【正文】 原理： 以離子交換劑作為固定相，以水或含水溶劑作為流動(dòng)相。外形大部分呈珠狀，大小以目表示。 離子交換凝膠與離子交換纖維素相同，屬于親水型離子交換劑。 現(xiàn)已成功利用超臨界流體提取法提取到了青蒿素，延胡索乙素，薯蕷皂苷、玫瑰精油、卵磷脂等。一般，只有當(dāng)樣品在三種展開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一斑點(diǎn)時(shí)方可確認(rèn)其為單一化合物，個(gè)別情況下，甚至須采用正、反相層析兩種方式加以確認(rèn)。未知化合物結(jié)構(gòu)研究 ③ b.=： ： 1（ 3）因?yàn)?EIMS測(cè)定其分子離子峰（ m/z）為 456， 高分辨質(zhì)譜（ HRMS）可將物質(zhì)的質(zhì)量精確測(cè)定到小數(shù)點(diǎn)后第 3位。、 C10H12N2O、 C10H12O C10H16N2四種化合物，它們的相對(duì)分子質(zhì)量雖都是 164，但精確質(zhì)量并不相同，在 HRMS上可以很容易地進(jìn)行分別。1a．若在 200400nm之間無吸收，則說明該分子為飽和化合物或僅帶有孤立 C=C的非共軛分子。例如，腎上腺素中常?；煊衅浜铣稍夏I上腺酮，此雜質(zhì)的含量過高會(huì)影響腎上腺素的療效，藥檢機(jī)關(guān)就是采用紫外光譜來檢測(cè)腎上腺酮的含量的。發(fā)生在 1500～ 600cm1的吸收峰。CH， ArH）；3000～ 2700υC=C， C=N（脂酚、芳香、 1600～ 1500比較強(qiáng)的苯環(huán)骨架振動(dòng)）；1475～ 1300 一般的，有機(jī)物失去電子從易到難的順序?yàn)椋弘s原子上的孤對(duì)電子＞共軛 π電子＞ π電子＞σ電子。 核磁共振是由于自旋核吸收一定能量從低能狀態(tài)躍遷到高能狀態(tài)引起的。 –CH圖譜上碳的信號(hào)均是單峰。 1）碳原子雜化狀態(tài)。誘導(dǎo)效應(yīng)主要是指由于電負(fù)性取代基的吸電子作用，碳原子 p軌道上的電子云向電負(fù)性基團(tuán)方向移動(dòng)，從而產(chǎn)生的去屏蔽效應(yīng)，化學(xué)位移值向低場(chǎng)移動(dòng)。在共軛體系中，多重鍵由于具有非定域性質(zhì)，從而使中心碳原子受到屏蔽的現(xiàn)象稱為共軛效應(yīng)。NOESY譜。 當(dāng)通過上述波譜仍無法確定化合物的結(jié)構(gòu)時(shí)，可培養(yǎng)化合物的單晶，利用單晶 X衍射技術(shù)來獲得該物質(zhì)的骨架結(jié)構(gòu)?；瘜W(xué)位移相關(guān)譜（ COSY），找出各氫之間的連接及偶合關(guān)系，確認(rèn)可能的結(jié)構(gòu)單位；7）做出異核多鍵遠(yuǎn)程相關(guān)譜（ HMBC），將可能的結(jié)構(gòu)單元相連接；8）做出空間效應(yīng)譜（ NOESY），確認(rèn)原子間的空間位置；9）對(duì)分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行全面確認(rèn)。主要顯示的是碳?xì)渲g的一鍵相關(guān) CH，也稱作 13C1H3） 共軛效應(yīng) 、 DMSO、 CD3COCD氘代吡啶等。② 測(cè)定樣品所用溶劑及所需要的條件 ：可用來判斷基團(tuán)之間的位置，規(guī)則 —— 當(dāng)某核同時(shí)與 n個(gè)鄰近的核偶合且偶合常數(shù)相等時(shí)，則該核的信號(hào)會(huì)裂分成 n+1個(gè)小峰。ROH（ ）， ArOH游離（ ）， ArOH分子內(nèi)締合（ ）。1HNMR測(cè)定中通過 化學(xué)位移、譜線的積分面積以及裂分情況 （重峰數(shù)及偶合常數(shù) J）可以提供分子中 H的類型、數(shù)目及相鄰原子或基團(tuán)的信息 ，對(duì)天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)測(cè)定具有十分重要的意義?！北硎尽ＨI和累積雙鍵的伸縮振動(dòng)區(qū)， υC≡C，C≡N， C≡C≡C；1900～ 16503300～ 3000 特征譜帶區(qū)指紋區(qū)發(fā)生在 4000～ 1500cm1的吸收峰比較稀疏，容易辨認(rèn)，且由化合物中主要官能團(tuán)產(chǎn)生的吸收。順式和反式的區(qū)別 2）樣品中雜質(zhì)的檢查e．若波長(zhǎng)吸收峰的強(qiáng)度 εmax在 1000020220之間，標(biāo)明分子中具有 α、 β不飽和酮或共軛烯烴。