生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制(存儲(chǔ)版)
【正文】 ++ + 成本（以 MTT為 1時(shí)） 60 80100（試劑盒） 1 2 缺點(diǎn) 使用同位素 不適合 檢出大量未增殖 檢出未增 浮游細(xì)胞 細(xì)胞，處理時(shí)費(fèi)力 殖活細(xì)胞 生物學(xué)活性測(cè)定分析方法 用能誘導(dǎo) 50%最大反應(yīng)的待測(cè)樣品最高稀釋度作為參考效價(jià)（或滴度），或以此稀釋度中所含樣品的量為 1單位，即以此稀釋度的倒數(shù)為待測(cè)樣品所含的單位數(shù)。 不同生物活性測(cè)定方法的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)表 測(cè)定方法 規(guī)定標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物基礎(chǔ)的生物活性測(cè)定 70%～ 130%標(biāo)示量 細(xì)胞基礎(chǔ)的生物活性測(cè)定 80%～ 120%標(biāo)示量 體外酶法的生物活性測(cè)定 85%～ 115%標(biāo)示量 受體結(jié)合的生物活性測(cè)定 85%～ 115%標(biāo)示量 生物學(xué)活性效價(jià)測(cè)定過(guò)程中 標(biāo)準(zhǔn)品的作用 生物學(xué)活性測(cè)定變異范圍大，同樣制品在不同實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果差異很大，必須有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。 HPLC法：分子篩、反相層析，離子交換層析，盡量采用與 SDSPAGE原理不同的反相或離子交換層析，不主張用分子篩分析。 ? 凝膠過(guò)濾（分子篩）法：根據(jù)蛋白分子大小和性狀進(jìn)行測(cè)定。 ?重組產(chǎn)品一級(jí)結(jié)構(gòu)不含芳香族氨基酸，可不做紫外吸收光譜測(cè)定。 殘余雜質(zhì)檢測(cè) 殘余雜質(zhì)分類(lèi) a、外來(lái)污染物：微生物、熱原、細(xì)胞成分（蛋白質(zhì)、 DNA等）、培養(yǎng)基成分、純化步驟引入的成分（親和柱中的抗體、增溶用的 SDS）等； b、與產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)：突變物、錯(cuò)誤裂解物，二硫化物異構(gòu)體、二聚體和多聚體；化學(xué)修飾形態(tài)（脫酰氨基或氧化形式、其他降解產(chǎn)物） 殘余雜質(zhì)檢測(cè)內(nèi)容 ?宿主細(xì)胞蛋白含量 ?宿主細(xì)胞 DNA ?鼠源型 IgG含量（ 10ng/劑量） ?蛋白 A含量 ?小牛血清殘留量 ?殘余抗生素（氨芐西林） ?內(nèi)毒素含量（ LAL） ?產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì) ?其他雜質(zhì)（加入的離子、 SDS、甲醛等） 宿主細(xì)胞蛋白含量 ?以雙抗體夾心 ELISA為宜，盡量不用斑點(diǎn)免疫。 ? 根據(jù)不同產(chǎn)品原液與成品、凍干與液體制劑的不同要求， 可選擇在－ 20℃ 、－ 80℃ 、4℃ 和常溫條件下保存。 測(cè)量范圍（ Range） 是指當(dāng)準(zhǔn)確性和精密性都能達(dá)到要求時(shí)所能測(cè)得的樣品中待檢物的最高和最低濃度范圍，它就是測(cè)定直線(xiàn)性的上下限，如果劑量和反應(yīng)間的關(guān)系不成直線(xiàn)，測(cè)量范圍可以通過(guò)校正曲線(xiàn)來(lái)測(cè)得。精密性分幾種：一種是實(shí)驗(yàn)內(nèi)的精密性（即 重復(fù)性 ），它是在同一次試驗(yàn)內(nèi)同一個(gè)樣品多次測(cè)定結(jié)果間的變異系數(shù)。參數(shù)的改變可以是室溫或培養(yǎng)溫度，或濕度、或改變培養(yǎng)時(shí)間，或?qū)υ噭┑?pH進(jìn)行較小范圍的調(diào)整等。 10% 殘留外源性 DNA ≤10ng/ 劑量 HPLC純度 ≥ % 1殘留抗生素活性 紫外光譜掃描應(yīng)為 278nm177。 