fā)生改變；例如紫色非硫細(xì)菌(purple nonsulphur bacteria)：沒有有機(jī)物時，同化CO2， 為自養(yǎng)型微生物；有機(jī)物存在時，利用有機(jī)物進(jìn)行生長，為異養(yǎng)型微生物；光照和厭氧條件下，利用光能生長，為光能營養(yǎng)型微生物；黑暗與好氧條件下，依靠有機(jī)物氧化產(chǎn)生的化學(xué)能生長，為化能營養(yǎng)型微生物；微生物營養(yǎng)類型的可變性無疑有利于提高其對環(huán)境條件變化的適應(yīng)能力5．營養(yǎng)缺陷型（見P82）某些菌株發(fā)生突變(自然突變或人工誘變)后，失去合成某種(或某些)對該菌株生長必不可少的物質(zhì)(通常是生長因子如氨基酸、維生素)的能力，必須從外界環(huán)境獲得該物質(zhì)才能生長繁殖，這種突變型菌株稱為營養(yǎng)缺陷型(auxotroph)，相應(yīng)的野生型菌株稱為原養(yǎng)型(prototroph)。物理、化學(xué)條件適宜pH培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。好氧性微生物：+,以+～+；厭氧性微生物：低于+；兼性厭氧微生物：+, +。（～, αw過低時,微生物生長的遲緩期延長,比生長速率和總生長量減少。任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長所需要六大營養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理（參見P85）；常規(guī)高壓蒸汽滅菌： ,℃1530分鐘；,℃1530分鐘某些成分進(jìn)行分別滅菌；過濾除菌；一、選用和設(shè)計培養(yǎng)基的原則和方法在微生物學(xué)研究和生長實踐中，配置合適的培養(yǎng)基是一項最基本的要求。3．化能無機(jī)自養(yǎng)型（化能自養(yǎng)型）生長所需要的能量來自無機(jī)物氧化過程中放出的化學(xué)能；以CO2或碳酸鹽作為唯一或主要碳源進(jìn)行生長時，利用HH2S、Fe2+、NH3或NO2等作為電子供體使CO2還原成細(xì)胞物質(zhì)。子囊孢子萌發(fā)形成單倍體營養(yǎng)細(xì)胞。如水果、蔬菜、葉子、樹皮等處，及葡萄園和果園土壤中等。d）霉菌的有性繁殖存在同宗配合和異宗配合兩種情況。（五）霉菌繁殖方式及生活史繁殖方式 無性孢子霉菌的繁殖方式 有性孢子 菌絲斷片1）無性孢子繁殖不經(jīng)兩性細(xì)胞配合，只是營養(yǎng)細(xì)胞的分裂或營養(yǎng)菌絲的分化（切割）而形成新個體的過程。真菌禾生刺盤孢（C. Graminicola）；M. ，相當(dāng)于我們用高壓蒸汽滅菌壓力（）的5080倍。菌絲的特化營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲對于不同的真菌來說，在它們的長期進(jìn)化過程中，對于相應(yīng)的環(huán)境條件已有了高度的適應(yīng)性，并明顯地表現(xiàn)在產(chǎn)生各種形態(tài)和功能不同的特化結(jié)構(gòu)上。有用物品的生產(chǎn)；風(fēng)味食品、酒精、抗生素（青霉素、灰黃霉素）、有機(jī)酸（檸檬酸、葡萄糖酸、延胡索酸等）、酶制劑（淀粉酶、果膠酶、纖維素酶等）、 維生素、甾體激素等。親水頭（甘油）與疏水尾（烴鏈）間是通過醚鍵而不是酯鍵連接的；細(xì)胞膜的化學(xué)組分存在多樣性；古生菌的細(xì)胞質(zhì)膜中存在著獨特的單分子層膜或單、雙分子層混合膜，而真細(xì)菌或真核生物的細(xì)胞質(zhì)膜都是雙分子層。t 在細(xì)胞構(gòu)造上與真細(xì)菌較為接近，同屬原核生物。細(xì)菌細(xì)胞壁以外的構(gòu)造 ——— 菌毛(fimbria，復(fù)數(shù)fimbriae)長在細(xì)菌體表的纖細(xì)、中空、短直、數(shù)量較多的蛋白質(zhì)類附屬物，具有使菌體附著于物體表面的功能。 （詳見P58）細(xì)菌細(xì)胞壁以外的構(gòu)造 ——— 鞭毛(flagellum,復(fù)flagella)1) 概念 （參見P59）某些細(xì)菌細(xì)胞表面著生的一至數(shù)十條長絲狀、螺旋形的附屬物，具有推動細(xì)菌運(yùn)動功能，為細(xì)菌的“運(yùn)動器官”。