【正文】 菌濃密地劃線接種在上述斜面上，于35℃培養(yǎng)1~4天，逐日觀察結(jié)果。 [用途] 測(cè)定細(xì)菌利用碳源的能力。注：⑴ 使用的含碳化合物主要為各種糖類和有機(jī)酸類。[用法]將試驗(yàn)菌接種培養(yǎng)基，經(jīng)35℃培養(yǎng)l~4 天，每天吸取培養(yǎng)液1ml，加入液甲、乙試劑各2滴，陽(yáng)性者立刻或數(shù)秒鐘內(nèi)顯紅棕色，陰性則不變色。亦可在培養(yǎng)基內(nèi)加1只小倒管，若有氣泡產(chǎn)生，表示有氮?dú)馍?。方法是在培養(yǎng)物內(nèi)加入硝酸鹽還原試劑甲、,如無(wú)紅色出現(xiàn)為陽(yáng)性，說(shuō)明亞硝酸鹽已被還原。先將蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉加熱溶于蒸餾水中，加入膽汁混勻后，分裝試管，每管3m1，置115℃滅菌20min，冷藏備用。[用法]在血瓊脂平板上，先以金黃色葡萄球菌劃一橫線接種，再將被檢的223。（4）用葡萄球菌223。紙條變黑為陽(yáng)性，無(wú)變化為陰性。 [配法] 奧普托欣（Optochin，乙基氫化羥基奎寧，ethylhydrocupreine hydrochloride)10mg溶于10m1蒸餾水中，取1m1，加入200片直徑6mm的滅菌紙片中，使其充分吸收，于37℃烘干備用。 6. O/129試驗(yàn)紙片[用途] 用于弧菌屬的鑒定。，加入葡萄糖溶解后，分裝試管，每管2~3m1， 121℃滅菌15min，備用。陽(yáng)性結(jié)果為實(shí)驗(yàn)管混濁，對(duì)照管混濁；陰性結(jié)果(敏感)為實(shí)驗(yàn)管清晰(不生長(zhǎng))，對(duì)照管混濁(生長(zhǎng))。 [配法] 多價(jià)蛋白胨7g，葡萄糖5g，磷酸氫二鉀5g，蒸餾水1L。觀察時(shí)按培養(yǎng)基試劑10﹕1比例滴加試劑，混合，置37℃4h或48℃2h，充分振搖，變紅色為陽(yáng)性。 ⑶ 試劑中加入400 g/L 氫氧化鉀是為了吸收二氧化碳。國(guó)內(nèi)多采用貝立脫法。[保存] 置4℃冰箱，培養(yǎng)基2周內(nèi)用完。[用法]將待檢菌接種培養(yǎng)基，經(jīng)35℃培養(yǎng)18~24h，在培養(yǎng)物液面，徐徐加入靛基質(zhì)試劑數(shù)滴，陽(yáng)性者立即出現(xiàn)玫瑰紅色，陰性者呈黃色。WHO推薦改良KirbyBauer法抗菌藥物敏感試驗(yàn)，其技術(shù)簡(jiǎn)單，可重復(fù)性好，且特別適合快速生長(zhǎng)的致病菌。 常用的標(biāo)準(zhǔn)菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC 25923；大腸埃希菌ATCC 25922；銅綠假單胞菌ATCC 27853；糞腸球菌 ATCC 29212或33186；肺炎鏈球菌ATCC 6305；流感嗜血桿菌ATCC l0211。 [配法]牛肉浸湯600m1，蒸餾水400ml。溶于100ml蒸餾水中，即為含鎂離子10mg/ml貯存液。[用法] 取血液5ml及其它標(biāo)本直接種于高鹽、高滲糖液體培養(yǎng)基，置35℃培養(yǎng)l~7 天，每天觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。 [質(zhì)量控制] 用L型細(xì)菌做生長(zhǎng)試驗(yàn)，培養(yǎng)24~72h，生長(zhǎng)良好。 注：血漿要預(yù)先滅菌處理，并經(jīng)56℃水浴滅活30min。如有可疑L型菌落，用低倍鏡檢查。臨用時(shí)加熱溶解后，冷卻至56℃加入血漿20ml搖勻傾注平板。[用法]用無(wú)菌操作采集標(biāo)本，立即接種于L型細(xì)菌液體培養(yǎng)基和常規(guī)血液增菌培養(yǎng)基內(nèi)，標(biāo)本與培養(yǎng)基之比為1︰10，置35℃培養(yǎng)3~7 天，逐日觀察。[配法]新鮮牛肉500g，蛋白胨10g,氯化鈉30g，蔗糖150g，蒸餾水1L。注：NCCLS推薦使用含陽(yáng)離子MH培養(yǎng)基，即在MH液體培養(yǎng)基中含有鈣離子10 ~25mg/L，鎂離子10 ~25mg/L。生長(zhǎng)補(bǔ)充劑由下列試劑組成：，3mg硫胺，13mg對(duì)氨基苯甲酸， , ，Ⅰ,1mg嘌呤腺，10mg L谷氨酰胺，100mg葡萄糖。