共軛分子① 飽和碳?xì)浠衔铮哼@類化合物分子中只有 σ電子，在 ③ 助色團(tuán)：指在 200nm以上沒有吸收，但與發(fā)色團(tuán)相連后可使發(fā)色團(tuán)的最大吸收峰向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)，吸收強(qiáng)度也有所增加的基團(tuán)，一般為帶有 n電子的原子或官能團(tuán)，如 OH、 NH Cl、SH等；④ 紅移：使吸收峰向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)的現(xiàn)象；⑤ 藍(lán)移：使吸收峰向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)的現(xiàn)象；⑥ 增色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度增加的效應(yīng)；⑦ 減色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度減弱的效應(yīng)。εmax摩爾吸收系數(shù)；IV為四價(jià)原子（如 C、 Si）的數(shù)目。III/2C8H12N4例如： 已知組成有機(jī)化合物的主要元素（ F、 P、 I除外）均由相對(duì)峰度比一定的同位素所組成，且重元素一般比輕元素重 12個(gè)質(zhì)量單位。1.a.已知化合物鑒定的一般程序1）測(cè)定樣品的熔點(diǎn)，與已知品的文獻(xiàn)值對(duì)照，比較 2.B．交換容量 —— 離子交換樹脂與溶液中的離子或離子化合物進(jìn)行交換的能力，它取決于單位質(zhì)量（或體積）的樹脂中活性基團(tuán)的數(shù)目，單位為 mmol/g（ ml）樹脂。離子交換劑 —— 含有解離性離子交換基團(tuán)（功能基團(tuán)）的高分子物質(zhì)，由兩部分組成：一部分是大分子聚合物基質(zhì)主體結(jié)構(gòu)，另一部分是具有荷電活性的功能基團(tuán)。 ④ 物質(zhì)不發(fā)生相變，常溫操作， 最好采用抗污性較好的膜材料，如聚丙烯腈、磺化聚砜膜等。膜表面是液體和膜相互作用的界面，溶質(zhì)和膜之間有靜電相互作用或電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，膜表面的極性、溶液的 pH值等均會(huì)影響膜的分離效率。待分離組分的大小一般要相差 10倍以上。 透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。除 Segavac外，都是懸浮于 103mol/lA；英國(guó)的為 Segavac；丹麥的為 GelaroseLH20分子中 Sephadex待分離系統(tǒng)中小分子物質(zhì)直徑比凝膠孔徑小，可滲入凝膠微孔中，產(chǎn)生阻滯作用大、流程長(zhǎng)、移動(dòng)速度慢，最后流出，而大分子由于阻滯作用小，流程短，移動(dòng)速度快，先流出。凝膠過濾法也叫凝膠滲透色譜法 常用的 HPLC檢測(cè)器：紫外 可見分光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 分為非極性和極性兩大類。聚酰胺吸附屬于 氫鍵吸附 ，特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑中分別加入適量 醋酸（氨、吡啶、二乙胺） ，可收到防止脫尾，促進(jìn)分離的效果。盡可能選擇極性小的溶劑裝柱和溶解樣品，以利于樣品在吸附柱上形成狹窄的原始譜帶。4.Kedde試劑甾體 1.紫外線 氨熏； 顯色和 Rf值展開 展開室。常見粘合劑： 玻板。 將供試品溶于開始洗脫時(shí)使用的洗脫劑中，再沿管壁緩緩加入，注意勿使吸附劑翻起。操作步驟：① RNH2， RNHR’， 3）溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加入極性較強(qiáng)的溶劑時(shí)又可被后者置換洗脫下來。半化學(xué)吸附 ，如聚酰胺對(duì)黃酮類、醌類等化合物之間氫鍵吸附，力量較弱，介于物理吸附與化學(xué)吸附之間。正相色譜 ：水為固定相 (硅膠載體 )，有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，極性強(qiáng)的組分 K（分配系數(shù)）大， Rf值小；Pa）分離水溶性或極性較大的成分，固定相多采用強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖液等，流動(dòng)相則用氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，稱之為 正相層析 ； 定義： 將兩相溶劑中的一相涂覆在硅膠等多孔載體上，作為固定相，填充在色譜管中，然后加入與固定相不相混融的另一相溶劑（流動(dòng)相）沖洗色譜柱。