【正文】 氨基脫水縮合形成的鍵。 非蛋白質(zhì)氨基酸：不構(gòu)成蛋白質(zhì)氨基酸； 150 多種，多為標(biāo)準(zhǔn) AA 衍生物，還有 β， γ， δ氨基酸， D型氨基酸。如脂類、糖類和氨基酸性質(zhì)的系統(tǒng)研究； 發(fā)現(xiàn)可溶性催化劑 (酶 ) 建立與發(fā)展階段 (20c 初 20c 中葉 )：重要分子的發(fā)現(xiàn)和物質(zhì)代謝途徑的確定。 研究內(nèi)容： 靜態(tài)生物化學(xué)：構(gòu)成生物體的基本物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。如功能基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、藥物基因組學(xué)等研究。用于氨基酸定性 、定量分析。 多肽：多于 25個(gè)氨基酸殘基形成的肽。 肽單位：與肽鍵相關(guān)的 6個(gè)原子形成的一個(gè)剛性平面。 結(jié)構(gòu)域：球狀蛋白質(zhì) 的折疊單位，多肽鏈上某些模體或模序相互聯(lián)系，進(jìn)一步形成可明顯區(qū)分空間結(jié)構(gòu)區(qū)域 ,并具有特定的生物學(xué)功能的緊密的近似球形的結(jié)構(gòu)。 纖維蛋白：分子形狀似纖維，難溶于水、韌性大的一 類結(jié)構(gòu)蛋白，如角蛋白和膠原蛋白。 透析：通過小分子能透過半透膜擴(kuò)散到水或緩沖液的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)。 雙向電泳：先按照等電點(diǎn)進(jìn)行等電聚焦電泳，然后在垂直方向按照分子大小再進(jìn)行 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)染色得到的電泳圖是二維分布的蛋白質(zhì)圖。 還原法（含巰基 化合物使 S—S還原產(chǎn)生兩個(gè)半胱氨酸殘基（ CysSH） ,烷化劑（如碘乙酸）修飾 SH，阻止二硫鍵再生成）； 氧化法（過甲酸使 S—S氧化斷裂，生成半胱氨磺酸）。每個(gè)螺旋圈含 個(gè)氨基酸殘基，螺距 ，每個(gè)殘基沿軸旋轉(zhuǎn) 100176。；重復(fù)單位 。 ? 組成和構(gòu)象特點(diǎn)： 原 膠原蛋白分子頭尾相連，交錯(cuò)排列，分子間共價(jià)交連，形成特征性帶狀纖維束。但若溶液 pH與蛋白質(zhì)的 pI差別較大 ,蛋白質(zhì)仍不易沉淀。 ⑥ 生物大分子制備物的純度鑒定：要求達(dá)到一維電泳一條帶，二維電泳一個(gè)點(diǎn)，或 HPLC和毛細(xì)管電泳都是一個(gè)峰。 以溶解度的差異為依據(jù)：鹽析、萃取、分配層析、選擇性沉淀和結(jié)晶等。 核酸通常采用：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙 烯酰胺凝膠電泳，最方便是紫外吸收法。 ② 精氨酸和甲硫氨酸： pH7． 0精氨酸凈電荷＋ 甲硫氨酸凈電荷接近零，甲硫氨酸先洗脫。與DNFB反應(yīng)可產(chǎn)生 DNPGly。 酶的最適 pH：表現(xiàn)出酶最大活性的 pH值。 競爭性抑制作用：抑制劑結(jié)構(gòu)與底物結(jié)構(gòu)相似，與底物競爭同一種酶的活性中心，從而影響 E與 S的結(jié)合，使酶活性降低。 共價(jià)調(diào)節(jié)酶：能通過可逆共價(jià)修飾調(diào)節(jié)活性的酶。 區(qū)別：高效性：顯著降低化學(xué)反應(yīng)的活化能，提高反應(yīng)速度 10７ —101３倍（非酶催化劑）或 108—1020 倍（非催化反應(yīng)）；專一性：酶對底物嚴(yán)格的選擇性。 水解酶類（ hydrolases）：催化底物的加水分解反應(yīng)。酶只作用于某一種或某一類特定的底物。 ? 