冷至50℃左右，吸取25m1培養(yǎng)基注入直徑90mm的平皿內(nèi)，制成厚度為4mm的瓊脂平板。第六節(jié) 抗菌藥物敏感試驗(yàn)培養(yǎng)基抗菌藥物敏感試驗(yàn)用于測(cè)定抗菌藥物或其它抗微生物制劑在體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力。⑵ 歐氏試劑：對(duì)二甲氨基苯甲醛1g溶于95%乙醇95ml中，溶解后慢慢加入濃鹽酸20m1。 ⑵ MR試驗(yàn)的正確性取決于足夠的孵育時(shí)間，接種細(xì)菌后至少要孵育24h。⑹ α萘酚乙醇溶液易失效，試劑放室溫暗處可保存1月。注：⑴ 加入OMeara試劑后要充分混合，促使乙酰甲基甲醇氧化，使反應(yīng)易于進(jìn)行。首先將氫氧化鉀溶解。 [用途] ⑴ 幫助腸桿菌屬與大腸埃希菌屬，葡萄球菌屬與微球菌屬的屬間鑒別；（2）幫助肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬結(jié)克雷伯菌間的菌種鑒別； （3）幫助蜂房哈夫尼亞菌與小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的菌種鑒定。將上述成分加熱溶解在三角燒瓶中， 121℃滅菌15min，臨用時(shí)加入50g/L ，分裝于無(wú)菌試管中，一份不加氰化鉀作對(duì)照。 [用途] 用于鑒定鏈球菌。 注：如果分離物生長(zhǎng)稀少，則很難正確判定結(jié)果。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。~ cm寬的紙條，用50 ~100g/L醋酸鉛溶液浸透、烘干，置于皿內(nèi)備用。⑵ 每批要用A、D群鏈球菌作陰性對(duì)照，用B群鏈球菌作陽(yáng)性對(duì)照。 [用途] 檢查細(xì)菌產(chǎn)生和合成CAMP因子的能力。 ％膽汁肉湯培養(yǎng)基 [用途] 用于鏈球菌屬的鑒別。24h觀察倒管中有無(wú)氣泡出現(xiàn)，若有氣泡則為陽(yáng)性，無(wú)氣泡為陰性。 ⑸ 若加入硝酸鹽試劑不出現(xiàn)紅色，需檢查硝酸鹽是否被還原。附：試劑配制 甲液：，5mol/L冰醋酸100ml。應(yīng)設(shè)已知菌陰性、陽(yáng)性對(duì)照。 ⑵ 接種時(shí)菌量應(yīng)適宜，過少可導(dǎo)致假陰性結(jié)果，接種物過量可導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。 [配法1(Simmons)] ，磷酸二氫銨1g，磷酸氫二鉀1g，枸櫞酸鈉5g，瓊脂20g,氯化鈉5g,2g/L 溴麝香草酚藍(lán)溶液40m1,蒸餾水1L(pH )。 ⑵ 陰性菌要觀察至第7天，方可報(bào)告。 [用途] 用于腸桿菌科的鑒定。[用途] 主要用于下述菌屬的鑒定：陽(yáng)性菌有糞產(chǎn)堿桿菌、亞利桑那菌、克雷伯菌；陰性菌有不動(dòng)桿菌屬、沙門菌屬、放線菌屬；特別是枸櫞酸桿菌，用于屬內(nèi)種的鑒定如弗勞地、異型枸櫞酸桿菌呈陽(yáng)性，而丙二酸鹽陰性枸椽酸桿菌呈陰性。前者多數(shù)為陽(yáng)性，后者均為陰性。[保存] 置4℃冰箱保存，2周內(nèi)用完。將上述兩種溶液合并混勻，補(bǔ)足水至lL，121℃滅菌15min，傾注平板備用。試劑可保存3月。注：ONPG溶液不穩(wěn)定，若培養(yǎng)基呈黃色即不可使用。 ⑵ 試管法：取瓊脂斜面（不含血液的）18~24h培養(yǎng)物，接種于試管內(nèi)，加入3%過氧化氫溶液1ml，如產(chǎn)生大量氣泡為陽(yáng)性。離心沉淀，立即混勻。 [用途] 測(cè)定細(xì)菌水解馬尿酸鈉能力。[用法] 接種待測(cè)菌株，35℃培養(yǎng)18~24h。尿素酶陽(yáng)性者斜面變紅色,陰性者顏色無(wú)變化。 [質(zhì)量控制]銅綠假單胞菌ATCC 27853陽(yáng)性；大腸埃希菌ATCC25922陰性。 [質(zhì)量控制] 金黃色葡萄球菌ATCC 25923和粘質(zhì)沙雷菌 ATCC 274陽(yáng)性。將載玻片孵育于35℃濕盒內(nèi)4h,取出觀察結(jié)果。陽(yáng)性菌初期由于細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸呈黃色，若繼續(xù)孵育，氨基酸經(jīng)脫羧產(chǎn)生胺類使培養(yǎng)基變堿，指示劑改變顏色，呈紫色或紫紅色。