【正文】 土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml純凈水或緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。修訂　1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2006－09－01。5 附加說(shuō)明 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、皎白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。 取一片速測(cè)卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上?！∽ⅲ罕疚膮⒄誈B159792002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄EGB14934—94《食(飲)具消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（十三）蔬菜農(nóng)殘的快速檢測(cè)1 原理農(nóng)殘速測(cè)卡是用對(duì)農(nóng)藥高度敏感的膽堿酯酶和顯色劑做成的酶試紙，可以快速檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯這兩類用量較大、毒性較高的殺蟲劑的殘留情況，選用的酶對(duì)甲胺磷敏感，抗干擾性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便。 證實(shí)試驗(yàn)：在每個(gè)平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒(méi)有金屬光澤的菌落)1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36177。2 檢驗(yàn)材料　乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、EMB、乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基、大腸菌群檢測(cè)紙片、無(wú)菌棉球、無(wú)菌水、酒精棉球、酒精燈、鑷子　3 檢驗(yàn)方法 人員手檢驗(yàn)（發(fā)酵法） 樣品采集被檢人雙手五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來(lái)回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10ml滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)。 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36177。 細(xì)菌總數(shù)檢查： 用滅菌吸管吸取1ml水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，共做2個(gè)。)9cmt：為平皿暴露于空氣中的時(shí)間(t=15分鐘)（這個(gè)公式根據(jù)：根據(jù)15分鐘內(nèi)在100 cm2面積上降落的細(xì)菌數(shù)約等于10升空氣中的含菌數(shù)而估計(jì)的。染色控制不好，易引起誤判； 乙醇脫色的程度。 固定：把涂有細(xì)菌的面朝上，在酒精燈火焰上通過(guò)三次，目的是殺死菌體細(xì)胞以及改變對(duì)染色劑的通透性，同時(shí)使涂片的菌體緊貼載玻片而不易被水沖洗脫落。 取1mL1∶10稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另?yè)Q一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1∶100稀釋液。在Baird－Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。2h。1℃ 24h涂片染色凝固酶試驗(yàn)觀察溶血報(bào)告5 操作步驟 稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。 菌型的判定和結(jié)果報(bào)告　　綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，按照GB/《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》中表8或有關(guān)沙門氏菌屬抗原表判定菌型，并報(bào)告結(jié)果。如尿素、KCN和賴氨酸3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。1℃分別培養(yǎng)18～24h(DHL)或40～48h(BS)，觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落，沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個(gè)平板上的菌落特征見(jiàn)表1。1℃ 1824h挑取可疑菌落TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、H2S），蛋白胨水（），尿素（），KCN, 賴氨酸非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果H2S 　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+/H2S +　靛基質(zhì)+尿素　KCN　賴氨酸+H2S +　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+ONPG甘露醇、山梨醇非沙門氏菌沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)非沙門氏菌報(bào)告5 操作步驟 前增菌取檢樣25g，加入225mL緩沖蛋白胨水于均質(zhì)杯內(nèi)。注：本文參照SN016992《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法》（六）沙門氏菌檢驗(yàn)1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)方法。1℃的培養(yǎng)96h記錄有無(wú)生長(zhǎng)。2h后，上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng)。2h。2h。1℃的培養(yǎng)48177。每個(gè)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯，每管接種1ml。1℃、177。否則，應(yīng)找出原因，加以校正。 培養(yǎng)待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，立即放進(jìn)36177。 