質(zhì)地均勻平整，具有一定機(jī)械強(qiáng)度，不含影響展開效果的雜質(zhì)；也不應(yīng)與所用顯色劑起作用。2）點(diǎn)樣器 現(xiàn)一般采用逆流分溶儀，該儀器為由上百個(gè)萃取單元組成的全自動(dòng)連續(xù)液 液萃取裝置。 用分離因子 β值來表示分離的難易。不到 10%留在水中， 90%以上分配在氯仿中 V水 ， C解： 第一次振蕩分配平衡后，例如： 酸性化合物可生成鈣鹽、鋇鹽等，堿性化合物如生物堿等可生成苦味酸鹽、苦酮酸鹽等有機(jī)酸鹽或磷鉬酸鹽、磷鎢酸鹽等。 例如： 一些生物堿類用酸水從藥材中提出后，加堿調(diào)至堿性即可從水中沉淀析出（酸提堿沉法）。每種化合物的結(jié)晶都有一定的形狀、色澤和熔點(diǎn)，可以作為初步鑒定的依據(jù)。 常用的有鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、過氯酸鹽和苦味酸鹽等。一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 1. 利用溫度不同可引起物質(zhì)溶解度的改變的性質(zhì) 以分離物質(zhì)，如常見的 結(jié)晶和重結(jié)晶 。例如，三顆針根粉用稀酸浸泡，稀酸液加NaCl近飽和即析出小檗堿鹽酸鹽。 一般來說，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫 鹽析 。 這些化合物與水不相混溶或僅微溶，且在約100℃ 時(shí)有一定的蒸氣壓，當(dāng)水蒸氣加熱沸騰時(shí)，能將該物質(zhì)一并隨水蒸氣帶出。分配系數(shù)在一定溫度及 壓 力下 為 一常數(shù)，可用下式表示： K=Cu/CL? 鑒于以上原因，在大量提取中草藥原料時(shí)，或工業(yè)生產(chǎn)時(shí)直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。? 乙醇 為 有機(jī)溶 劑 ， 雖 易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來源方便，有一定設(shè)備 即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易 發(fā) 霉 變質(zhì) 。通常在實(shí)驗(yàn)室中往往加少量的戊醇或辛醇來克服，或可在蒸餾器上裝置一個(gè)氣 液分離防濺球加以克服，工業(yè)上則常用薄膜濃縮裝置。例如多數(shù)游離的生物堿是親脂性化合物，不溶或難溶于水，但與酸結(jié)合成鹽后，能夠離子化，加強(qiáng)了極性，就變成了親水的物質(zhì)，不溶或難溶于有機(jī)溶劑，所以通常用酸水提取生物堿。? 選擇三四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取，使各成分依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。? 4） 回流提取 適于遇熱易破壞及含多量淀粉、黏液質(zhì)、樹膠、果膠的植物。天然產(chǎn)物化學(xué)成分的系統(tǒng)分離流程?此提取法操作程序較繁，且耗費(fèi)溶劑和時(shí)間。氯仿可溶物（弱極性部位）用 EtOAc萃取 5次，分層氨基酸和肽 黃酮 HCl溶液（檢測(cè)生物堿）不溶物EtOAc溶解 （檢查鞣質(zhì)、酚類、有機(jī)酸、黃酮、蒽醌、甾體、三萜等）EtOAC溶液5％ NaOH溶液振搖表 21 溶劑和有效成分極性相似對(duì)照天然藥材粗粉510g 510g 510g加水 50100ml浸濕 1h10倍量 95％EtOH回流 1h10倍石油醚浸提 水提液 EtOH提取液 石油醚提取液（檢查單糖、多糖、鞣質(zhì)、皂苷、 aa、多肽、蛋白質(zhì)）（檢查萜類、甾體、中等極性溶劑 乙醚 選擇適當(dāng)?shù)娜軇?，極性由小到大，或由大到小，可順次將極性比較相近的成分分開。 根據(jù)相似相溶的原理，極性大的成分在極性溶劑中溶解度大，極性小的成分則易溶于非極性溶劑。油脂、揮發(fā)油、植物甾醇（游離態(tài)）、某些生物堿、親脂性強(qiáng)的香豆素等弱極性溶劑 極性較小的苷類（單糖苷） aa、 Pr、糖類、水溶性生物堿、胺類、鞣質(zhì)、苷類、無機(jī)鹽等 將乙醇液加 鎂粉 ，滴入 濃鹽酸 后震蕩在泡沫處呈桃紅色，或與 1%AlCl3乙醇溶液呈有色熒光。水層（或混懸物）乙酸乙酯可溶物（中等極性部位）正丁醇 萃取 水層（強(qiáng)極性部位）正丁醇層（中等偏大極性部位）Fig 22? 1） 浸漬法 以水或稀醇為溶劑，在常溫或溫?zé)幔?60℃~80℃ ）條件下。以