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。[用法] 將被檢菌接種培養(yǎng)基，置35℃培養(yǎng)18~24h。將分離的純菌接種到糖（醇）發(fā)酵管中，置35℃培養(yǎng)18～24h。[用法]取標(biāo)本接種于平板，置25℃或43℃微需氧環(huán)境中培養(yǎng)48h，菌落直徑達(dá)1~2 mm，不溶血。②?、僖?ml，再加萬(wàn)古霉素100mg和多粘菌素B ，搖勻后即可。在BCYE平板上，培養(yǎng)4～5 天，菌落直徑約1～2mm，并出現(xiàn)亮藍(lán)和切削玻璃樣的構(gòu)造；繼續(xù)培養(yǎng)后菌落增大呈黃綠色，較光滑。(2)指示劑不能用乙醇配制，因有些細(xì)菌可使乙醇產(chǎn)酸，導(dǎo)致發(fā)酵或氧化反應(yīng)影響結(jié)果判斷。 [配法] （1）HughLeifson培養(yǎng)基(革蘭陰性桿菌用)：蛋白胨2g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀 ，氯化鈉5g，溴麝香草酚藍(lán)（BTB），瓊脂 ，蒸餾水1L。[質(zhì)量控制] 參照麥康凱瓊脂。 [用途] 用于致病性、侵襲性和產(chǎn)毒性大腸埃希菌分離培養(yǎng)。[用法] 取待檢菌純培養(yǎng)物，用接種針作底層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫菌株可使底層或全管產(chǎn)生黑色反應(yīng)。[質(zhì)量控制] 大腸埃希菌菌落呈紫紅色，有時(shí)有金屬光澤，直徑＞；傷寒沙門菌菌落呈灰白色，直徑＞；金黃色葡萄球菌不生長(zhǎng)。[保存] 置4℃冰箱(避光)，1周內(nèi)用完。[保存] 避光，3天內(nèi)用完。[質(zhì)量控制]大腸埃希菌呈黃色菌落；宋內(nèi)志賀菌呈無(wú)色菌落；傷寒沙門菌 呈紅色菌落有黑心；金黃色葡萄球菌 抑制生長(zhǎng)。(3)此培養(yǎng)基pH ，應(yīng)呈淡紅色。待冷卻至50℃左右，加入中國(guó)藍(lán)、薔薇紅酸乙醇溶液混勻，立即傾注平板，凝固后備用。24h培養(yǎng)后，霍亂弧菌呈中心黑色、較大而扁平的菌落。注：⑴ 該培養(yǎng)基國(guó)內(nèi)有商品出售，多數(shù)產(chǎn)品已加入慶大霉素，使用時(shí)，應(yīng)詳閱說(shuō)明書。 [配法]蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，氯化鈉5g，枸櫞酸鈉10g，無(wú)水亞硫酸鈉3g，蔗糖(或白糖)10g，瓊脂15~20g，慶大霉素、多粘菌素B“雙抗液”2ml，蒸餾水1L。將上述成分稱量混合于水中加熱溶解，分裝121℃滅菌15min，傾注平板。置35℃培養(yǎng)12~16h，觀察結(jié)果。待冷至50℃左右，用無(wú)菌操作加入已滅菌的亞碲酸鉀溶液及羊血，混勻傾注平板。[用法] 將喉拭子直接接種于上述斜面上，置35℃培養(yǎng)16~24h。注：⑴ 本培養(yǎng)基由LowensteinJenden設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上改良。第四節(jié) 分離培養(yǎng)基 一、革蘭陽(yáng)性桿菌分離培養(yǎng)基 [用途] 用于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。 將上述成分溶解于水中,校正pH ，分裝于試管8~10ml，經(jīng)121℃滅菌15min備用。 將上述成分加熱溶于水中，分裝試管（15150mm），每管5~7ml，隔水煮沸5min備用。注：⑴ 亞硒酸鹽，包括亞硒酸鈉、亞硒酸氫鈉均可使用，但以亞硒酸氫鈉效果為好。置水浴隔水煮沸10~15min，立即冷卻，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩? 將上述成分（除酚紅指示劑、青霉素酶外）混合加熱溶解，再加酚紅，過濾分裝每瓶30～50ml，經(jīng)121℃滅菌15min和35℃24h無(wú)菌試驗(yàn)備用。