chapter2蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹(存儲(chǔ)版)
【正文】 泳 ?固定 ? 染色 ? 脫色 ? 計(jì)算 等電聚焦 ③ 雙向電泳 （ twodimensional electrophoresis） 雙向電泳是 等電聚焦電泳 和 SDSPAGE的組合 ， 即先進(jìn)行等電聚焦電泳 （ 按照 pI分離 ） ， 然后再進(jìn)行 SDSPAGE（ 按照分子大小 ） ， 經(jīng)染色得到的電泳圖是個(gè)二維分布的蛋白質(zhì)圖 。 (1)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 蛋白質(zhì)屬于一種兩性電解質(zhì) 。 B. 樣品緩沖液離子強(qiáng)度 因?yàn)?SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的量取決于平衡時(shí) SDS單體濃度 ，而不是總濃度 ， 只有在較低的離子強(qiáng)度溶液中 ， SDS單體才具有較高的平衡濃度 ， 所以樣品緩沖液應(yīng)選用低離子強(qiáng)度 ， 通常是 10100mmol/l之間 。 450 1mR lgMr 兔肌動(dòng)蛋白 牛血清白蛋白 兔磷酸化酶 牛碳酸酐酶 胰蛋白酶抑制劑 雞蛋清溶菌酶 ： 將未知蛋白的 Rf值查到 log(M)值 ， 便可知其分子量 。 蛋白質(zhì)分子在還原劑作用下二硫鍵被還原 ， 將多聚體或單鏈折疊的蛋白質(zhì)分子的二硫鍵打開 ， 形成長短不一的單鏈亞基 。 ③親和層析 2．蛋白質(zhì)的純化方法 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 在外電場的作用下，帶電顆粒將向著與其電性相反的電極移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為 電泳 。 離子交換樹脂可以分為 陽離子 交換樹脂（如羧甲基纖維素等）， 陰離子 交換樹脂（如二乙基氨基乙基纖維素等）。 2．蛋白質(zhì)的純化方法 ? 透析是利用 蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜 ，而使它與 其它小分子化合物 ，如無機(jī)鹽、單糖、雙糖、氨基酸、小肽以及水等分離。 (1)蛋白質(zhì)來源：微生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞； (2)分離和純化過程都必須 0－ 4℃ 的低溫 下進(jìn)行。 研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和功能，首先需要得到純的蛋白質(zhì)樣品。 (5)成品 加工 ：測定蛋
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1