【正文】 。在攪拌的情況下加入摩爾量過量10倍的Ru(bpy)2(dcbpy)NHS后過夜孵育。(bpy)2(dcbpy)NHS（線a）和Ru肽（線b）在50 mM mol/L PBS (pH )溶液中的電化學(xué)發(fā)光強度電位圖。109g/mL cTnI 和 108g/mL cTnI作用前后的電化學(xué)發(fā)光動力學(xué)圖。截距和線性相關(guān)性與在一個相當短的時間區(qū)域內(nèi)的理論預(yù)測較好的吻合。因而，實驗中選擇+。 detection solution, M PBS (pH ) containing 50 mM TPA. 結(jié)合時間的選擇Fig. Dependence of the ECL intensity of the 108 M ECL probe on the binding time with 108g/mL condition: applied potential, + V。 detection solution, M PBS (pH ) containing 50 mM TPA. 選擇性 109 M的cTnI (108 g/mL)、IgG、BSA、AFP、雞蛋白蛋白結(jié)合后電化學(xué)發(fā)光信號的變化，考察電化學(xué)發(fā)光探針的選擇性。 釕聯(lián)吡啶衍生物標記肽（Ru肽）與不同濃度的心肌肌鈣蛋白I相互作用的電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)Fig. ECL responses of the 108 M Rupeptide reacted with different concentrations of cTnI. (a) 1010g/mL, (b) 109g/mL, (c) 109g/mL, (d)108g/mL, (e) 108g/mL, (f) 108g/mL. Insert, calibration curve of cTnI. Experimental condition: binding time, 60 min。因此，本實驗選擇60min作為最佳結(jié)合時間。肽和cTnI的結(jié)合導(dǎo)致了分子量的增加，擴散系數(shù)的降低，進而導(dǎo)致了電化學(xué)發(fā)光強度的降低，這與文獻[17，20]中所報道的類似。利用計時電流法在一個鉑超微電極（UME）。本實驗基于Ru肽與蛋白結(jié)合前后，電化學(xué)發(fā)光信號的變化，進行肌鈣蛋白的分析檢測。 nm， 287 nm 和457 nm處（線b），而肽的特征吸收峰在280nm處（線a），Ru(bpy)2(dcbpy)NHS的特征吸收峰在245 nm， 287 nm 和 457 nm處（線c）。電化學(xué)測量過程使用CHI 660電化學(xué)工作站（上海辰華儀器公司，中國）。當不存在目標物cTnI時，信號物質(zhì)Ru(bpy)2(dcbpy)NHS游離在溶液中產(chǎn)生強的電化學(xué)發(fā)光信號；存在目標物cTnI時，探針與cTnI結(jié)合形成復(fù)合物，電化學(xué)發(fā)光強度降低。近來，利用噬菌體展示技術(shù)獲得的肽，作為抗體的替代物，具有自身的優(yōu)點，如容易合成，穩(wěn)定性好，極強的生物活性和多樣性，且具有分子量小，易于改造，價格低廉，可在極端條件下使用，無毒副作用等優(yōu)點，在生物檢測方面得到廣泛的關(guān)注[24，25]。大部分均相電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法檢測蛋白基于抗原抗體免疫結(jié)合引起電化學(xué)發(fā)光強度的降低[1721]。這些檢測方法都有自身的優(yōu)點和缺點。以能夠特異性結(jié)合cTnI的肽（FYSHSFHENWPSK）作為分子識別物質(zhì)，釕聯(lián)吡啶衍生物作為信號物質(zhì)，建立檢測cTnI的均相電化學(xué)發(fā)光分析方法。另外，基于適體的生物傳感器是高度可重復(fù)使用的（RSD = %，n=7），具有長期的儲存穩(wěn)定性（%）。該工作展示了人類凝血酶和ATP的檢測限各自分別為1pM和10pM，具有高的特異性。109M范圍內(nèi)成比例關(guān)系，檢測限為81013M。證明了碳納米點萘酚納米復(fù)合膜促進了魯米諾的電子轉(zhuǎn)移速率，導(dǎo)致了更好的電化學(xué)活性，提高了電化學(xué)發(fā)光性能。
