生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制-預(yù)覽頁
【正文】 給藥法 (曲線穩(wěn)定后對(duì)倍增加樣品濃度為： 105～ 102 RU計(jì)算對(duì)照品和各實(shí)驗(yàn)樣品的半效稀釋倍數(shù)， 按下式計(jì)算樣品效價(jià)：樣品效價(jià) =對(duì)照品效價(jià) 樣品半效稀釋倍數(shù)／對(duì)照品半效稀釋倍數(shù) 生物學(xué)活性測(cè)定方法選擇 體內(nèi)測(cè)定和體外測(cè)定方法 a、體內(nèi)測(cè)定：即整體動(dòng)物測(cè)定，能為較大范圍的重組產(chǎn)品的效價(jià)提供有用信息，但費(fèi)時(shí)、昂貴、難操作及同時(shí)存在倫理問題，大多數(shù)情況下傾向于選擇體外測(cè)定方法。 細(xì)胞培養(yǎng)法中細(xì)胞染色標(biāo)記方法 3Hthymidine、 BrdU 是反映 DNA合成、增殖細(xì)胞 數(shù)的比例的。 Crystal violet：染活細(xì)胞后，在比色計(jì)中測(cè)定光吸收值（ A）， A值與著染色細(xì)胞數(shù)成正比。 蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)不能常規(guī)測(cè)定，而它的改變（如二硫鍵的錯(cuò)誤配對(duì)）可影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，從而影響藥效，比活性可以反映此種情況。 對(duì)于成品的生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，要根據(jù)不同方法的特點(diǎn)規(guī)定相當(dāng)標(biāo)示量的范圍，目前，生物活性的測(cè)定方法有四類：動(dòng)物基礎(chǔ)、細(xì)胞基礎(chǔ)、生化（酶）法、特異（免疫、受體）結(jié)合法。 按 WHO規(guī)定必須用 HPLC和非還原 SDSPAGE兩種方法測(cè)定，其純度都應(yīng)達(dá)到 95%以上，有的甚至要求達(dá)到 99%以上。蛋白質(zhì)樣品在荷質(zhì)比均一。 + 分析方式 紫外、熒光、折射 紫外（可見、熒光） 同 HPLC 電化學(xué)、放射性 銀染、放射自顯影 儀器價(jià)格 中～高 低 中～高 日常消耗 低 高 低 自動(dòng)化 中～高 低 中～高 人力操作 低 高 低 制備級(jí) 中 中 微量級(jí)制備 收集樣品 可以 可以 較困難 用于研究蛋白質(zhì)純度的方法和機(jī)制 方法 分析機(jī)制 反相 HPLC 疏水性 疏水性相互作用 HPLC 疏水性 毛細(xì)管電泳 荷質(zhì)比 離子交換 HPLC 電荷 等電聚焦 電荷 聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷比 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷，分子大小 分子排阻 HPLC 分子大小 質(zhì)譜測(cè)量法 分子大小 三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定 此項(xiàng)目主要用于原液比活性計(jì)算和成品規(guī)格的控制。 相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定 ? 還原型 SDSPAGE：蛋白質(zhì)在 SDS和 β 巰基乙醇存在下沸水浴 5min，形成表面帶大量負(fù)電荷的桿狀分子，降低了分子形態(tài)和電荷的影響，在電泳過程中蛋白遷移率基本只與其相對(duì)分子質(zhì)量相關(guān)。 肽圖分析 ? 肽圖 分析可作為與天然產(chǎn)品或參考品的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)做精密比較的手段。 ?在生產(chǎn)工程中每批產(chǎn)品的紫外吸收光譜應(yīng)當(dāng)一致。 N末端和 C末端氨基酸測(cè)序 ?作為重組蛋白質(zhì)和肽的重要鑒別指標(biāo)，一般要求至少測(cè)定 N末端 15個(gè)氨基酸、C末端 1～ 3氨基酸。 七、殘余雜質(zhì)檢測(cè) 對(duì)殘余雜質(zhì)進(jìn)行限制的意義 a、殘余雜質(zhì)可能具有毒性，引起安全性問題； b、可能影響產(chǎn)品的生物學(xué)活性和藥理作用，或使產(chǎn)品變質(zhì)； c、反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。 來自 %；來自 CHO細(xì)胞的產(chǎn)品為 不大于 %。 安全性及其他檢測(cè)項(xiàng)目 ?無菌試驗(yàn) ?熱源試驗(yàn) ?異常毒性試驗(yàn) ?免疫原性檢查 ?水分、裝量、 pH檢測(cè) 生物技術(shù)藥物待測(cè)樣品保存 ? 生物技術(shù)藥物大多為具有生物活性的蛋白質(zhì)、多肽，易受環(huán)境條件的影響。對(duì)于理化測(cè)定方法已有了確定的要求和判定標(biāo)準(zhǔn)，而生物學(xué)測(cè)定的結(jié)果具有更大的可變性，一般要使用動(dòng)物或細(xì)胞，這些有機(jī)體本身就具有較大的可變性，因此生物學(xué)測(cè)定的要求和合格標(biāo)準(zhǔn)要松一些。 直線性（ linearity） 是測(cè)定結(jié)果與樣品中測(cè)試物濃度的線性關(guān)系，該參數(shù)的測(cè)定將確定檢測(cè)方法的測(cè)量范圍，它可以表示為回歸直線的斜率和離散性，或者相關(guān)系數(shù) R和測(cè)定系數(shù) R2 。一般采用填加和回收試驗(yàn)來測(cè)定準(zhǔn)確性，即將已知量的樣品加到空白中進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定值與真實(shí)值之比。 精密性（ precision） 表示測(cè)定值之間的一致性或接近的程度，一般表示為變異系數(shù) (CV%)，變異系數(shù)即是測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)差與測(cè)定值的比值。 測(cè)定限度（ Limit of Detection） 是指能夠測(cè)定出的樣品中 測(cè)試物 的最低量。 耐用性（ robustness/ruggedness） 是通過有效地改變實(shí)驗(yàn)方法的參數(shù)，來測(cè)定此改變對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果不受影響的承受程度。這是由于它們相對(duì)于對(duì)照品的測(cè)定時(shí)間不一樣而造成的。 幾種生物技術(shù)藥物檢驗(yàn)項(xiàng)目表 IFNα2b 原液 蛋白含量 宿主菌蛋殘留量 ≤ 總蛋白質(zhì)的 % 等電點(diǎn) ～ 鼠 IgG含量 ≤ 100 ng/劑量 電泳純度 ≥ %分子量 1
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