酶活性中心與底物通過誘導(dǎo)契合（ inducedfit）模式迅速可逆的、非共價(jià)的結(jié)合形成酶－底物復(fù)合物 ES，促進(jìn)底物形成過渡態(tài)且穩(wěn)定底物的過渡態(tài)，酶與底物的過渡態(tài)互補(bǔ)，親合力最強(qiáng)，釋放出結(jié)合能，使 ES的過渡態(tài)能級降低，有利于底物分子跨越能壘，加速酶促反應(yīng)速度。 表面效應(yīng) (surfaceeffect)：疏水性 ―口袋 ‖效應(yīng)酶活動(dòng)中心微環(huán)境是疏水性的，有利于多種催化方式的進(jìn)行。 ? 特定條件 下，酶原被水解一個(gè)或幾個(gè)特定肽段致使酶分子構(gòu)象發(fā)生重塑，表現(xiàn)出酶活性的過程。 ② 偏離最適 pH，酶活性降低，過酸、過堿酶變性失活。 。 2）別構(gòu)激活：正變構(gòu)劑與酶的別構(gòu)部位結(jié)合而引起酶活性增加。 融解溫度 (Tm)：熔解溫度或 DNA的熔點(diǎn)， DNA的變性達(dá)到 50%時(shí)，即增色效應(yīng)達(dá)到一半時(shí)的溫度。 ② 螺旋外側(cè)磷酸和脫氧核糖基以 3′5′磷酸二酯鍵連接，形成 DNA分子的骨架，糖基環(huán)平面與螺旋軸平行；螺旋內(nèi)側(cè)，嘌呤與嘧啶堿基環(huán)平面與螺旋軸垂直。 ② 3′末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。 1977年， Sanger末端終止法 原理： ① DNA 鏈的酶促聚合反應(yīng) ——模板鏈，引物鏈，底物（四種 dNTP），DNA聚合酶 ② 終止化合物 ——ddNTP：末端為 ddNMP的 DNA鏈 步驟： ① 反應(yīng)分四組（ dNTP標(biāo)記）； ② 每組加入相應(yīng)一種 ddNTP； ③ 每組產(chǎn)生一組長短不同的以該組 ddNMP為 3′末端（ H） DNA片段； ④ 凝膠電泳 ⑤ 放射自顯影 ⑥ 讀序：自下而上合成鏈 5′3′堿基順序；模板鏈順序。噻唑環(huán)的 C2。巰基乙胺巰基。 ? 參與羥化反應(yīng) (脯氨酸羥化酶的輔酶。生成二碳化合物乙酰 CoA，釋出約總能量的 1/3，部分以 ATP貯存。是指營養(yǎng)物在生物體內(nèi)氧化分解成水和 CO2并釋放能量的過程。 生化作用：都有氧化還原的特征，可以傳遞 H+或 e。原核生物中，位于細(xì)胞膜上。 總的看來，分解代謝只生成三種主要的終產(chǎn)物： CO H2O和 NH3。 二 .簡答題 、多糖、脂等徹底分解的基本代謝過程。 ?在代謝中有什么作用 ? 葉酸的 8 位置，在 NADPH2 存在下，被還原成四氫葉酸（ FH4 或THFA）。 ?這類輔酶有什么功能 ?其功能基團(tuán)是什么 ? 不需氧脫氫酶輔酶 NAD+或 NADP+。 分類：依據(jù)溶解性分為水溶性維生素 —維生素 B族和維生素 C等；脂溶性維生素 —維生素 A、 D、 E、 K等。 （ 3） tRNA的三級結(jié)構(gòu)：三葉草型二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，突環(huán)上未配對的堿基由于整個(gè)分子的扭曲而配成對，為倒 L字母型。 ⑤ 氫鍵、堿基堆積力、離子鍵及范德華力穩(wěn)定 DNA 雙螺旋。 核酸雜交： DNA單鏈與互補(bǔ)的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 DNA超螺旋： DNA三級結(jié)構(gòu)的一種類型，是 DNA雙螺旋的螺旋。 ② 酶的可逆共價(jià)修飾 例：肌肉中糖原磷酸解為１－磷酸葡萄糖磷酸化酶在蛋白激酶催化下使無活性的磷酸化酶 b磷酸化形成有活性磷酸化酶 a，磷酸酶催化下使有活性的磷酸化酶a去磷酸化形成無活性磷酸化酶 b。 5）抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響：使酶活性降低或喪失。 求法： ① 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)作 v與 [S]的關(guān)系曲線直接求得：先測定不同底物 濃度的反應(yīng)初速度（ v），從 v與 [S]的關(guān)系曲線求得 Vm，然后再從 1/2Vm求得相應(yīng)的 [S]即為 km（近似值）。