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正文內(nèi)容

細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)(存儲(chǔ)版)

  

【正文】 弱,單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。TUNEL法(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記)細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量粘性339。在瓊脂糖凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。如果細(xì)胞膜完整,細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色,則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。常用的DNA特異性染料有:HO 33342(Hoechst 33342),HO 33258(Hoechst 33258), DAPI。凋亡Ⅰ期(proapoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu)(圖2);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。在此之前,學(xué)生們已經(jīng)在第一節(jié)和第二節(jié)的學(xué)習(xí)中學(xué)習(xí)了細(xì)胞的增殖和分化, 細(xì)胞的分裂、分化、衰老、死亡是生命的必然??梢酝ㄟ^(guò)調(diào)查人體衰老的特征,討論如何延緩衰老,延長(zhǎng)壽命,引出個(gè)體衰老與細(xì)胞衰老的關(guān)系。它是由某些外界因素造成細(xì)胞急速死亡,是一種被動(dòng)性死亡;,這是一種由特定基因控制的主動(dòng)性死亡。當(dāng)然教師自身也是非常重要的教學(xué)資源。我們常說(shuō):“現(xiàn)代的文盲不是不懂字的人,而是沒(méi)有掌握學(xué)習(xí)方法的人”,因而,我在教學(xué)過(guò)程中特別重視學(xué)法的指導(dǎo)。這是生物教學(xué)非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。針對(duì)課堂上提出的問(wèn)題,組織學(xué)生進(jìn)行集體和分組討論,促使學(xué)生在學(xué)習(xí)中解決問(wèn)題,培養(yǎng)學(xué)生解決問(wèn)題的能力以及團(tuán)結(jié)協(xié)作的精神??紤]到高一年級(jí)學(xué)生的現(xiàn)狀,我主要采取學(xué)生活動(dòng)的教學(xué)方法,讓學(xué)生真正的參與活動(dòng),而且在活動(dòng)中得到認(rèn)識(shí)和體驗(yàn),產(chǎn)生踐行的愿望。最后從生物的壽命引入,探討細(xì)胞的死亡。本節(jié)的內(nèi)容比較接近現(xiàn)實(shí)生活,可以利用現(xiàn)實(shí)生活中的例子加以說(shuō)明,使學(xué)生有個(gè)直觀的認(rèn)識(shí),同時(shí)也可以培養(yǎng)學(xué)生知識(shí)的應(yīng)用能力和知識(shí)的遷移能力。第五篇:細(xì)胞的衰老和凋亡說(shuō)課稿《細(xì)胞的衰老和凋亡》說(shuō) 課 稿老師、同學(xué)們,大家好!我叫XX,來(lái)自XX班。結(jié)果評(píng)判:細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),可見(jiàn)細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。DNA ladder 細(xì)胞凋亡晚期,核酸內(nèi)切酶在核小體之間剪切核DNA,產(chǎn)生大量長(zhǎng)度在180200 bp 的DNA片段。(3)流式細(xì)胞術(shù)分析PharMingen 多克隆或單克隆 Caspase3 抗體可以識(shí)別 Caspase3 活化形式,它特異性識(shí)別由無(wú)活性的 ProCaspase3 活化水解后的暴露的斷裂端, 熒光標(biāo)記多克隆兔抗 ActiveCaspase3 抗體為流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡細(xì)胞的 Caspase3 而設(shè)計(jì)。細(xì)胞凋亡時(shí)線粒體膜電位發(fā)生去極化,JC1進(jìn)入線粒體以單體形式存在,僅在Fl1通道有熒光。這樣就可以非常方便地通過(guò)熒光顏色的轉(zhuǎn)變來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位的變化。