【正文】 件的確定 .................................................................................16 除雜前提取液吸收光譜的測(cè)定 .................................................................19 提取液處理前后的紫外光譜分析 .............................................................22 提取液的高效液相色譜譜圖分析 .............................................................24 除雜前后對(duì)有機(jī)玻璃的上色效果 .............................................................27 結(jié) 論 ..........................................................................................................................29 致 謝 ........................................................................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。開(kāi)發(fā)天然產(chǎn)物是世界食用色素業(yè)和醫(yī)藥等行業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)之一，以天然產(chǎn)物為主的保健品和藥物等具有相當(dāng)大的市場(chǎng)前景，但由于天然產(chǎn)物分離純化困難，很難達(dá)到和國(guó)際接軌的要求，因此解決天然產(chǎn)物研究中樣品分離純化的難題，得到除雜后的精制產(chǎn)品會(huì)使天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)利用具有更加廣闊的前景 ，同時(shí)開(kāi)發(fā)高效的天然產(chǎn)物的除雜方法對(duì)徹底改變中國(guó)天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)層次低，生產(chǎn)方式粗放，技術(shù)落后有重要作用，對(duì)中國(guó)天然產(chǎn)物利用現(xiàn)狀的轉(zhuǎn)型與提升具有重要意義。近年來(lái)隨著生物技術(shù)的發(fā)展 ， 利用生物技術(shù)生產(chǎn)天然 產(chǎn)物 已為人們開(kāi)闊了廣泛的領(lǐng)域 ， 如 利用微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)藍(lán)色素、紅曲色素等多種天然色素已成為現(xiàn)實(shí) [34]， 利用微生物具有 特定 的 優(yōu)勢(shì) ， 如不受資源、環(huán)境和空間的限制 ， 以及生長(zhǎng)迅速等 ， 可快速大量的生產(chǎn)天然 產(chǎn)物 。 (2)堿提取法 堿提法主要是應(yīng)用堿對(duì)多種生物物質(zhì)的影響作用 ， 其提取效率雖不 如有機(jī)溶劑提取率高 ， 但從經(jīng)濟(jì)角度和安全性考慮仍有應(yīng)用價(jià)值。宿樹(shù)蘭等采用 正交試驗(yàn)優(yōu)化超臨界流體萃取姜黃藥材中姜黃素 ， 得到姜黃素占萃取物量高達(dá) %。其基本原理是利用被提取物質(zhì)在不同的兩相系統(tǒng)間分配行為的差異進(jìn)行分離。應(yīng)用酶促反應(yīng)還可改變天 然梔子黃色素中的梔子苷的結(jié)構(gòu) ， 生產(chǎn)出梔子紅、藍(lán)色素。我國(guó)還有一支龐大的天然色素研究開(kāi)發(fā)隊(duì)伍。在 人們崇尚綠色天然食品的今天 ， 用純化學(xué) 物質(zhì)人工合成的食品著色劑和食用色素已不占食用色素市場(chǎng)的主流。隨著人民生活水平的提高和食品工業(yè)不斷發(fā)展與壯大 ， 食用色素發(fā)展在我國(guó)具有廣闊的前景 ，以天然色素為例說(shuō)明我國(guó)對(duì)天然 產(chǎn)物發(fā)展的政策方針。 (3)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化、系列化、實(shí)用化 ， 開(kāi)拓國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)。 (4)進(jìn)行原料的綜合利用 在原料上應(yīng)當(dāng)走綜合利用 ， 變廢 為寶的道路。這種綜合利用的開(kāi)發(fā) ， 可以大大提高經(jīng)濟(jì)效益。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。 離心也是經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一種分離蛋白質(zhì)的方法。 凝膠過(guò)濾也稱凝膠滲透層析 ， 是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同分離蛋白質(zhì)最有效的方法之一。 等電點(diǎn)沉淀和 pH 值調(diào)節(jié)是最常用的方法。另外還可以利用堿法提取大米蛋白 ， 其持水性、吸油性和起泡性等均優(yōu)于酶法提取。