氧陰離子洞，氧陰離子與 Ser195， Gly193酰胺 H形成氫鍵使轉(zhuǎn)換態(tài)穩(wěn)定 ④ His57作為酸催化劑為敏感鍵Ｎ提供 質(zhì)子，肽鍵斷裂，第一個(gè)產(chǎn)物胺釋放，生成?；钢虚g物。功能基團(tuán)有氨基、羧基、咪唑基、巰基和酚基等。 ② 立體化學(xué)（異構(gòu)）專一性： 旋光異構(gòu)專一性：選擇性催化旋光異構(gòu)體的一種。常見的有消旋和變旋、醛酮異構(gòu)、順反異構(gòu)和變位酶類。水解反應(yīng)的底物水和反應(yīng)類型可省去。 多酶復(fù)合體：功能相關(guān)，不同種類的酶非共價(jià)彼此鑲嵌形成的復(fù)合體 酶的回收率：（每次總活力 ∕第一次總活力） 100 酶的提純倍數(shù)： 每次比活力 ∕第一次比活力 比活力：每毫克蛋白所含有的酶活力單位數(shù)。 反競爭性抑制作用：抑制劑（ I）僅與酶 —底物中間復(fù)合物（ ES）結(jié)合而抑制酶活性。 不可逆抑制：與酶的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合 ,使酶喪失活性 ,不能用透析超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。 輔基：與酶蛋白以共價(jià)緊密結(jié)合 ,不容易被透析或超濾法除去，如黃素和生物素等。 下面的數(shù)據(jù)是從一個(gè)八肽降解和分析得到的，其組成是： Ala、 Gly Lys、Met、 Ser、 Thr、 Tyr。 光線：光化作用 ——受光催化發(fā)生變色、氧化和分解等；吸收光，分子活化不利于保存，紫外線能量大，對制品影響最大。吸附層析、 鹽析、凝膠過濾、離子交換層析、親和層析、等電聚焦制備電泳、制備 HPLC等。 防止蛋白酶或核酸酶的降解：加入抑制劑或調(diào)節(jié)提取液 pH、離子強(qiáng)度或極性，使水解酶失活。 14制備生物大分子的基本步驟是什么 ? 基本步驟 ① 確定制備生物大分子的目的和要求（科研、開發(fā)、發(fā)現(xiàn)新物質(zhì)）。 ?變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)有哪些變化 ? 變性的因素：熱、紫外光、激烈的攪拌、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。 ? 特點(diǎn)：多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上高度折疊成緊密球形或橢球形結(jié)構(gòu)；大多數(shù)可離子化的親水的氨基酸殘基都位于分子表面（表面也含有疏水的氨基酸殘基），疏水氨基酸殘基大部分埋藏在分子內(nèi)部（特別是一些疏水性強(qiáng)的氨基酸，如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸，通常水分子被排除在蛋白內(nèi)部）；三級結(jié)構(gòu)可將某些局部的二級結(jié)構(gòu)聚合在一起，形成特定的結(jié)構(gòu)區(qū)域，大多為口袋狀，核心多為疏水氨基酸，結(jié)合蛋白質(zhì)的輔基常位于其中，多為蛋白質(zhì)的活性中心；穩(wěn)定維系三級結(jié) 構(gòu)的作用力有：氫鍵、鹽鍵、疏水鍵、范德華力、二硫鍵和配位鍵。 ψ＝＋ 113176。 ? 多肽鏈部分 斷裂，蛋白質(zhì)分解為小片段，肽段分離（至少兩套） 酶水解法：內(nèi)肽酶（肽鏈內(nèi)切酶） 胰蛋白酶法：水解 Lys或 Arg的羧基形成的肽鍵 糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）法：水解 Phe、 Trp和 Tyr等疏水氨基酸的羧基形成的肽鍵 胃蛋白酶法：被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水性氨基酸如： PhePhe 化學(xué)法 ——CNBr法：裂解由 Met羧基形成