生物技術(shù)藥物生物學(xué)活性 測(cè)定方法的驗(yàn)證 生物學(xué)活性測(cè)定驗(yàn)證應(yīng)考慮的問(wèn)題： 生物學(xué)活性是相對(duì)活性，須用標(biāo)準(zhǔn)品或 參比品作對(duì)照； 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)必須是平 行的； 應(yīng)對(duì)方法的變異性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確 定生物學(xué)活性可接受的范圍； 應(yīng)對(duì)引起系統(tǒng)偏差的某些因素進(jìn)行綜合 分析。 LOQ是檢查測(cè)定藥品中不純物方法的一個(gè)參數(shù)。生物制品測(cè)定時(shí)一般與同時(shí)進(jìn)行的參考品進(jìn)行比較而得，此時(shí)的合格標(biāo)準(zhǔn)一般是測(cè)定出的參考品值的合格范圍或樣品與參考品之間的比值。特異性就象準(zhǔn)確性一樣，一般用偏差或測(cè)定值與已知值之間的錯(cuò)誤率（ %）來(lái)表示。 ?宿主細(xì)胞 DNA只作為一種細(xì)胞污染因素不作為一種 危險(xiǎn)因素 。每一種真核細(xì)胞具有其獨(dú)特的糖基化能力稱(chēng)為它的糖類(lèi)型，通過(guò)基因工程方法將一種糖蛋白在不同細(xì)胞中表達(dá)，可以導(dǎo)致生產(chǎn)不同類(lèi)型的糖蛋白，即使在相同的細(xì)胞類(lèi)型中，也可能會(huì)出現(xiàn)糖形成時(shí)由于一些寡糖的精細(xì)結(jié)構(gòu)不同等而產(chǎn)生截然不同的糖蛋白。 吸收光譜 ?對(duì)某一重組蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，其最大吸收波長(zhǎng)是固定的。 ? 抗體中和活性抑制法：此法可用于原液和成品的鑒別試驗(yàn)，該方法簡(jiǎn)便易行、要求抗體必須為 中和抗體 。 非還原 SDSPAGE電泳法： 銀染加樣量 ≥ 5ug （ 1～ 10ng） 考馬斯亮藍(lán) R250 加樣量 ≥ 10ug （ 100ng） 結(jié) 果：無(wú)明顯雜蛋白帶出現(xiàn)；目標(biāo)蛋白量應(yīng)不低于總蛋白量的 95%或 98%。 生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)范圍確定 使用驗(yàn)證過(guò)的測(cè)定和分析方法，并提供用此方法的效價(jià)測(cè)定平均值和單測(cè)定一批誤差的可信限范圍。 Alamar Blue：氧化型 Alamar Blue（ 600nm）可被活細(xì)胞中的線(xiàn)粒體酶還原，還原后染料（ 570nm）發(fā)生顏色和熒光改變，顏色和熒光的深淺與活細(xì)胞數(shù)成正比，可用分光光度計(jì)或熒光檢測(cè)儀檢測(cè)。待基線(xiàn)穩(wěn)定后， 按測(cè)定對(duì)照品的方法測(cè)定待測(cè)樣品，記錄測(cè)定結(jié)果。 3） 體內(nèi)測(cè)定法 4） 生化酶促反應(yīng)測(cè)定法 5） 免疫學(xué)活性測(cè)定法 ? 取兔離體動(dòng)脈條剪成約 長(zhǎng)、 2～ 3 mm 寬的螺旋環(huán)，懸掛于含 10mL通氧的 37℃ 臺(tái)氏液 (取 NaC1 g、 KC1 g、 CaCl 、 MgSO4 生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的內(nèi)容 目標(biāo)產(chǎn)品的均一性 建立目標(biāo)產(chǎn)品生物學(xué)活性或免疫學(xué)效價(jià)測(cè)定方法 研究建立目標(biāo)產(chǎn)品的免疫學(xué)活性的測(cè)定方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 研究建立國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品
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