利用鹽溶和鹽析對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行提純后 ， 通常要使用透析或者凝膠過(guò)濾的方法除去中性鹽。 萃取是分離和提純有機(jī)化合物常 用的一種方法 ， 而雙水相萃取和反膠團(tuán)萃取可以用來(lái)分離蛋白質(zhì)。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是萃取過(guò)程中蛋白質(zhì)因位于反膠團(tuán)的內(nèi)部而受到反膠團(tuán)的保護(hù)。在外電場(chǎng)作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點(diǎn)的 pH 值梯度處形成一個(gè)窄條帶。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì) ， 被留在層析柱上 ， 通過(guò)提高洗脫液中的鹽濃度 ， 將吸附在層析柱上的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái) ， 其中結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來(lái)。親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化中應(yīng)用也相當(dāng)廣泛 [20]。脫脂效果主要取決于晶粒的數(shù)量與大小 ， 在冷凍脫脂過(guò)程中晶核的生成及晶粒的生長(zhǎng)速率與冷卻速率有著極大的相關(guān)性。天然 提取液 中的某些雜質(zhì)對(duì)結(jié)晶及其分離也有很大影響 ， 如過(guò)氧化物的存在不僅會(huì)降低油脂的固體脂指數(shù) ， 而且會(huì)增大油脂的黏度 ， 對(duì)結(jié)晶和分離均有不良影響 ， 須將其預(yù)先脫除 [21]。在相同的轉(zhuǎn)速下，容器中不同大小密度的物質(zhì)會(huì)以不同的速率沉降。將試樣鋪放在一個(gè)密度變化范圍較小、梯度斜度變化比較平緩的密度梯度介質(zhì)表面，在離心力場(chǎng)作用下試樣中的顆粒按照各自的沉降速率移動(dòng)到梯度介質(zhì)中的不同位置，而形成一系列試樣組分區(qū)帶，使不同沉降速率的顆粒得以分離。 恒溫時(shí)間，冷凍時(shí)間為5 小時(shí)，加熱時(shí)間為 30 分鐘。 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .0 20 .0 00 .0 20 .0 40 .0 60 .0 80 .1 00 .1 20 .1 40 .1 6Absw a v e l e n g t h (n m ) 原液 冷離 圖 稀釋 100 倍迎春花原液經(jīng)冷凍處理前后紫外吸收光譜圖 23 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .10 .00 .10 .20 .30 .40 .50 .60 .70 .8Absw a v e l e n g t h (n m ) 冷離 原液 圖 稀釋 100 倍連翹花原液經(jīng)冷凍處理前后紫外吸收光譜圖 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .10 .00 .10 .20 .30 .40 .50 .60 .70 .8Absw a v e l e n g t h (n m ) 原液45度熱離 圖 稀釋 100 倍迎春花原液經(jīng)脫脂 45 度去蛋白前后紫外吸收光譜圖 24 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .00 .51 .01 .52 .0Absw a v e l e n g t h (n m )原液 45度熱離 圖 稀釋 100 倍連翹花原液經(jīng)脫脂 45 度去蛋白前后紫外吸收光譜圖 從圖 中可以看出，除雜后的光譜強(qiáng)度增加，說(shuō)明 提取液 純度 得到 提高。 對(duì)處理前后提取液的分離與檢 測(cè)可知：雜質(zhì)得到一定的去除，但目標(biāo)成分有少量的損失。通過(guò)本課題的研究，可以得出以下結(jié)論： ： 迎春花提取液在 226nm處有最大吸收峰；連翹花提取液在 204nm處有最大吸收峰。 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .0 00 .0 20 .0 40 .0 60 .0 80 .1 00 .1 2Absw a v e l e n g t h (n m )226nm 圖 迎春花原液稀釋 100 倍吸收光譜 22 100 200 300 400 500 600 700 800 9000 .00 .10 .20 .30 .40 .50 .60 .70 .8Absw a v e l e n g t h (n m )204nm 圖 連翹花原液稀釋 100 倍吸收光譜 圖 表明迎春花提取液在 226nm處有最大吸收峰；圖 表明連翹花提取液在204nm處有最大吸收峰。 16 第三章 結(jié)果與討論 溫度控制條件的確定 圖 和圖 為水的冷凍和加熱曲線。離心后把上清液與沉淀分開(kāi)，然后再將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速，逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。若改用離心分離，由于轉(zhuǎn)鼓高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力遠(yuǎn)遠(yuǎn)13 大于重力，可大大提高沉降速率，因此離心分離只需較短的時(shí)間即能獲得大于重力沉 降的效果。