免疫細胞分泌研究進展-免費閱讀
【正文】 基因點突變的研究表明: IL2分子具有相互獨立的免疫功能位點和鎮(zhèn)痛功能位點,而作為神經(jīng)遞質(zhì)的內(nèi)啡肽也有相互獨立的鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域。免疫細胞的分泌活動除了受自身的調(diào)控外, 還受神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。這一研究首次表明,非神經(jīng)元性的VAMP8異構(gòu)體(最早在早期內(nèi)體上發(fā)現(xiàn))參與分泌囊泡的調(diào)控。許多免疫細胞如T細胞、 B細胞、 肥大細胞、巨噬細胞等受到刺激后可以立即脫顆粒, 釋放其炎癥因子,amp。 最近的一項研究［19］表明, Ly49A受體能調(diào)控NK細胞的囊泡胞吐和細胞因子的分泌,在NK細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用過程中， 作為MHCI分子的一個抑制性受體而存在, 而且僅通過由Ly49A介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程就足以產(chǎn)生抑制效應(yīng)。肥大細胞激活后,細胞內(nèi)多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活, 導(dǎo)致炎癥前細胞因子立即釋放和其他細胞因子的延遲性釋放。該研究的進一步深入, 有望揭開囊泡融合晚期分子活動的神秘面紗, 這不但對細胞免疫學(xué)而且對神經(jīng)科學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)都意義深遠。免疫細胞融合孔也存在閃爍開閉(flicker)的現(xiàn)象［11,12］, 這表明小囊泡的胞吐是可逆的。當向細胞導(dǎo)入高濃度Ca2 時,分泌過程呈現(xiàn)2種不同的動力學(xué)成分, 第一相只需要1～10 μmol/L的Ca2 , 而第二相則需要100～300 μmol/L的Ca2 濃度,他們分別對應(yīng)免疫細胞內(nèi)不同性質(zhì)的囊泡, 即不同的Ca2 濃度控制不同的囊泡分泌, 以適應(yīng)不同的細胞功能。46。但T淋巴細胞上存在一種非電壓依賴性的Ca2 通道, 由T細胞抗原所激活, 然后通過第二信使IP3, 引發(fā)細胞內(nèi)Ca2 庫釋放,增強Ca2 離子跨膜內(nèi)流或Ca2 依賴性滅活。在大多數(shù)淋巴細胞上存在有不同的離子通道, 這些離子通道類似于神經(jīng)細胞以及肌肉細胞的離子通道,但又有其自身的特點。通過控制激發(fā)紫外光的強度, 可以用來進行細胞內(nèi)鈣離子濃度滴定,也可用于鈣結(jié)合力測定以及其他許多鈣依賴的細胞功能活動。此外還有免疫熒光標記法: 多巴胺β羥化酶(DBH)在嗜鉻細胞分泌囊泡中是一種主要的膜蛋白,由于它在胞吐中會出現(xiàn)在細胞膜的表面, 隨著它與胞外液中熒光標記的DBH抗體的結(jié)合, 就能觀察到胞吐位點在細胞膜上的分布以及囊泡膜的回收過程。本方法常與膜電容方法聯(lián)合應(yīng)用來研究分泌事件, 以相互補充。對單個分泌電流峰積分即可估算出每個囊泡中包含的遞質(zhì)分子數(shù), 即量子包裝的大小。1 fF, 能檢測到直徑60 nm的小囊泡分泌［2］。下面就目前常用的三種細胞分泌實時檢測技術(shù)的原理、方法以及優(yōu)缺點作簡要介紹。目前對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的研究已經(jīng)很深入,而對免疫細胞分泌活動尤其是細胞因子分泌的動力學(xué)和分泌調(diào)控機制的研究則相對較少。有關(guān)免疫細胞中細胞因子的分泌機制研究的較少, 將膜電容測量、 電化學(xué)測量、光學(xué)測量、 胞內(nèi)信號分子光解等近年發(fā)展起來的生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域, 對研究免疫細胞的分泌調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)意義重大。46。這種技術(shù)對囊泡分泌的時間分辨率極高(～ms),常用來研究分泌事件與離子通道活動以及細胞內(nèi)第二信使的關(guān)系。46。 其次具有一定的細胞空間分辨率,可用于測定細胞釋放熱區(qū)(hot spot)。本方法的缺點是背景熒光較大, fM染料目前尚不能用于腦片等組織切片的分泌研究。Ca2＋螯合物DMnitrophen和Nitrophenyl eGTA可用于快速而均勻地提升細胞內(nèi)鈣離子濃度, 將這些物質(zhì)與Ca2 染料通過膜片鉗電極或孵育的方法導(dǎo)入細胞內(nèi), 然后經(jīng)高能量的紫外光激發(fā),便能產(chǎn)生一個迅速的、階躍性的鈣升高,并且整個細胞鈣濃度都會均一地升高。46。 K通道阻斷劑則能劑量依賴性地抑制有絲分裂和抗原引發(fā)的淋巴細胞的激活,可能是“K通道開放細胞膜去極化Ca2 通道開放”通路被抑制后細胞外Ca2 內(nèi)流減少所致［8］。關(guān)于G蛋白是否介導(dǎo)“TCR/CD3PI水解Ca2 動員”信號通路, 尚是一個懸而未決的問題,一些間接證據(jù)表明T細胞的激活需要G蛋白的參與, TCR/CD3可能在結(jié)構(gòu)上形成G蛋白偶聯(lián)受體［9］。通過膜片鉗電極向細胞內(nèi)導(dǎo)入GTPγS,可引起膜電容從靜息時的3 pF增加到8～9 pF。1~5 fF
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