放線菌素d誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)(存儲(chǔ)版)
【正文】 復(fù)合物，導(dǎo)致細(xì)胞色素 C釋放。相反，在細(xì)胞壞死時(shí)，細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生滲漏，細(xì)胞內(nèi)容物，包括膨大和破碎的細(xì)胞器以及染色質(zhì)片段，釋放到胞外，導(dǎo)致炎癥反應(yīng) 細(xì)胞凋亡的 形態(tài)學(xué)特征 ◆ 凋亡的起始：細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)如微絨毛消失 ， 細(xì)胞間接觸的消失 ， 但細(xì)胞膜依然完整；線粒體大體完整 ， 但核糖體逐漸從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上脫離 ， 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹 ， 并逐漸與質(zhì)膜融合；染色質(zhì)固縮 ， 形成新月形帽狀結(jié)構(gòu)等形態(tài) ， 沿著核膜分布 ◆ 凋亡小體的形成：核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片段 ， 與某 些細(xì)胞器如線粒體一起聚集 ， 為反折的細(xì)胞質(zhì)膜所包圍 。在熒光顯微鏡下，被 Hochest33258染色的正常細(xì)胞呈現(xiàn)均勻的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為團(tuán)狀分布的致密濃染顆粒，二者區(qū)別明顯。 ? Hochest33258熒光染料能夠和 DNA特異結(jié)合，對(duì)正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞均能染色，受到紫外光激發(fā)可發(fā)出綠色熒光。放線菌素 D誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察 ? 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 ? 觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)變化。 ? 凋亡細(xì)胞的核 DNA的斷裂發(fā)生在核小體之間，因此產(chǎn)生的斷裂 DNA在電泳時(shí)會(huì)呈現(xiàn)180～ 200bp整數(shù)倍大小的階梯狀條帶（ ladders），這是識(shí)別凋亡細(xì)胞的可靠生化特征。 （ 染色時(shí)看上次結(jié)果 ） 【 觀察與結(jié)果 】 ? Hela細(xì)胞經(jīng)過放線菌素 D誘導(dǎo)后，可產(chǎn)生不同程度的細(xì)胞凋亡。整個(gè)過程中，細(xì)胞質(zhì)膜的整合性保持良好，死亡細(xì)胞的內(nèi)容物不會(huì)逸散到胞外環(huán)境中去，因而不引發(fā)炎癥反應(yīng)。 裂解參與細(xì)胞連接或附著的骨架和其他蛋白 ， 使凋亡細(xì)胞皺縮 、 脫落 ， 便于細(xì)胞吞噬； 導(dǎo)致膜脂 PS重排 ， 便于吞噬細(xì)胞識(shí)別并吞噬 。 Ced3哺乳類同源物是 ICE(Interleukin 1converting enzyme)， 即 Caspase1 ● Caspase家族與凋亡 ● Bcl2家族 、 線粒體與細(xì)胞凋亡 ● 細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理 Caspase家族與凋亡 ◆ Caspase家族 細(xì)胞凋亡 (Apoptosis) ● 細(xì)胞凋亡的概念及其生物學(xué)意義 ● 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征 ● 細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控機(jī)理 一、細(xì)胞凋亡的概念及其生物學(xué)意義 ● 概念： 細(xì)胞凋亡是一個(gè)主動(dòng)的由基因決定的自動(dòng)結(jié)束生命的 過程 ， 所以也常常被稱為細(xì)胞編程死亡 （ programmed cell death, PCD） 。 ? 加入 2ml PBS懸浮細(xì)胞 ， 離心去上清；再加入 液懸浮和固定細(xì)胞 10分鐘 。 細(xì)胞死亡有兩種形式：
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