不同濃度6-ba、ga3對農(nóng)桿菌介導的大豆子葉節(jié)遺傳轉化率的影響(存儲版)
【正文】 問題的能力。本研究在農(nóng)桿菌介導的大豆遺傳轉化體系中，對共培養(yǎng)、叢生芽、芽伸長、生根四個階段組織培養(yǎng)條件和植物激素配比進行了優(yōu)化分析 。 Soybean cotyledon section。 叢生芽階段 各因素 對叢生芽誘導率的影響 在實驗過程叢生芽階段培養(yǎng)時，愈傷組織易出現(xiàn)褐化，一般采用較嫩幼新生的外植體且適當降低培養(yǎng)基的濃度，調節(jié)培養(yǎng)箱內(nèi)的光照，或適當微調底培養(yǎng)基的 PH。 結果表明，在生根階段用 明顯，但一般采用前者，即向培養(yǎng)基中直接添加 。 另外，叢生芽誘導階段培養(yǎng)基中水分不可過大，否則將會抑制叢生芽的生長。 而培養(yǎng)基中添加了 250mg/LGA3后，有效促進子葉節(jié)的伸長，提高叢生芽誘導率，叢生芽誘導率均在 50%以上（圖 2）。 2020年杜升偉等 [8]研究優(yōu)化了包括種子消毒方法、生長調節(jié)劑用量和抗生素種類在內(nèi)的影響農(nóng)桿菌介導大豆子葉節(jié)遺傳轉化效率的多個因素。 1988年 Meurer等 [2]報道了農(nóng)桿菌轉化大豆子葉節(jié)的影響因素，發(fā)現(xiàn)用超聲處理過的子葉節(jié)較對照容易轉化。 2020 年 4 月 — 2020 年 5 月：修改論文并最終定稿。 2020 年武小霞等對大豆子葉節(jié)再生中植物生長調節(jié)劑濃度及基因型篩選進行了研究，以黑農(nóng) 35為實驗材料，對大豆子葉節(jié)再生過程中種子的滅菌方法、萌發(fā)培養(yǎng)基中植物生長調節(jié)劑的濃度、叢生芽分化、生根培養(yǎng)與馴化等過程中植物生長調節(jié)劑的濃度進行了研究。 2020 年 Olhoft 等相繼報道了在培養(yǎng)基中添加硫醇類化合物和 L半胱氨酸可以防止由農(nóng)桿菌侵染導致的組織壞死現(xiàn)象，從而提高轉化頻率。 若課題因故變動時，應向指導教師提出申請，提交題目變動論證報告。雖然我 國 已克隆 了 具有自主知識產(chǎn)權的抗除草劑基因，但大豆的遺傳轉化 受很多因素的影響，遺傳轉化率不高， 減緩了利用遺傳轉化方法進行大豆品種改良的速度。 目前，大豆再生所用的外植體主要有子葉節(jié)，無菌苗的莖 尖，未成熟胚子葉，上胚軸和初生葉，子葉，成熟胚的胚尖等。 擬解決的關鍵問題： 旨在優(yōu)化大豆的遺傳轉化體系，提高外源基因的轉換效率，為提高大豆遺傳轉化提供理論依據(jù)。 外出調研主要單位，訪問學者姓名： 無 指導教師審查意見： 論文立題新穎，資料豐富，論證充分，有較強的實際應用價值，可以開題。2020年 Paz等 [7]以無菌水浸泡 16h的子葉節(jié)為外植體進行轉化，遺傳轉化效率達到了%%。 本文利用農(nóng)桿菌介導的大豆子葉節(jié)轉化系統(tǒng)，對共培養(yǎng)、叢生芽、芽伸長等組織培養(yǎng)條件和植物激素配比進行優(yōu)化分析，旨在探索提高大豆遺傳轉化效率的可能 性，為建立高效的大豆遺傳轉化體系提供理論依據(jù) ,以獲得能夠抗除草劑的大豆植株品種。 圖 3 四種不同濃度的 6BA 對叢生芽誘導率的影響 結果表明， 在叢生芽誘導階段， 6BA 濃度在 ，隨著 6BA 濃度的升高，叢生芽誘導率也隨之升高，最適生長濃度在 （ 圖 3，圖 4） 。 