電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器制作原理圖Fig. Schematic representation of the fabrication of the ECL immunosensor. (a) GCE deposited with AuNPs, (b) AuNPs/cysteine, (c) AuNPs/cysteine/GLD + Ab1, (d) after blocking with BSA, (e) (d) + CEA, (f) (e) + RusilicaNPG labeled Ab2.張成孝[68]等設(shè)計了一種高選擇性電化學(xué)發(fā)光生物傳感器用于檢測目標單鏈DNA，使用發(fā)夾DNA做為識別元素，釕復(fù)合物作為信號物質(zhì)。1010g/%（n=11）。這個單抗藥物代謝動力學(xué)電化學(xué)發(fā)光檢測有一個300–24，000 pg/mL的報道范圍，基于準確度和精密度參數(shù)。該方法已被應(yīng)用于檢測人類對照血清中的地高辛，得到了滿意的結(jié)果。漆紅蘭[64]等人報道了一種均相電化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法用于檢測小分子物質(zhì)。在Scheme 4中，TPrA在電極上直接氧化產(chǎn)生TPrA?和TPrA?+。另一個“氧化還原”體系的例子是常見的Ru(bpy)32+/三丙胺（TPrA）體系，目前是商業(yè)ECL免疫分析和DNA分析的基礎(chǔ)。當體系有足夠的能量時，發(fā)光過程被定義為按照單線路徑“S路徑”（方程（1） （3）），因為1A*將直接產(chǎn)生。Ru(bpy)32+和它的類似物的ECL研究始于20世紀70年代。第五，它允許對ECL反應(yīng)的時間進行較大的控制，從而提高了再現(xiàn)性，簡化操作。例如，此法能高靈敏地檢測亞皮摩爾濃度的釕聯(lián)吡啶（Ru(bpy)32+），線性范圍可達到大于六個數(shù)量級之寬。在一次性絲網(wǎng)印刷金電極（SPGE）表面修飾金納米粒子（AuNPs）或者巰基化的單臂碳納米管/金納米粒子（SWCNT/AuNPs），隨后將巰基端二茂鐵抑胃酶肽自組裝在修飾過的電極表面。固定聚（谷氨酸，酪氨酸）（4：1）肽在氧化銦錫（ITO）電極表面，通過層層組裝技術(shù)，利用鋨聯(lián)吡啶介導(dǎo)的酪氨酸氧化電流作為生物傳感器的信號輸出者（）。RA病人的血清中包含不同瓜氨酸肽和蛋白（如纖維蛋白或者絲聚蛋白）的抗體。緊接著通過蛋白酶作用，基質(zhì)在甘氨酸和纈氨酸之間的酰胺鍵處分裂，供體和受體分開，而富含π的基序（HHYY）繼續(xù)停留在受體上。芘標記肽通過ππ相互作用和疏水作用牢牢的吸附在氧化石墨烯表面。然而，由于大多數(shù)肽與蛋白結(jié)合不容易產(chǎn)生一個測量的輸出信號，這嚴重的阻礙了使用肽作為檢測探針對蛋白的均相檢測。曲曉剛[52]等報道了一種均相的熒光方法用于檢測多種蛋白酶，基于一個金納米粒子肽熒光團結(jié)合物作為基底（）。 基于隨機噬菌體展示肽傳感器Table Sensors based upon random phage display peptidesReferenceTargetSensing peptideSensorSensitivity[40]Murine myofibers7mer ASSLNIAAcoustic waveMurine skeletal proteins 10 μg/ml, apparent Kd 280 μg/ml Fast response (100 s), whereas a similar, antibodybased sensor shows 100min equilibration time[41]Ps. Aeruginosa wholecells9mer QRKLAAKLT resembling thesequence of natural CPPQCM[42]SW620 metastatic cells12merPotentiometric100 cells/ml blood[43]Anthrax protectiveantigen16mer HKHAHNYRLPASGGGKKSquare wave voltammetriKd pM, dynamic range 4–120 pM, LOD pM[44]Enterotoxin B12merFiber optical. The RAPTOR optical probe was used[41]Dynamic range 1031 μg/well, LOD 103 μg/well[45]Cardiac troponin I12mer FYSHSFHENWPSQCM and EISQCM: dynamic range μg/ml, LOD μg/ml EIS: LOD μg/ml[46]Streptavidin12mer from filamentous R5C2 phagesOptofluidic ring resonatorLOD 100 pM, apparent Kd 25 pM[31]Methotrexate11mer SIFPLCNSGAL selected directly on a QCM deviceQCM and SPRRange 2–50 μM, Kd μM[32]TNT12mers sharing a HR consensus dyadFluorimetric flow sensorDynamic range 6–100 