【正文】 ，所有帶菌的培養(yǎng)基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快滅菌和洗刷。 檢驗結(jié)束后，根據(jù)檢驗結(jié)果，及時填寫檢驗報告書，簽字并經(jīng)負責(zé)人審核簽字后發(fā)出。 無菌間應(yīng)保持清潔，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與試驗無關(guān)的物品。3 消毒滅菌要求微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。 手提式高壓鍋：將物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過擠。 滅菌處理手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進行： 手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時應(yīng)將水量補足，水變混濁需要更換）。 達到規(guī)定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸汽，待壓力恢復(fù)到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再打開蓋取物，以防止突然減壓液體劇烈沸騰活容器爆破。 培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達到者應(yīng)廢棄。 每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。 染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中，最少浸泡24小時，再經(jīng)121℃，30min高壓滅菌。 污染的工作服或進行烈性菌試驗所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。 用過的器皿應(yīng)立即洗滌，放置太久會增加洗滌困難。有油的器皿不要與無油的器皿混在一起，否則使本來無油的器皿沾上了油垢，浪費藥劑和時間。 載玻片及蓋玻片的洗滌法：新載玻片及蓋玻片先在20%的鹽酸溶液中浸一小時，然后用自來水沖洗2~3次，最后用蒸餾水換洗2~3次。6 培養(yǎng)基、無菌水的制備 基本原理培養(yǎng)基的種類很多，不同微生物所需要的培養(yǎng)基不同。液體培養(yǎng)基如乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基約分裝10毫升左右。 用100ml量筒量取95ml蒸餾水（稀釋水）裝入150ml的三角瓶中。 實驗設(shè)備的日常維護保養(yǎng)由實驗員根據(jù)設(shè)備操作說明書進行，出現(xiàn)不可排除的故障時，經(jīng)部門總經(jīng)理批準，商請專業(yè)人員維修。本文適用于航空配餐的各種半成品、成品及原料，有專門規(guī)定的檢驗方法的除外。 制備樣品勻液以無菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min均質(zhì)12min，制成1：10的樣品勻液。振搖時，幅度為30cm，7s內(nèi)振搖25次。 分別用滅菌吸管吸取1ml樣品液放入作了適宜標志的平皿內(nèi)。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。1℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48177。25250個菌落為合適范圍。 計算和記錄數(shù)字適宜稀釋度的兩個平板的菌落數(shù)平均值或兩個稀釋度的平板菌落數(shù)平均值乘以相應(yīng)稀釋度倍數(shù)計算出每克（毫升）樣品中平板菌落數(shù)。注：本文參照SN016892《出口食品平板計數(shù)》（五）食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法。℃）、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡等3 培養(yǎng)基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂（EMB）、營養(yǎng)瓊脂斜面、色氨酸肉湯、MRPV培養(yǎng)基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液、生理鹽水、革蘭氏染色液、Kovacs氏靛基質(zhì)試劑、甲基紅指示劑、Vogespros kauer（VP）試劑、4 樣品制備 以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。 稀釋樣品勻液用10ml滅菌吸管準確吸取1：10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。 將接種管置于36177。如所有LST肉湯管均未產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則進一步作證實試驗。2h。2h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中。水浴箱的水平面應(yīng)高于肉湯培養(yǎng)基液面。 結(jié)果報告：按產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報告每克（毫升）樣品中糞大腸菌群的MPN值。 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基進行生化試驗。 MRVP培養(yǎng)基：在36177。　　將 MRVP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5滴甲基紅溶液。 LST肉湯：于36177。大腸桿菌為革蘭氏陰性。本文適用于航空食品的檢驗。1℃ 4h10ml勻液+SC100ml10ml勻液+MM(或TTB)100ml　　　　　　　　　42℃ 1824h　　　　　　36177。用均質(zhì)器以8000～10000r/min打碎1min，于36177。 分離取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個亞硫酸鉍瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板?！　”?　沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ沙門氏菌Ⅲ（即亞利桑那菌）BS瓊脂產(chǎn)硫化氫菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株不產(chǎn)硫化氫，形成灰綠色的菌落周圍培養(yǎng)基不變黑色有金屬光澤DHL瓊脂無色半透明；產(chǎn)硫化氫菌落中心帶黑色或幾乎全黑色乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶黑色 生化試驗 自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。1℃培養(yǎng)18～24h，必要時可延長至48h，按表3判定結(jié)果。如有2項異常，則按A3判定為弗勞地氏檸檬酸桿菌。同時，沙門氏菌應(yīng)為賴氨酸＋，但甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸－。注：本文參照GB/《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》（七）金黃色葡萄球菌檢驗1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中金黃色葡萄球菌的檢驗方法。1℃ 2hBP平板36177。 吸取10mL上述混懸液，接種于10mL雙料胰蛋白胨大豆肉湯中，置36177。2h。 挑取可疑菌落移種到肉湯培養(yǎng)基中，置36177。試驗中需同時做已知陽性和陰性對照。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。2 設(shè)備和材料溫箱（25～28℃）、振蕩器、天平、玻塞三角瓶（500mL）、平皿（直徑9cm）、吸管（1mL及10mL）、酒精燈等。 按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸管，根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然后將涼至45℃左右的培養(yǎng)基注入平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于25～28℃溫箱中，3d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5d。其過程是：草酸銨結(jié)晶紫初染→路哥爾氏碘液媒染→95%乙醇脫色→蕃紅花紅復(fù)染。 初染：用草酸銨結(jié)晶紫液初染1分鐘，水洗、吸干。 鏡檢：在顯微鏡油浸鏡下檢查革蘭氏陽性菌和陰性菌染色的差異，并觀察菌體形態(tài)。如脫色過度，則陽性菌被誤染為陰性菌；若脫色不夠，則陰性菌被誤染為陽性菌。 在不同地點將培養(yǎng)皿分別打開，在空氣中暴露15分鐘，立即將培養(yǎng)皿蓋好，作上記號，并作一空白對照。）注：本文參照GB159792002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄E（十一） 水中微生物的檢驗1 基本原理細菌總數(shù)是指水樣在一定條件下培養(yǎng)后所得1ml水樣所含菌落的總數(shù)。按國家飲用水衛(wèi)生標準規(guī)定，1毫升自來水中雜菌數(shù)不得超過100個，大腸菌群數(shù)1000毫升水中不得超過3個才算合格。 分別傾注約15ml已熔化冷卻至45℃左右的營養(yǎng)瓊脂，混勻后置37℃培養(yǎng)24小時進行菌落計數(shù)，同時應(yīng)作一空白對照。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24177。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18~24小時，取出觀察菌落形態(tài)。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報告為大腸菌群陽性。 細菌菌落總數(shù)的檢測將已采集的樣品在6h內(nèi)送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1ml樣液，放入滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置36177。如所有發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。1℃培養(yǎng)24177。 將已采樣的紙片置37℃培養(yǎng)16－18小時，觀察紙片顏色變化情況。該方法已經(jīng)國家標準委員會通過，定為國家標準方法GB/。 將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。 放置10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。4 結(jié)果判定與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果，不變藍為強陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量較高，顯淺藍色為弱陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量相對較低。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提或采用表面測定法。空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少、預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤，二是