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細胞凋亡實驗技術(shù)總結(jié)(存儲版)

2024-10-29 06:32上一頁面

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【正文】 弱,單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。TUNEL法(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP缺口末端標記)細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量粘性339。在瓊脂糖凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。常用的DNA特異性染料有:HO 33342(Hoechst 33342),HO 33258(Hoechst 33258), DAPI。凋亡Ⅰ期(proapoptosis nuclei)的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu)(圖2);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。在此之前,學生們已經(jīng)在第一節(jié)和第二節(jié)的學習中學習了細胞的增殖和分化, 細胞的分裂、分化、衰老、死亡是生命的必然??梢酝ㄟ^調(diào)查人體衰老的特征,討論如何延緩衰老,延長壽命,引出個體衰老與細胞衰老的關(guān)系。它是由某些外界因素造成細胞急速死亡,是一種被動性死亡;,這是一種由特定基因控制的主動性死亡。當然教師自身也是非常重要的教學資源。我們常說:“現(xiàn)代的文盲不是不懂字的人,而是沒有掌握學習方法的人”,因而,我在教學過程中特別重視學法的指導。這是生物教學非常重要的一個環(huán)節(jié)。針對課堂上提出的問題,組織學生進行集體和分組討論,促使學生在學習中解決問題,培養(yǎng)學生解決問題的能力以及團結(jié)協(xié)作的精神??紤]到高一年級學生的現(xiàn)狀,我主要采取學生活動的教學方法,讓學生真正的參與活動,而且在活動中得到認識和體驗,產(chǎn)生踐行的愿望。最后從生物的壽命引入,探討細胞的死亡。本節(jié)的內(nèi)容比較接近現(xiàn)實生活,可以利用現(xiàn)實生活中的例子加以說明,使學生有個直觀的認識,同時也可以培養(yǎng)學生知識的應(yīng)用能力和知識的遷移能力。第五篇:細胞的衰老和凋亡說課稿《細胞的衰老和凋亡》說 課 稿老師、同學們,大家好!我叫XX,來自XX班。結(jié)果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。凋亡細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。DNA ladder 細胞凋亡晚期,核酸內(nèi)切酶在核小體之間剪切核DNA,產(chǎn)生大量長度在180200 bp 的DNA片段。(3)流式細胞術(shù)分析PharMingen 多克隆或單克隆 Caspase3 抗體可以識別 Caspase3 活化形式,它特異性識別由無活性的 ProCaspase3 活化水解后的暴露的斷裂端, 熒光標記多克隆兔抗 ActiveCaspase3 抗體為流式細胞術(shù)分析凋亡細胞的 Caspase3 而設(shè)計。細胞凋亡時線粒體膜電位發(fā)生去極化,JC1進入線粒體以單體形式存在,僅在Fl1通道有熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。在雙變量流式細胞儀的散點圖上,左下象限顯示活細胞,為(FITC/PI);右上象限是非活細胞,即壞死細胞,為(FITC+/PI+);而右下象限為早期凋亡細胞,顯現(xiàn)(FITC+/PI)。謝謝老師閱讀,有不正確的地方請老師批評指正。我自己有一個不成熟的想法,很久之前曾了解到俄羅斯的“永生計劃”它的設(shè)計活體意識轉(zhuǎn)移到機器人身上,對此幾乎大多數(shù)人是不看好,不支持的。對我自己而言,我想在生物技術(shù)這方面有所建樹,最主要的還是在科研方面能攻克一些難題,雖然可能現(xiàn)在想法不是太成熟但是我相信經(jīng)過幾年的磨練與努力我能夠攻破這些難題。4.細胞凋亡與壞死的區(qū)別 凋亡 壞死1機制 基因調(diào)控的程序化(programmed)細胞死亡,主動進行(自殺性)意外事故性(accident)細胞死亡,被動進行(他殺性)2誘因 生理性或輕微病理性刺激因子誘導發(fā)生,如生長因子缺乏 病理性刺激因子誘導發(fā)生,如缺氧、感染、中毒 死亡范圍 多為散在的單個細胞 多為聚集的大片細胞3形態(tài)特征 細胞固縮,核染色質(zhì)邊集,細胞膜及各細胞器膜完整,膜可發(fā)泡成芽,形成凋亡小體 細胞腫脹,核染色質(zhì)絮狀或邊集,細胞膜及各細胞器膜溶解破壞,溶酶體酶釋放,細胞自溶4生化特征 耗能的主動過程,有新蛋白合成,DNA早期規(guī)律降解為180200bp片段,瓊脂凝膠電泳呈特征性梯帶狀 不耗能的被動過程,無新蛋白合成,DNA降解不規(guī)律,片段大小不一,瓊脂凝膠電泳不呈梯帶狀5周圍反應(yīng) 不引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復再生,但凋亡小體可被鄰近細胞吞噬 引起周圍組織炎癥反應(yīng)和修復再生細胞自噬細胞自噬的生理功能1及時清除細胞中隨時產(chǎn)生的“垃圾”(如破損或衰老的細胞器、長壽命蛋白質(zhì)、合成錯誤或折疊錯誤的蛋白質(zhì)等),保持一種基礎(chǔ)、低水平的自噬活性是至關(guān)重要的,自噬的產(chǎn)物,如氨基酸、脂肪酸等小分子物質(zhì),細胞自噬就是一個“備用倉庫”.鑒于上述作用,在正常生理情況下,:(1)首先,腫瘤細胞本身就具有高代謝的特點,對營養(yǎng)和能量的需求比正常細胞更高,但腫瘤微環(huán)境往往不能如意,如腫瘤發(fā)生初始期到血管發(fā)生之前、腫瘤長大發(fā)生血管崩塌時、腫瘤細胞脫離原發(fā)灶游走時等都會出現(xiàn)營養(yǎng)不足或供應(yīng)中斷,而此時提高自噬活性可以有助于度過這一危機(2)(2)當化療、放療后,腫瘤細胞會產(chǎn)生大量的破損細胞器、損壞的蛋白質(zhì)等有害成分,此時提高自噬活性可及時清除這些有害物質(zhì),并提供應(yīng)急的底物和能量為修復受損DNA贏得時間和條件.(3)另外,抑制細胞自噬可以導致細胞更容易發(fā)生凋亡,然而,細胞自噬在腫瘤的生成和癌癥的發(fā)展中到底扮演怎樣的角色,可能產(chǎn)生于以下幾種機制(1)細胞自噬的抑制會加重壞死細胞的局部炎癥反應(yīng),從而導致腫瘤的生長(2)而細胞自噬可以清除壞死的細胞器,調(diào)整內(nèi)源性的壓力,從而穩(wěn)定基因組,減少細胞向癌細胞的轉(zhuǎn)變.(3)細胞自噬既可以加強細胞檢驗點的檢查作用,又起到了穩(wěn)定基因組的作用,從而減少了細胞的癌變
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