平板接種 對(duì)于每個(gè)樣品，選用合適的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。如有包裝，則用75％乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。7 設(shè)備使用原則 實(shí)驗(yàn)設(shè)備的使用由實(shí)驗(yàn)員嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書進(jìn)行，其他人員不得隨意操作。 器材三角瓶、試管、燒杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、鋁箔紙、角匙、杜氏小管、硅膠塞、電爐 培養(yǎng)基的種類營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(附加抗菌素)、平板計(jì)數(shù)瓊脂、月桂基硫酸鹽胰蛋白凍肉湯、煌綠乳糖膽鹽肉湯、EC肉湯、高鹽察氏瓊脂、三糖鐵瓊脂等 方法步驟 培養(yǎng)基的制備： 稱量：根據(jù)培養(yǎng)基的配方，稱取適量藥品于搪瓷杯中； 溶解：用量筒量取所需水量，置電爐上加熱，一邊攪拌，至完全溶解，加熱至沸騰，拔掉電源，待冷卻； 分裝：根據(jù)不同需要，立即趁熱分裝入三角瓶或試管中，分裝三角瓶以不超過(guò)三角瓶一半為宜，分裝試管一般為管長(zhǎng)的1/5（需根據(jù)試管的大小而定）。洗好后的器皿應(yīng)倒置晾干或置于干燥箱中干燥至無(wú)水滴。 一般新的玻璃器皿用2%的鹽酸液浸泡數(shù)小時(shí)，后用水沖洗干凈。 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃，30min高壓滅菌。 取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無(wú)菌物品使用。 對(duì)有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，是否符合于進(jìn)行滅菌處理的要求。 在無(wú)菌間需用安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過(guò)濾裝置。樣品檢驗(yàn)過(guò)程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫出試驗(yàn)記錄，以作為對(duì)結(jié)果分析、判定的依據(jù)，記錄要求詳細(xì)、清楚、真實(shí)、客觀、不得涂改和偽造。 固體或半固體樣品可用滅菌的均質(zhì)杯稱取一定量，再加適量的稀釋液或培養(yǎng)基進(jìn)行均質(zhì)，從樣品的均質(zhì)到稀釋和接種，相隔時(shí)間不應(yīng)超過(guò)15分鐘。 檢驗(yàn)冷凍樣品前應(yīng)先使其融化。 在將冷凍食品送到實(shí)驗(yàn)室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。 采樣必須遵循無(wú)菌操作程，容器必須滅菌，避免環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新潔爾滅、酒精等消毒物滅菌，更不能含有此類消毒藥物，以避免殺掉樣品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可使用。5 實(shí)驗(yàn)完畢，及時(shí)清理現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)用具，對(duì)染菌帶毒物品，進(jìn)行消毒滅菌處理，并填寫日常工作記錄。4 工作完畢，兩手用清水肥皂洗凈，必要時(shí)可用（殺菌劑）新潔爾滅、過(guò)氧乙酸液浸泡手，然后用水沖洗，工作服應(yīng)經(jīng)常清洗，保持整潔，必要時(shí)高壓消毒。 應(yīng)設(shè)法保持樣品原有微生物狀況，在進(jìn)行檢驗(yàn)前不得污染，不發(fā)生變化。 不要使樣品過(guò)度潮濕，以防食品中固有的細(xì)菌增殖。3 檢驗(yàn)樣品的制備 樣品的全部制備過(guò)程均應(yīng)遵循無(wú)菌操作程序。 粘性液體樣品可用滅菌容器稱取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養(yǎng)基。5 檢驗(yàn)記錄和結(jié)果的報(bào)告 經(jīng)檢驗(yàn)的每份樣品都應(yīng)有完整的檢驗(yàn)記錄。 處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。 壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計(jì)所標(biāo)示的狀況是否吻合，管道有無(wú)堵塞。 物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無(wú)菌物品使用。 經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。 注意事項(xiàng) 任何洗滌方法，都不應(yīng)對(duì)玻璃器皿有所損傷，不能用有腐蝕作用的化學(xué)藥劑，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品來(lái)擦拭玻璃器皿。用洗衣粉水洗去油污，然后用自來(lái)水沖洗。目前所用培養(yǎng)基均為已配制好的生物試劑和紙片。 量取240ml蒸餾水（稀釋水）于250ml的三角瓶中，塞上瓶塞用牛皮紙包扎好，高壓滅菌備用。1℃）、均質(zhì)器、振蕩器、吸管（1ml、10ml）、平皿、稀釋瓶、天平等3 培養(yǎng)基和試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂、75％乙醇、磷酸鹽緩沖稀釋液4 操作程序 樣品制備 以無(wú)菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。吸入的液體應(yīng)先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端離開液面并貼在容器內(nèi)壁將液體調(diào)至所要求的刻度。將樣品液加入平皿后應(yīng)立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)樣品從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過(guò)20min。 操作者對(duì)同一平板復(fù)核自己的計(jì)數(shù)結(jié)果，其差異應(yīng)在5％之內(nèi)，而其他人對(duì)這一平板重復(fù)計(jì)數(shù)，其差異應(yīng)在10％這內(nèi)。2 設(shè)備和材料吸管（1ml、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36177。5 大腸菌群的測(cè)定 大腸菌群MPN值的