免疫細胞分泌研究進展-文庫吧資料
2024-10-03 13:53本頁面
【正文】 合孔在低電導時不存在細胞膜脂質的流動。這是首次直接觀察到直徑＜500 nm的小囊泡的融合孔, 根據其起始電導小的特征,可以推測融合孔的形成必須有蛋白質參與。1~5 fF大小不等的階梯狀電容升高,代表了白細胞不同類型囊泡的分泌(圖2)。 當用Ionomycin刺激后, 可觀察到0amp。 lollike等［2］應用細胞貼附式膜片鉗技術在中性粒白細胞研究了免疫細胞脫顆粒的動力學, 包括單個囊泡融合的動力學特性, 用這種方法, 他們可以分辨出1 fF的階梯狀電容變化(對應單個囊泡分泌事件)。進一步研究Ca2 和GTPγS的促分泌效率的差別和他們分別在什么情況下起作用將是一個重要課題。通過膜片鉗電極向細胞內導入GTPγS,可引起膜電容從靜息時的3 pF增加到8～9 pF。當分泌小泡與細胞膜溶合并胞吐時, 便伴有膜電容的增加。2 免疫細胞分泌抗體或細胞因子的研究 經過適當處理, 免疫細胞可應用膜片鉗測量細胞膜電容。 2amp。關于G蛋白是否介導“TCR/CD3PI水解Ca2 動員”信號通路, 尚是一個懸而未決的問題,一些間接證據表明T細胞的激活需要G蛋白的參與, TCR/CD3可能在結構上形成G蛋白偶聯受體［9］。單細胞上的鈣信號可表現為反復的鈣振蕩,這可能是一種通過頻率編碼來傳遞信息的方式。 [!] 目前, Ca2 作為細胞內較早激活的一個重要的第二信使已被接受, 但其后續(xù)信號過程尚不清楚。電壓依賴性Ca通道僅在B淋巴細胞上存在, 而在T淋巴細胞以及T淋巴細胞株均未見報道。 K通道阻斷劑則能劑量依賴性地抑制有絲分裂和抗原引發(fā)的淋巴細胞的激活,可能是“K通道開放細胞膜去極化Ca2 通道開放”通路被抑制后細胞外Ca2 內流減少所致［8］。 根據其電壓激活和滅活的動力學特性以及藥理學特征可分為3種亞型, 它們隨細胞的發(fā)育狀態(tài)和功能分類不同而有所變化,可能與細胞有絲分裂有關。Na通道僅存在于少數T細胞、 T細胞株和自然殺傷細胞。離子通道的活動與離子跨膜流動、膜電位的變化以及隨后的淋巴細胞激活密切相關。46。除了Ca2 外, 許多第二信使如cAMP等都可用該方法對其細胞內濃度進行精確控制。但是它易受Mg2 結合的影響。DMnitrophen在光解前對Ca2 有很高的親和力,對靜息的細胞鈣緩沖幾乎沒有影響, 是研究細胞鈣緩沖和鈣穩(wěn)態(tài)系統的非常理想的材料。Ca2＋螯合物DMnitrophen和Nitrophenyl eGTA可用于快速而均勻地提升細胞內鈣離子濃度, 將這些物質與Ca2 染料通過膜片鉗電極或孵育的方法導入細胞內, 然后經高能量的紫外光激發(fā),便能產生一個迅速的、階躍性的鈣升高,并且整個細胞鈣濃度都會均一地升高。4胞內信號分子光解方法 細胞分泌活動受很多因素的調控, 采用信使物質瞬時釋放的方法［6］,可以定量研究各因素對分泌的影響。1amp。例如, 將GFP基因與囊泡特異的前胰島素基因整合后轉入胰島INS1 β細胞中進行表達,然后用熒光成像技術實時研究活分泌囊泡的轉移、 錨定和胞吐過程。本方法的缺點是背景熒光較大, fM染料目前尚不能用于腦片等組織切片的分泌研究。3 細胞分泌的光學測量 用普通光學顯微鏡只能檢測巨大囊泡的分泌過程,而新的熒光染料的開發(fā)和顯微成像技術的發(fā)展使實時監(jiān)測小囊泡的分泌成為可能［4］。 1amp。但是電極只能檢測到少部分信息物質(10％左右),而且對于那些不能被氧化的物質的釋放不能直接檢測［16］。 其次具有一定的細胞空間分辨率,可用于測定細胞釋放熱區(qū)(hot spot)。目前兒茶酚胺、 5HT、 胰島素、 組胺、 nO以及含色氨酸或酪氨酸殘基的多肽激素或遞質都可直接或間接地使用該方法檢測［16］。施加的電壓可為恒電位或三角波循環(huán)電壓,前者的優(yōu)點是時間分辨率高, 后者的優(yōu)點是能區(qū)分不同的信息分子。微電極的電流大小與電極尖端面積和實驗類型有關, 一般在pA到nA范圍,通常采用膜片鉗放大器等低噪聲儀器進行檢測。46。 膜電容測量技術可用于神經細胞、 內分泌細胞、 免疫細胞等大多數細胞的分泌測量, 而且測量精度和時間分辨率都較高, 但
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