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)表現(xiàn)的培養(yǎng)瓶，需連續(xù)觀察7d，仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)方可棄去。 [質(zhì)量控制] 培養(yǎng)基呈淡黃色半固體狀。 [用途] 常用于測(cè)定腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及營(yíng)養(yǎng)要求較高細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)。 [質(zhì)量控制] 化膿性鏈球菌ATCC 19615生長(zhǎng)良好，β溶血；肺炎鏈球菌ATCC 6303生長(zhǎng)良好，α溶血；表皮葡萄球菌ATCC 12228 生長(zhǎng)良好,不溶血。二、固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基[用途] 一般細(xì)菌和菌株的純化及傳種。 先將牛肉清洗，除脂肪、肌腱，并切塊絞碎。[用途] 一般細(xì)菌的增菌培養(yǎng)，加入1%的瓊脂粉亦可作營(yíng)養(yǎng)瓊脂。甲液：甲苯胺藍(lán) ，孔雀綠 2g/L， 95% ，蒸餾水100ml。 ②脫色液：濃鹽酸3ml，95%乙醇97ml。 、O139混合多價(jià)診斷血清及稻葉、小川、彥島O139分型血清 三、常用染色液⑴ 結(jié)晶紫溶液 A液：結(jié)晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸銨 ， 蒸餾水80 ml。 ⑶ 新生霉素紙片（）：抑菌圈≥16mm為敏感。質(zhì)控菌株：D群鏈球菌陽(yáng)性， A群鏈球菌陰性。腸致病性大腸埃希菌（EPEC）診斷血清，產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌（ETEC）診斷血清，腸侵襲性大腸埃希菌（EIEC）診斷血清，腸出血性大腸埃希菌（EHEC）診斷血清O157： H 7。 ⑴ 堿性復(fù)紅染色液： ①萋納石炭酸復(fù)紅溶液：堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。應(yīng)用液A液10份,B液1份,混合,室溫存放備用。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌生長(zhǎng)良好，靛基質(zhì)陽(yáng)性；傷寒沙門菌生長(zhǎng)良好，靛基質(zhì)陰性。 [配法] 新鮮除脂牛肉 500g，氯化鈉5g蛋白胨10g，蒸餾水1L。注:商品牛肉浸膏粉，一般使用量為3～5g/L。 將血瓊脂基礎(chǔ)經(jīng)121℃滅菌15min，待冷卻至50℃左右以無(wú)菌手續(xù)加入羊血，搖勻后立即傾注滅菌平皿內(nèi)，待凝固后，經(jīng)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)冷藏備用。[保存] 置4℃冰箱，1周內(nèi)用完。 將上述成分混合于水中，加熱溶解，~，分裝試管2/3左右高度，121℃高壓滅菌15min，成為半固體培養(yǎng)基，備用。如有細(xì)菌生長(zhǎng)，可出現(xiàn)數(shù)種不同的表現(xiàn)，應(yīng)隨時(shí)作分離培養(yǎng)，可選用血瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂及巧克力瓊脂平板等。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸櫞酸鈉3g，磷酸氫二鉀2g，5g/L對(duì)氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml， 4g/L酚紅溶液6ml，青霉素酶50 U，聚茴香腦磺酸鈉(SPS) ，蒸餾水1L。最后分裝于15150mm的試管內(nèi)，每管10ml。[保存]4℃保存，1周內(nèi)用完。 [配法]月示 胨 2g，蛋白胨8g，酵母膏2g，葡萄糖2g，枸櫞酸鐵10g，硫代硫酸鈉10g，磷酸氫二鈉4g，去氧膽酸鈉(進(jìn)口) ，蒸餾水1L。 [配法] 蛋白胨 20g，氯化鈉5g，蒸餾水100ml。注：若在每升堿性胨水中加入1%~ ml，則成為亞碲酸鉀堿性胨水，其增菌效果更為理想。[保存]置4℃冰箱內(nèi)2~4周有效。取出后采用間歇滅菌法，