伴孢晶體對200多種昆蟲尤其是鱗翅目的幼蟲有毒殺作用，因而可將這類產(chǎn)伴孢晶體的細(xì)菌制成有利于環(huán)境保護(hù)的生物農(nóng)藥——細(xì)菌殺蟲劑。芽孢是細(xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)態(tài)細(xì)胞；產(chǎn)芽孢細(xì)菌的保藏多用其芽孢。功能：調(diào)節(jié)細(xì)胞比重以使細(xì)胞漂浮在最適水層中獲取光能、O2和營養(yǎng)物質(zhì)專性好氧的鹽桿菌屬（Halobacterium）的細(xì)菌，卻生活在含氧極少的飽和鹽水中，它們細(xì)胞中氣泡顯著，其作用被認(rèn)為是使菌體浮于鹽水表面，以保證細(xì)胞更接近空氣。2）貯藏物(reserve materials)：微生物儲藏物的特點及生理功能：不同微生物其儲藏性內(nèi)含物不同（例如厭氣性梭狀芽孢桿菌只含PHB，大腸桿菌只儲藏糖原，但有些光和細(xì)菌二者兼有）微生物合理利用營養(yǎng)物質(zhì)的一種調(diào)節(jié)方式當(dāng)環(huán)境中缺乏能源而碳源豐富時，細(xì)胞內(nèi)就儲藏較多的碳源類內(nèi)含物，甚至達(dá)到細(xì)胞干重的50%，如果把這樣的細(xì)胞移入有氮的培養(yǎng)基時，這些儲藏物將被作為碳源和能源而用于合成反應(yīng)。③異染粒(metachromatic granules)～，是無機(jī)偏磷酸的聚合物，一般在含磷豐富的環(huán)境下形成。含水量約80%。細(xì)胞膜是一個重要的代謝活動中心。疏水的非極性端3）細(xì)胞膜的化學(xué)組成與結(jié)構(gòu)模型：（1）磷脂 （參見p47）親水的極性端在極性頭的甘油3C上，不同種微生物具有不同的R基，如磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰肌醇等。及恢復(fù)成有細(xì)胞壁的正常結(jié)構(gòu)。脂蛋白(lipoprotein)是一種通過共價鍵使外膜層牢固地連接在肽聚糖內(nèi)壁層上的蛋白，分子量約為7200。脂多糖的主要功能LPS結(jié)構(gòu)的多變，決定了革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞表面抗原決定簇的多樣性；根據(jù)LPS抗原性的測定，沙門氏菌屬(Salmonella)的抗原型多達(dá)2107種，一般都源自O(shè)特異側(cè)鏈種類的變化。其含量與培養(yǎng)條件關(guān)系不大。革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁肽聚糖(peptidoglycan)磷壁酸（teichoic acid）又稱粘肽(mucopeptide)、胞壁質(zhì)(murein)或粘質(zhì)復(fù)合物(mucoplex)，是真細(xì)菌細(xì)胞壁中的特有成分。一般細(xì)菌的大小范圍： ~ 1 mm （直徑）~ 1 mm （直徑） X 1~ 80 mm（長度）~ 1 mm （直徑） X 1~ 50 mm（長度）(長度是菌體兩端點之間的距離，而非實際長度)測量方法顯微鏡測微尺顯微照相后根據(jù)放大倍數(shù)進(jìn)行測算（二）大小細(xì)菌大小測量結(jié)果的影響因素 （參見 P 31）個體差異；干燥、固定后的菌體會一般由于脫水而比活菌體縮短1/31/4；染色方法的影響，一般用負(fù)染色法觀察的菌體較大；幼齡細(xì)菌一般比成熟的或老齡的細(xì)菌大；環(huán)境條件，如培養(yǎng)基中滲透壓的改變也會導(dǎo)致細(xì)胞大小的變化。桿狀細(xì)菌的排列方式常因生長階段和培養(yǎng)條件而發(fā)生變化，一般不作為分類依據(jù)。一、顯微鏡的種類及原理1. 普通光學(xué)顯微鏡復(fù)式顯微鏡簡單顯微鏡光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)是多少？為什么？目鏡：10 ~ 15 ╳；物鏡： 100 ╳；總放大倍數(shù)1000~1500 ╳；如何實現(xiàn)光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)？其原理？使用油鏡，即在100