圖 6 芽伸長階段 GA3 和 IAA 濃度配比對芽伸長的影響 結果表明， 在芽伸長階段，在培養(yǎng)基中同時添加 100mg/L GA3 和 200mg/LIAA 的芽伸長率比單一添加 250mg/LGA3 略高 （圖 6，圖 7）。因此在實驗過程中篩選劑的濃度應在不同生長階段選擇適宜濃度。關于基因型之間存在的這種差異的原因，有研究認為是由細胞生理狀態(tài)不同造成的，如細胞壁結構，細胞內(nèi)激素水平，細胞致傷后的生理反應等，但具體原因機理尚未說明，有待進一步研究。傳轉化率不高， 減緩了利用遺傳轉化方法進行大豆品種改良的速度。 該篇論文 已 達到了學校對本科學士學位畢業(yè)論文的相關基本要求 ， 建議參加學士學位論文答辯并授予學士學位。 在論文答辯的過程中回答問題準確流利，思 路清晰，剖析深刻，論點基本正確，表明作者已具備一定的撰寫科研論文的能力，達到了學校對本科學士學位論文的要求，答辯委員會一致通過其學士學位論文答辯，并建議授予學士學位?？梢钥闯鲎髡呔哂休^強的、系統(tǒng)的專業(yè)知識基礎，能夠對查找的文獻深入地思考、提煉和總結，并能夠在老 師的指導下獨立完成撰寫任務。 評閱人 簽字 評閱意見 論文 （設計） 題目 不同濃度 6BA、 GA3對農(nóng)桿菌介導的大豆 子葉節(jié)遺傳轉化率的影響 指導教師評語頁 作 者 翟趙靜 評閱人 王全偉 評閱人職稱 副 教授 意 見 以大豆子葉節(jié)為外植體，利用 農(nóng)桿菌介導法 獲得轉基因大豆已 成為大豆分子育種和基因功能研究的重要手段 。 GA3, Agrobacterium。本研究中經(jīng)過農(nóng)桿菌浸染 ，共培養(yǎng)的大豆，在 mg/L 6BA 及 250 mg/LGA3 時，叢生芽的生長狀況最好。以此來分析不同方法對生根的影響。不同作物種類或品種，玻璃化的發(fā)生頻率各不相同。 圖 1 和 mg/L 6BA 對叢生芽分化的影響 0黑農(nóng)3 7 黑農(nóng)6 4 黑農(nóng)4 4 小粒豆 圖 2 四種不同濃度的 GA3 對子葉節(jié)生長的影響 結果表明， 在共培養(yǎng)階段，添加 或 mg/L 6BA 均可有效促進叢生芽的分化，誘導的愈傷組織緊致，生命旺盛，但二者差異并不顯著 （圖 1） 。 2020年李文霞等 [6][7]以大豆品種黑農(nóng) 35的子葉節(jié)為材料，研究 6BA對子葉節(jié)再生三個階段即無菌苗萌發(fā)、叢生芽誘導、叢生芽伸長的影響。 關鍵詞： 6BA； GA3； 農(nóng)桿菌 ； 大豆子葉節(jié) ； 遺傳轉化 大豆轉基因研究始于 1984年 ， 自 1988年 Hinchee等 [1]用農(nóng)桿菌侵染大豆子葉節(jié)獲得轉基因大豆植株以來，大豆的遺傳轉化研究受到廣泛的重視，農(nóng)桿菌介導法也成為大豆分子育種和基因功能研究的重要手段。 2020 年 1 月 — 2020 年 3 月：整理實驗數(shù)據(jù)，撰寫論文。 2020 年孫明杰等研究了大豆子葉節(jié)高頻愈傷組織誘導及其植株再生，以萌發(fā)以萌發(fā) 7d 的大豆子葉節(jié)切斷及其切片為外植體，研究了萌發(fā)培養(yǎng) 基、不同激素及其
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