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【正文】 Gln） 向 UAG（ stop） 的突變 。oriGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT396 452E co RI S st I K p n I S m a I X b a I S a lI P st I S p h I Hi n d III質(zhì)粒 重要的大腸桿菌質(zhì)粒載體 pUC18 / 19： 正選擇標記 lacZ’ 的顯色原理 pUC18/19 Plac lacZ’ MCS b半乳糖苷酶的 a肽段 a b OHHHOHHO HH O HCH 2 OHONClBrClBrClBrONN5溴 4氯 3吲哚基 bD半乳糖苷 Xgal 質(zhì)粒 重要的大腸桿菌質(zhì)粒載體 pGEM3Z： 多拷貝 裝有兩個噬菌體的強啟動子 裝有多克隆位點（ MCS） 正選擇顏色標記 lacZ’ 用于外源基因的高效表達 注意： T7和 SP6啟動子特異性地由噬菌體 DNA編碼的 RNA聚合 2743 bp MCS lacZ’ PT7 ori Apr pGEM3E PSP6 酶所識別，因此相應(yīng)的受體菌必須表達噬菌體 RNA聚合酶，如： BL21（ DE3） 等 噬菌體或病毒 DNA 噬菌體或病毒是一類非細胞微生物，能高效率高特異性地侵染 宿主細胞，然后或自主復(fù)制繁殖，或整合入宿主基因組中潛伏 起來，而且在一定的條件下上述兩種狀態(tài)還會相互轉(zhuǎn)化。 DNA重組技術(shù)一般需要 l噬菌體進入溶菌狀態(tài) 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構(gòu)建： 縮短長度 野生型 lDNA包裝的上限為 51kb， 本身長度為 ， 只有當插入的外源 DNA片段不大于 ， 才能被包裝成有感染力的噬菌體顆粒 。 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA重組分子的體外包裝： lDNA重組分子需在體外人工包裝成有感染力的噬菌體重組顆粒 ， 方可高效導(dǎo)入受體細胞 用于體外包裝的蛋白質(zhì)可直接從感染了 l噬菌體的大腸桿菌中提取 ， 現(xiàn)已商品化 。當大片段的外 源 DNA克隆在這些染色體載體上后，便形成重組人造染色體， 它能像天然染色體那樣，在受體細胞中穩(wěn)定的復(fù)制并遺傳。 動植物病毒種類繁多，每一種動植物都有多種特異性的病 毒。含有完整標記 基因的 l載體進入受體細胞后，建立溶 原狀態(tài)，細菌生長緩慢，形成渾濁斑； 當外源 DNA插入到標記基因中，基因滅 活， l重組分子便進入溶菌循環(huán)，形成 透明斑 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構(gòu)建： 加裝選擇標記 lacZ lacZ基因編碼 b半乳糖苷酶，能催化 無色的 Xgal生成藍色化合物。 目前實驗室使用的大腸桿菌質(zhì)粒大多是由少數(shù)幾個野生型質(zhì)粒構(gòu)建的： pSC101 kb 拷貝數(shù) 5 四環(huán)素抗性標記基因 Tcr ColE1 kb 拷貝數(shù) 20 30 大腸桿菌內(nèi)毒素標記基因 E1 RSF2124 ColE1衍生質(zhì)粒 氨芐青霉素抗性標記基因 Apr 質(zhì)粒 重要的大腸桿菌質(zhì)粒載體 松弛型復(fù)制 p BR3 2 24 3 6 3 b pOr ig in o f R ep lic at io nR OPR OIS al IB am H ITcrP vu IP st IP st IE co R IC la
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