免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展-免費(fèi)閱讀
【正文】 基因點(diǎn)突變的研究表明: IL2分子具有相互獨(dú)立的免疫功能位點(diǎn)和鎮(zhèn)痛功能位點(diǎn),而作為神經(jīng)遞質(zhì)的內(nèi)啡肽也有相互獨(dú)立的鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域。免疫細(xì)胞的分泌活動(dòng)除了受自身的調(diào)控外, 還受神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。這一研究首次表明,非神經(jīng)元性的VAMP8異構(gòu)體(最早在早期內(nèi)體上發(fā)現(xiàn))參與分泌囊泡的調(diào)控。許多免疫細(xì)胞如T細(xì)胞、 B細(xì)胞、 肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等受到刺激后可以立即脫顆粒, 釋放其炎癥因子,amp。 最近的一項(xiàng)研究［19］表明, Ly49A受體能調(diào)控NK細(xì)胞的囊泡胞吐和細(xì)胞因子的分泌,在NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用過程中， 作為MHCI分子的一個(gè)抑制性受體而存在, 而且僅通過由Ly49A介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程就足以產(chǎn)生抑制效應(yīng)。肥大細(xì)胞激活后,細(xì)胞內(nèi)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活, 導(dǎo)致炎癥前細(xì)胞因子立即釋放和其他細(xì)胞因子的延遲性釋放。該研究的進(jìn)一步深入, 有望揭開囊泡融合晚期分子活動(dòng)的神秘面紗, 這不但對(duì)細(xì)胞免疫學(xué)而且對(duì)神經(jīng)科學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)都意義深遠(yuǎn)。免疫細(xì)胞融合孔也存在閃爍開閉(flicker)的現(xiàn)象［11,12］, 這表明小囊泡的胞吐是可逆的。當(dāng)向細(xì)胞導(dǎo)入高濃度Ca2 時(shí),分泌過程呈現(xiàn)2種不同的動(dòng)力學(xué)成分, 第一相只需要1～10 μmol/L的Ca2 , 而第二相則需要100～300 μmol/L的Ca2 濃度,他們分別對(duì)應(yīng)免疫細(xì)胞內(nèi)不同性質(zhì)的囊泡, 即不同的Ca2 濃度控制不同的囊泡分泌, 以適應(yīng)不同的細(xì)胞功能。46。但T淋巴細(xì)胞上存在一種非電壓依賴性的Ca2 通道, 由T細(xì)胞抗原所激活, 然后通過第二信使IP3, 引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Ca2 庫(kù)釋放,增強(qiáng)Ca2 離子跨膜內(nèi)流或Ca2 依賴性滅活。在大多數(shù)淋巴細(xì)胞上存在有不同的離子通道, 這些離子通道類似于神經(jīng)細(xì)胞以及肌肉細(xì)胞的離子通道,但又有其自身的特點(diǎn)。通過控制激發(fā)紫外光的強(qiáng)度, 可以用來進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度滴定,也可用于鈣結(jié)合力測(cè)定以及其他許多鈣依賴的細(xì)胞功能活動(dòng)。此外還有免疫熒光標(biāo)記法: 多巴胺β羥化酶(DBH)在嗜鉻細(xì)胞分泌囊泡中是一種主要的膜蛋白,由于它在胞吐中會(huì)出現(xiàn)在細(xì)胞膜的表面, 隨著它與胞外液中熒光標(biāo)記的DBH抗體的結(jié)合, 就能觀察到胞吐位點(diǎn)在細(xì)胞膜上的分布以及囊泡膜的回收過程。本方法常與膜電容方法聯(lián)合應(yīng)用來研究分泌事件, 以相互補(bǔ)充。對(duì)單個(gè)分泌電流峰積分即可估算出每個(gè)囊泡中包含的遞質(zhì)分子數(shù), 即量子包裝的大小。1 fF, 能檢測(cè)到直徑60 nm的小囊泡分泌［2］。下面就目前常用的三種細(xì)胞分泌實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)的原理、方法以及優(yōu)缺點(diǎn)作簡(jiǎn)要介紹。目前對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的研究已經(jīng)很深入,而對(duì)免疫細(xì)胞分泌活動(dòng)尤其是細(xì)胞因子分泌的動(dòng)力學(xué)和分泌調(diào)控機(jī)制的研究則相對(duì)較少。有關(guān)免疫細(xì)胞中細(xì)胞因子的分泌機(jī)制研究的較少, 將膜電容測(cè)量、 電化學(xué)測(cè)量、光學(xué)測(cè)量、 胞內(nèi)信號(hào)分子光解等近年發(fā)展起來的生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域, 對(duì)研究免疫細(xì)胞的分泌調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)意義重大。46。這種技術(shù)對(duì)囊泡分泌的時(shí)間分辨率極高(～ms),常用來研究分泌事件與離子通道活動(dòng)以及細(xì)胞內(nèi)第二信使的關(guān)系。46。 其次具有一定的細(xì)胞空間分辨率,可用于測(cè)定細(xì)胞釋放熱區(qū)(hot spot)。本方法的缺點(diǎn)是背景熒光較大, fM染料目前尚不能用于腦片等組織切片的分泌研究。Ca2＋螯合物DMnitrophen和Nitrophenyl eGTA可用于快速而均勻地提升細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度, 將這些物質(zhì)與Ca2 染料通過膜片鉗電極或孵育的方法導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi), 然后經(jīng)高能量的紫外光激發(fā),便能產(chǎn)生一個(gè)迅速的、階躍性的鈣升高,并且整個(gè)細(xì)胞鈣濃度都會(huì)均一地升高。46。 K通道阻斷劑則能劑量依賴性地抑制有絲分裂和抗原引發(fā)的淋巴細(xì)胞的激活,可能是“K通道開放細(xì)胞膜去極化Ca2 通道開放”通路被抑制后細(xì)胞外Ca2 內(nèi)流減少所致［8］。關(guān)于G蛋白是否介導(dǎo)“TCR/CD3PI水解Ca2 動(dòng)員”信號(hào)通路, 尚是一個(gè)懸而未決的問題,一些間接證據(jù)表明T細(xì)胞的激活需要G蛋白的參與, TCR/CD3可能在結(jié)構(gòu)上形成G蛋白偶聯(lián)受體［9］。通過膜片鉗電極向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入GTPγS,可引起膜電容從靜息時(shí)的3 pF增加到8～9 pF。1~5 fF
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