chapter2蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹-免費閱讀
【正文】 用這種方法生產(chǎn)肽的企業(yè)在美國硅谷就有一家。在電場中，每種蛋白質(zhì)成分將移向并 “ 聚焦 ”（停留在等于其等電點的 PH梯度處，形成一個很窄的區(qū)帶。 它是 60年代初建立起來的一種蛋白質(zhì)分離手段 ， 現(xiàn)在已經(jīng)成為單向蛋白質(zhì)電泳分辨率最高的一種分離技術(shù) 。 單體的濃度與 SDS總濃度 ， 溫度和離子強度有關(guān) 。在電場下， 分子量大的亞基受阻大，電泳速度慢，走在小分子的后面； 分子量小的亞基受阻小，電泳速度快， 走在大分子的前面。 (1)原理： 在自然狀態(tài)下蛋白質(zhì)通過二硫鍵聚合形成高度折疊的生物大分子 ，在水溶液中 ， 由于氨基酸殘基的解離作用使蛋白質(zhì)分子形成帶有一定凈電荷的分子 。 選擇與待純化蛋白質(zhì)具有特殊識別和結(jié)合作用的 配基 ，然后應(yīng)用化學(xué)方法將該 配基與載體共價連接 。 線性蛋白質(zhì)分子與球形分子比較 ， 同樣大小分子量的蛋白質(zhì) ， 線性分子體積大流速快 ， 球形分子體積小流速慢 。 (3)粗提 : 離心除去固體雜質(zhì)后，可通過鹽析、沉淀法、凝膠濾法、超過濾等處理，得到蛋白質(zhì)粗制品。如果對蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)尚未搞清楚，工作起來將會困難重重。常用的方法有 研磨法、超聲波法、凍融法和酶解法 等。膜有玻璃紙 或 高分子合成材料 ，截止分子量一般為 1萬 。 用不同濃度的 陽離子洗脫液 ，如 NaCl溶液進行梯度洗脫，通過 Na+的離子交換作用，或是改變流動相的 PH值 ，或是同時采用這兩種方法，可以將帶有不同正電荷的蛋白質(zhì)進行分離。 常用的電泳方法有 聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳 等。 蛋白質(zhì)分子解聚后形成的氨基酸側(cè)鏈與 SDS結(jié)合 ， 在 SDS的重量達到蛋白重量的 34倍時蛋白質(zhì)分子表面完全被 SDS包裹 ， 形成 帶負電荷的蛋白質(zhì)亞基分子 ，稱之為蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物 ( proteinSDS micelles)。 (4) 影響因素 影響 SDS復(fù)合物形成的主要因素 。 二硫鍵完全被打開要取決于巰基乙醇的質(zhì)量和使用的劑量 。 若在某特定的 pH環(huán)境中其凈電荷為零 ， 此時的 pH為該蛋白質(zhì)的等電點 ， 在電場下不泳動 。如：胸腺肽這種胸腺肽主要用于人體免疫。 。 方法 : 制膠 ? 加樣 ? 電
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