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免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展-在線瀏覽

2024-10-03 13:53本頁(yè)面
  

【正文】 它與胞外液中熒光標(biāo)記的DBH抗體的結(jié)合, 就能觀察到胞吐位點(diǎn)在細(xì)胞膜上的分布以及囊泡膜的回收過(guò)程。46。神經(jīng)遞質(zhì)的分泌與細(xì)胞鈣離子濃度緊密偶聯(lián)(與鈣離子濃度的3~4次方成正相關(guān))。這克服了單純電刺激引起的離子通道附近產(chǎn)生不同的鈣微區(qū)的缺點(diǎn)。通過(guò)控制激發(fā)紫外光的強(qiáng)度, 可以用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度滴定,也可用于鈣結(jié)合力測(cè)定以及其他許多鈣依賴的細(xì)胞功能活動(dòng)。而Nitrophenyl EGTA對(duì)Ca2 有更高的選擇性,但它在光解前對(duì)Ca2 親和力較低, 且不易被光解產(chǎn)生大的Ca2 階躍。   2 免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞和分子機(jī)制   2amp。1 免疫細(xì)胞的離子通道和細(xì)胞功能   免疫細(xì)胞不屬于可興奮性細(xì)胞(如神經(jīng)細(xì)胞、 肌肉細(xì)胞等)之列, 但也具有某些與神經(jīng)細(xì)胞相類似的電生理特性。在大多數(shù)淋巴細(xì)胞上存在有不同的離子通道, 這些離子通道類似于神經(jīng)細(xì)胞以及肌肉細(xì)胞的離子通道,但又有其自身的特點(diǎn)。電壓依賴性K通道存在于大多數(shù)T淋巴細(xì)胞、 T淋巴細(xì)胞株和巨噬細(xì)胞[7],類似于神經(jīng)細(xì)胞上的延遲整流K通道特性。絲裂酶原刺激后24 h可使K電流增大。Ca2 激活的K通道K(Ca)則由絲裂酶原引起的細(xì)胞Ca2 濃度升高激活,進(jìn)而引發(fā)K外流和細(xì)胞膜的超極化。但T淋巴細(xì)胞上存在一種非電壓依賴性的Ca2 通道, 由T細(xì)胞抗原所激活, 然后通過(guò)第二信使IP3, 引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Ca2 庫(kù)釋放,增強(qiáng)Ca2 離子跨膜內(nèi)流或Ca2 依賴性滅活。T細(xì)胞的Ca2 信號(hào)可分成兩相:快速的Ca2 峰和隨后的Ca2 平臺(tái), 前者由細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)的釋放引起, 后者則由CRAC引發(fā)的持續(xù)跨膜Ca2 內(nèi)流引起。鈣信號(hào)的頻率特性可通過(guò)幾種非線性反饋系統(tǒng)來(lái)調(diào)控, 如PKC介導(dǎo)的CD3γ亞基的磷酸化負(fù)反饋(可反饋抑制TCR/CD3的功能)、 ca2 信號(hào)放大正反饋(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2 的釋放和同時(shí)發(fā)生的CRAC以及PLC的進(jìn)一步激活)、 ca2 離子的自身負(fù)反饋。聯(lián)合應(yīng)用膜片鉗技術(shù)、單細(xì)胞熒光測(cè)量以及報(bào)告基因(如GFP、 rFP)等研究方法, 有望闡明免疫細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、 淋巴因子的分泌機(jī)制和其他相關(guān)的細(xì)胞功能。46。膜電容正比于細(xì)胞膜表面積。人的中性粒白細(xì)胞是成功應(yīng)用wholecell和oncell膜片鉗法進(jìn)行研究的少數(shù)免疫細(xì)胞之一[10]。有趣的是雖然GTPγS導(dǎo)入可引起暫時(shí)的Ca2 濃度升高和膜電容的增加,但當(dāng)加入高濃度的Ca2 緩沖物質(zhì)將鈣升高阻斷后, 膜電容的升高依然存在而不受Ca2 離子的影響, 表明GTPγS引起的分泌不需要Ca2 離子 的參與,屬于Ca2 非依賴性分泌, 這與經(jīng)典的Ca2 依賴性分泌明顯不同。當(dāng)向細(xì)胞導(dǎo)入高濃度Ca2 時(shí),分泌過(guò)程呈現(xiàn)2種不同的動(dòng)力學(xué)成分, 第一相只需要1~10 μmol/L的Ca2 , 而第二相則需要100~300 μmol/L的Ca2 濃度,他們分別對(duì)應(yīng)免疫細(xì)胞內(nèi)不同性質(zhì)的囊泡, 即不同的Ca2 濃度控制不同的囊泡分泌, 以適應(yīng)不同的細(xì)胞功能。在形成封接后,他觀察到一種自發(fā)的階梯狀膜電容降低, 代表直徑60~165 nm的囊泡小泡的內(nèi)吞。46。對(duì)于直徑>180 nm的囊泡可以直接觀察到單個(gè)融合孔活動(dòng), 融合孔起始平均電導(dǎo)為150 pS, 最小的僅有35 pS,隨后融合孔逐漸擴(kuò)大, 擴(kuò)展速度有快有慢, 與報(bào)道的巨大的囊泡融合孔特性類似。免疫細(xì)胞融合孔也存在閃爍開(kāi)閉(flicker)的現(xiàn)象[11,12], 這表明小囊泡的胞吐是可逆的。 這與肥大細(xì)胞上的研究結(jié)果不同,后者閃爍更快[13 ], 融合孔打開(kāi)值較關(guān)閉時(shí)的值小, 存在細(xì)胞膜脂質(zhì)不斷轉(zhuǎn)移到囊泡的現(xiàn)象[14]。關(guān)于膜融合孔調(diào)控的分子機(jī)制研究還剛剛起步。粒細(xì)胞的融合孔似乎在開(kāi)放狀態(tài)下也受到蛋白質(zhì)的調(diào)控, 而中性粒細(xì)胞的融合孔的調(diào)控機(jī)制尚是空白。該研究的進(jìn)一步深入, 有望揭開(kāi)囊泡融合晚期分子活動(dòng)的神秘面紗
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