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上,左下象限顯示活細(xì)胞,為(FITC/PI);右上象限是非活細(xì)胞,即壞死細(xì)胞,為(FITC+/PI+);而右下象限為早期凋亡細(xì)胞,顯現(xiàn)(FITC+/PI)。謝謝老師閱讀,有不正確的地方請(qǐng)老師批評(píng)指正。我自己有一個(gè)不成熟的想法,很久之前曾了解到俄羅斯的“永生計(jì)劃”它的設(shè)計(jì)活體意識(shí)轉(zhuǎn)移到機(jī)器人身上,對(duì)此幾乎大多數(shù)人是不看好,不支持的。對(duì)我自己而言,我想在生物技術(shù)這方面有所建樹(shù),最主要的還是在科研方面能攻克一些難題,雖然可能現(xiàn)在想法不是太成熟但是我相信經(jīng)過(guò)幾年的磨練與努力我能夠攻破這些難題。4.細(xì)胞凋亡與壞死的區(qū)別 凋亡 壞死1機(jī)制 基因調(diào)控的程序化(programmed)細(xì)胞死亡,主動(dòng)進(jìn)行(自殺性)意外事故性(accident)細(xì)胞死亡,被動(dòng)進(jìn)行(他殺性)2誘因 生理性或輕微病理性刺激因子誘導(dǎo)發(fā)生,如生長(zhǎng)因子缺乏 病理性刺激因子誘導(dǎo)發(fā)生,如缺氧、感染、中毒 死亡范圍 多為散在的單個(gè)細(xì)胞 多為聚集的大片細(xì)胞3形態(tài)特征 細(xì)胞固縮,核染色質(zhì)邊集,細(xì)胞膜及各細(xì)胞器膜完整,膜可發(fā)泡成芽,形成凋亡小體 細(xì)胞腫脹,核染色質(zhì)絮狀或邊集,細(xì)胞膜及各細(xì)胞器膜溶解破壞,溶酶體酶釋放,細(xì)胞自溶4生化特征 耗能的主動(dòng)過(guò)程,有新蛋白合成,DNA早期規(guī)律降解為180200bp片段,瓊脂凝膠電泳呈特征性梯帶狀 不耗能的被動(dòng)過(guò)程,無(wú)新蛋白合成,DNA降解不規(guī)律,片段大小不一,瓊脂凝膠電泳不呈梯帶狀5周圍反應(yīng) 不引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復(fù)再生,但凋亡小體可被鄰近細(xì)胞吞噬 引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復(fù)再生細(xì)胞自噬細(xì)胞自噬的生理功能1及時(shí)清除細(xì)胞中隨時(shí)產(chǎn)生的“垃圾”(如破損或衰老的細(xì)胞器、長(zhǎng)壽命蛋白質(zhì)、合成錯(cuò)誤或折疊錯(cuò)誤的蛋白質(zhì)等),保持一種基礎(chǔ)、低水平的自噬活性是至關(guān)重要的,自噬的產(chǎn)物,如氨基酸、脂肪酸等小分子物質(zhì),細(xì)胞自噬就是一個(gè)“備用倉(cāng)庫(kù)”.鑒于上述作用,在正常生理情況下,:(1)首先,腫瘤細(xì)胞本身就具有高代謝的特點(diǎn),對(duì)營(yíng)養(yǎng)和能量的需求比正常細(xì)胞更高,但腫瘤微環(huán)境往往不能如意,如腫瘤發(fā)生初始期到血管發(fā)生之前、腫瘤長(zhǎng)大發(fā)生血管崩塌時(shí)、腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶游走時(shí)等都會(huì)出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不足或供應(yīng)中斷,而此時(shí)提高自噬活性可以有助于度過(guò)這一危機(jī)(2)(2)當(dāng)化療、放療后,腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生大量的破損細(xì)胞器、損壞的蛋白質(zhì)等有害成分,此時(shí)提高自噬活性可及時(shí)清除這些有害物質(zhì),并提供應(yīng)急的底物和能量為修復(fù)受損DNA贏得時(shí)間和條件.(3)另外,抑制細(xì)胞自噬可以導(dǎo)致細(xì)胞更容易發(fā)生凋亡,然而,細(xì)胞自噬在腫瘤的生成和癌癥的發(fā)展中到底扮演怎樣的角色,可能產(chǎn)生于以下幾種機(jī)制(1)細(xì)胞自噬的抑制會(huì)加重壞死細(xì)胞的局部炎癥反應(yīng),從而導(dǎo)致腫瘤的生長(zhǎng)(2)而細(xì)胞自噬可以清除壞死的細(xì)胞器,調(diào)整內(nèi)源性的壓力,從而穩(wěn)定基因組,減少細(xì)胞向癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)變.(3)細(xì)胞自噬既可以加強(qiáng)細(xì)胞檢驗(yàn)點(diǎn)的檢查作用,又起到了穩(wěn)定基因組的作用,從而減少了細(xì)胞的癌變
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