mg/ml, LOD mg/ml[34]Porphyrin5mer HASYS peptide immobilized on latex beads to allow 2:1 peptidetotarget plex formationQCMDynamic range μg/ml, LOD μg/ml[39]EDCsPeptide α/β IRIFSERαLBD 100μg/mL incubated with 10 μg/mL βestradiol and with 10 μg/mL tamoxifen Discrimination between agonists and antagonists of ERαCPP cellpenetrating peptide, EDCs endocrinedisrupting chemicals, EIS electrochemical impedance spectroscopy, ERα estrogen receptor α, LBD ligand binding domain, RIFS reflectometric interference spectroscopy, TNT 2,4,6trinitrotoluene 以肽為分子識別物質(zhì)的生物分析法研究進展肽對于模仿發(fā)生在生物大分子（如酶、抗體、藥物受體）和跨膜蛋白中的分子識別機制[47–49]，是一個很好的選擇。非設(shè)計肽庫也許可提供能夠區(qū)分目標物之間的精細結(jié)構(gòu)差異，甚至不同構(gòu)象的肽。選擇肽粘合劑是相當困難的，肽粘合劑能區(qū)分固定化和自由存在的目標物，如先前報道的抗睪酮和抗甲氨蝶呤肽的選擇[30，31]。噬菌體展示庫含有多達109個不同的噬菌體克隆元素，每個通過隨機的基因序列產(chǎn)生一個不同的肽。盡管這些方法已經(jīng)取得了重大成就，但計算的和實驗的蛋白設(shè)計仍然存在嚴重的技術(shù)問題。由于大量負電荷的存在，肽在中性PH條件下是展開的，然而在鋅離子存在時，羧基發(fā)生絡(luò)合作用，肽折疊成一個螺旋環(huán)螺旋構(gòu)象。近來，為了仿造蛋白質(zhì)的化學(xué)和結(jié)構(gòu)復(fù)雜性，使用一個納米工程學(xué)的方法設(shè)計的肽覆蓋基質(zhì)表面，賦予一定的穩(wěn)定性[22]，極小的非特異性相互作用[23]，并且提供了一個適當?shù)哪０逵脕斫Y(jié)合幾個分子受體或者識別官能團[23，24]。含有非天然氨基酸的如此短的序列所獲得的靈敏度，與先前作者用純天然寡肽檢測阿特拉津和其他氯化除草劑所獲得的結(jié)果相比，是一個明顯的進步[17]。該鋅指肽在鋅結(jié)合之后構(gòu)象改變，一個熒光團/猝光劑連接在肽的末端，通過測定熒光的猝滅來檢測鋅。這個話題在2006年Chow and Gooding [6]就評論過，在這里，我們報道一些近來令人關(guān)注的例子（如表1所示）。但由于設(shè)計的肽在硅片設(shè)計中的應(yīng)用極為困難，此類傳感器的使用受到了很大限制。而且肽類藥物的主要特點是用量小、生物活性強，對自身免疫性疾病、癌癥、精神失常、高血壓、記憶力減退和代謝及某些心血管等疾病有顯著的療效，具有廣泛的應(yīng)用前景[5]。 肽 肽的概述肽是由兩個或兩個以上氨基酸通過肽鍵共價連接形成的聚合物，組成蛋白質(zhì)的20個天然氨基酸以不同的組成和排列方式構(gòu)成不同的肽類。在生物傳感器分子識別元件中，酶和抗體的制備比較繁瑣、固定時間和保存時間過長均易失活、使用時對環(huán)境和樣品條件的要求也比較高。但因目前篩選的適體鏈種類較少，使用范圍受到限制。所以從本質(zhì)上來說，蛋白質(zhì)與肽均是由氨基酸分子構(gòu)成的，只是構(gòu)成分子的數(shù)量不同而已。因此，肽類藥物的研究是目前醫(yī)藥研發(fā)領(lǐng)域中最活躍、進展最快的部分，也是21世紀最有前途的產(chǎn)業(yè)之一。人工、微型化的受體可從已知序列的天然受體壓縮到一個可合成、但性質(zhì)穩(wěn)定的受體中獲得。銅被肽絡(luò)合的機制已在金微懸臂梁表面進行了直接的研究[9]，根據(jù)銅的濃度和時間產(chǎn)生不同的響應(yīng)。鉛離子與傳感肽絡(luò)合之后，肽納米管上獲得形核作用的鉛減少。polyH sequenceSPRI microarrayLOD 10 μM, similar to what it is usually obtained with labelfree biosensors for ions[14]VOCsShortchain polypeptides。第一個傳感器中，自組裝單層體現(xiàn)了一個固定化的，能模仿毒素的天然合作伙伴的熒光肽被聚集在金電極表面和陣列微流體通道接口處（）。使用碳酸酐酶作為一個目標物驗證了這個概念，利用一個化學(xué)修飾肽，在肽的環(huán)上含有一個碳酸酐酶抑制劑的一部分[28]。此外，在計算方法上，人們不得不應(yīng)付與突變空間有關(guān)的組合爆炸：如果你沿著肽序列選擇