實驗二gstz基因的pcr擴增(存儲版)
【正文】 亦隨之增多。 ? 復性時間一般為 30～ 60sec，足以使引物與模板之間完全結(jié)合。 酶濃度過高時 ， 會出現(xiàn)非特異性擴增；過低時擴增產(chǎn)物量很低 。實驗二 GSTZ基因的 PCR擴增 Amplifying GSTZ gene by Polymerase Chain Reaction 核酸的體外擴增 ? 真核細胞內(nèi) DNA的復制 ? 聚合酶鏈反應(yīng)（ Polymerase Chain Reaction， PCR） The Nobel Prize in Chemistry 1993 for contributions to the developments of methods within DNAbased chemistry for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) method Kary B. Mullis La Jolla, CA, USA B:1944 一、 PCR的基本原理： 一種模擬天然 DNA復制的體外擴增法 PCR反應(yīng)三部曲： 變性 (denature)： 加熱使雙鏈 DNA解開螺旋 ↓ 退火 (annealing) 在退火溫度條件下引物同模板雜交 ↓ 延伸 (extend) 在 Taq DNA聚合酶， dNTPs， Mg2+ 和合適 pH緩沖液存在條件下延伸引物 PCR反應(yīng)體系 ? DNA模板 template ? 引物 primers ? dNTPs ? 耐熱聚合酶 Taq DNA polymerase ? 反應(yīng)緩沖液 reaction buffer ? MgCl2 試劑 原液濃度 工作濃度 50?l體系 PCR緩沖液 10? 1? 5?L 上游引物 10?mol/L ?mol/L ?L 下游引物 10?mol/L ?mol/L ?L dNTPs ?mol/L 4?L MgCl2 25mmol/L ?L DNA模板 ～ 10ng ddH2O 補足 ?L Taq酶 1U/?L ?L體系 2. 5?L PCR PARAMETER ? Predenature: 94℃ 5min ? PCR Cycles: ? Denature 94 ℃ 40sec ? Annealing 58 ℃ 35sec ? Extend 72 ℃ 1min30sec ?Totally 35~40 cycles ? Postextend: 72 ℃ 7min PCR反應(yīng)體系 ? DNA模板 template ? 引物 primers ? dNTPs ? 耐熱聚合酶 Taq DNA polymerase ? 反應(yīng)緩沖液 reaction buffer ? MgCl2 PCR反應(yīng)體系 ? DNA模板 template ? 引物 primers ? dNTPs ? 耐熱聚合酶 Taq DNA polymerase ? 反應(yīng)緩沖液 reaction buffer ? MgCl2 引物 人工合成的寡核苷酸 ?一般 PCR 反應(yīng)中引物的終濃度為 1?mol/L， 在此范圍內(nèi)產(chǎn)物量基本相同 。 反應(yīng)緩沖液 ?TrisHCl ?KCl ?酶的穩(wěn)定劑 A typical reaction buffer for PCR would something like: 10mM Tris, pH 50mM KCl % gelatin PCR反應(yīng)體系 ? DNA模板 template ? 引物 primers ?
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