光度測(cè)定法bet檢查技術(shù)(存儲(chǔ)版)
【正文】 ursday, January 28, 2023? 1知人者智，自知者明。 4:08:16 下午 4:08 下午 16:08:16一月 21MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感謝您的下載觀看專家告訴。 16:08:1616:08:1616:081/28/2023 4:08:16 PM? 1越是沒(méi)有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 16:08:1616:08:1616:08Thursday, January 28, 2023? 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 28 一月 20234:08:16 下午 16:08:16一月 21? 1比不了得就不比，得不到的就不要。此計(jì)算一般由儀器自動(dòng)進(jìn)行。當(dāng) r值為正時(shí)，表示該組數(shù)據(jù)呈正相關(guān)關(guān)系； r值為負(fù)時(shí)，該組數(shù)據(jù)為負(fù)相關(guān)關(guān)系。CxTo T(分 )Rx100Rt(%)Rt(%)Rt=bK? 選擇不同的參數(shù) (Rt或 OD)將得到不同變化趨勢(shì)的動(dòng)態(tài)曲線。 定義 2： 吸光度 (OD)： OD= lg(It/Is) 初始時(shí) It=Is， OD=0， OD曲線變化趨勢(shì)是由低至升高。C回歸分析（ 1）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線2023/1/2812（ 2）測(cè)定樣品內(nèi)毒素濃度（ Cx）? 用鱟試劑與未知內(nèi)毒素含量的供試品（ X）反應(yīng)，得到透光度值Rx，比對(duì) CRt關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得出供試品的內(nèi)毒素含量 Cx。? 2023/1/2828結(jié)果判斷? 藥典要求– 陰性對(duì)照的反應(yīng)時(shí)間應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時(shí)間– 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) |r|≥? 廠家建議值– 變異系數(shù) CV%10%? 關(guān)于相關(guān)系數(shù)– 當(dāng)對(duì)一組數(shù)據(jù)作線性回歸分析時(shí)，以相關(guān)系數(shù) r表示其標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性狀況，即該組數(shù)據(jù)的相關(guān)狀況。? 儀器– 分光光度計(jì)– 酶標(biāo)儀– 37℃ 恒溫儀2023/1/2850試驗(yàn)程序1. 試驗(yàn)準(zhǔn)備：儀器及用具等2. 確定藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值（ L）3. 選擇終點(diǎn)比色法試劑盒終點(diǎn)比色法鱟試劑顯色基質(zhì)（底物）工作標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（ CSE） 4. 計(jì)算供試品的最大有效稀釋（ MVD） 或最低有效濃度（ MVC）5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)6. 干擾試驗(yàn)（驗(yàn)證）7. 檢查法（日常檢查）2023/1/2851終點(diǎn)比色法日常檢查舉例? 試劑及器具終點(diǎn)比色法試劑盒 終點(diǎn)比色法試劑顯色基質(zhì)（底物）工作標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（ CSE）酶標(biāo)儀 405nm微孔平板 96孔，無(wú)熱原微孔平板恒溫器 提供 37℃ 恒溫環(huán)境供試品（ S） 生理鹽水， L=2023/1/2852試驗(yàn)步驟? 開(kāi)啟微孔平板恒溫器預(yù)熱? 溶液 C的制備根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度要求，制備標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素系列溶液，如 、 、 、及（ λ） ；? 溶液 A、 B的制備MVD=L/λ=（ 倍）將供試品稀釋到 S S4（ 溶液 A） S2+ （ 溶液 B）2023/1/2853? 反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置溶液編號(hào) 項(xiàng) 目 平行管D 陰性對(duì)照 O OC 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)(EU/mL) O O O O O OE1 O OA S4 O OB O O2023/1/2854 ? 取微孔平板放到 37℃ 恒溫器上；每孔加 液（ A、 B、 C及 D溶液），每濃度溶液平行 2孔；加樣完畢恒溫孵育 5分鐘 * ；? 復(fù)溶鱟試劑及顯色基質(zhì)（底物）；? 每孔加入 ，恒溫 7分鐘 * ；? 每孔加入 ，恒溫 5分鐘 * ； 每孔加入 ；*此時(shí)間根據(jù)終點(diǎn)比色試劑盒使用說(shuō)明書(shū)要求確定2023/1/2855 ? 把微孔平板放入酶標(biāo)儀中用 405nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度值；? 1 根據(jù)各內(nèi)毒素濃度對(duì)應(yīng)的吸光度值建立內(nèi)毒素濃度與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線；? 1 利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 A、 B溶液的內(nèi)毒素含量及供試品的回收率。 一月 21一月 2116:08:1616:08:16January 28,
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