故攪拌速度要適宜 ， 要根據(jù)冷凍結(jié)晶操作的不同階段而調(diào)節(jié) ， 以有利于晶粒的形成與成長(zhǎng)為度。一是結(jié)晶溫度和冷卻速率。應(yīng)用親和層析須了解純化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性 ， 以便設(shè)計(jì)出最好的分離條件。離子交換層析同樣可以用于蛋白質(zhì)的分離純化。等電聚焦是一種高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù) ， 也可以用于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定。 反膠團(tuán)萃取法是利用反膠團(tuán)將蛋白質(zhì)包裹其中而達(dá)到提取蛋白質(zhì)的目的。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由 Cohn 于 1949 年提出 ，用于制備丙種球蛋白。由于硫酸銨在水中呈酸性 ， 為防止其對(duì)蛋白10 質(zhì)的破壞 ， 應(yīng)用氨水調(diào) pH 值至中性。李鳳英等測(cè)得葡萄籽蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為 。但在同一條件下 ， 不同的蛋白質(zhì)因其分子結(jié)構(gòu)的不同而有不同的溶解度 ， 根據(jù)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn) ， 適當(dāng)?shù)馗淖兺獠織l件 ， 就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度 ， 達(dá)到分離純化蛋白質(zhì)的目的。密度梯度離心曾用于純化蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白 ， 得到的產(chǎn)品純度高但產(chǎn)量偏低。由于超濾過(guò)程中 ， 濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞 ，以致超濾速度減慢 ， 截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。 8 天然產(chǎn)物 提取液的精制 方法 隨著科技的發(fā)展和生活水平的提高 ， 天然產(chǎn)物 以其健康、安全的特點(diǎn)，將越來(lái)越受人們的歡迎， 但 天然產(chǎn)物大多不能直接使用，而 只需要其中的某些 物質(zhì)，因此需要對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行提取分離，提取后所得提取液大多數(shù)是混合物，需 利用體系中各組分物性的差別，使用 不同的方法使混合物得到分離提純。辣椒的種子可以提取辣椒堿及辣椒油 ， 殘?jiān)叩鞍?； 辣椒種皮可以提取辣椒紅色素、辣椒堿 ， 殘?jiān)倥渖厦驷u、油、鮮味劑 ， 可精制辣醬。我們應(yīng)當(dāng)奮進(jìn)直追 ， 迎頭趕上。在天然 色素 的生產(chǎn)過(guò)程中 ， 可以采用的高新技術(shù)有 ： 基因工程、細(xì)胞工程、發(fā) 酵工程、吸附色譜、凝膠過(guò)濾、微孔過(guò)濾、超濾、電滲析、反滲透、膜分離技術(shù)、超臨界流體萃取分離技術(shù) ( 2CO 、 丙烷 )、冷凍干燥等技術(shù)。特別是一些農(nóng)產(chǎn)品 ， 如玉米、高粱、辣椒、蘿卜等更是隨處可見(jiàn) ， 這就為天然 產(chǎn)物 的開(kāi)發(fā)利用提供了豐富的原料 ， 也為農(nóng)副產(chǎn)品的深加工開(kāi)辟了新的途徑。這些食品天然色素產(chǎn)品除在國(guó)內(nèi)銷售外 ， 還遠(yuǎn)銷國(guó)外。 目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出 80 余種不同原料來(lái)源的食用天然色素。 (8)酶法提取法 纖維素酶可使纖維素、半纖維素等物質(zhì)降解 ， 引起細(xì)胞壁和細(xì)胞間質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生局部疏松、膨脹等變化 ， 從而增大胞內(nèi)有效成分向提取介質(zhì)的擴(kuò)散 ， 促進(jìn) 天然產(chǎn)物 提取效率的提高。結(jié)果表明 ， 采用分子蒸餾法 ，從脫蠟的甜橙油中一步提取的色素 ， 不含有機(jī)溶劑 ， 純度高 ， 色價(jià)高。由于超臨界 2CO 提取工藝簡(jiǎn)單 ， 能耗低 ， 萃取劑便宜 ， 提取的產(chǎn)品具有純度高 ， 溶劑殘留少 ， 無(wú)毒副作用等優(yōu)點(diǎn) ， 越來(lái)越受到人們的重視。利用有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等提取姜黃得姜黃色素 [7]， 將蝦殼用鹽酸浸泡 24h 后過(guò)濾 ， 濾渣用 95%乙醇浸泡提取液經(jīng)蒸餾后得到濃縮的粗制蝦青素提取物。目前絕大多數(shù)品種的天然 產(chǎn)物 是采用直接提取方法生產(chǎn)的。 Freezing。 參考文獻(xiàn) .....................................................................................................