【正文】 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 4:37:46 下午 4:37 下午 16:37:46三月 21n 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 16:37:4616:37:4616:373/11/2023 4:37:46 PMn 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 16:37:4616:37:4616:37Thursday, March 11, 2023n 1乍見翻疑夢(mèng)，相悲各問年。4)在對(duì) QTL進(jìn)行轉(zhuǎn)移時(shí) ,如果沒有轉(zhuǎn)移互作 QTL,則不會(huì)達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。但研究表明，即使回交 20代，還能發(fā)現(xiàn)相當(dāng)大與目標(biāo)基因連鎖的供體染色體片段。n ，采用 MAS可直接在當(dāng)代確定。? 提出了 “ 上位性是雜種優(yōu)勢(shì)的主要遺傳基礎(chǔ) ” 的重要觀點(diǎn)。n 利用 cDNAAFLP的方法，闡明了馬鈴薯塊莖在不同發(fā)育階段基因表達(dá)的情況，并克隆了 2個(gè)與塊莖脂肪氧合酶高度同源的 cDNA片段（ Bachem等1996） 。 新發(fā)現(xiàn)： 不同物種之間在標(biāo)記探針的同源性、拷貝數(shù)及連鎖順序上都具有很大程度的保守性。 n 定位基因：萵苣抗霜霉病基因 、 水稻抗癭蠓基因水稻抗稻瘟病基因、水稻耐黃叢卷葉病毒病基因等分離群體分組分析法 (Bulked Segregation Analysis)產(chǎn)量、品質(zhì)、熟期等大多數(shù)重要農(nóng)藝性狀，均表現(xiàn)數(shù)量性狀的遺傳特點(diǎn)，受許多數(shù)量基因座位 （Quantitative用途：鑒定品種真實(shí)性和純度，用于新品種登記和品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)等。AFLP不僅能縮小抗病基因與連鎖標(biāo)記之間的距離，而且在 RFLP遺傳圖上，可增加染色體末端標(biāo)記和填充 RFLP空隙，不干擾 RFLP標(biāo)記簇，從而大大增加了遺傳圖的飽和度。“mapaselectrophoresisn SNPs可大大豐富既有的連鎖圖n 成熟自動(dòng)化技術(shù)，有望分析成千上萬的 SNPs 聚類分析n 聚類指標(biāo)：:a bc d+coefficient) a a + b + cJaccard4． AFLP反應(yīng)對(duì) PCR要求較高，要首先摸索優(yōu)化 Mg2+、 dNTP條件，達(dá)到最佳擴(kuò)增。60秒Step4 72℃ MseⅠ 引物（ 50ng/181。Step2Step4 72℃ 30秒l） l， 37℃ 酶切 連接 46小時(shí)，或過夜 。l） 100BSA l） 酶切 連接；2.（ 3） AFLP分析由于擴(kuò)增片段較短（ 30700bp)， 分辨率高。 GACTGCGTACCAATTC339。不足：SSR的檢測(cè)u瓊脂糖凝膠檢測(cè)（同前）u聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)u一般采用銀染、熒光檢測(cè)。GOTO72℃ 56℃ 95℃ 95℃ v 不同材料重復(fù)次數(shù)的不同 ， 導(dǎo)致了SSR長(zhǎng)度的高度變異性。SSR的分布特點(diǎn)SSR的功能長(zhǎng)期以來一直認(rèn)為 SSR是轉(zhuǎn)錄啞區(qū)，沒有明確的生理功能。SCARs（ Sequenced Characterized Amplified Regions）n 為提高 RAPD標(biāo)記穩(wěn)定性，把目標(biāo) RAPD片段克隆測(cè)序，根據(jù)片段兩末端的序列設(shè)計(jì)特定引物（通常 24個(gè)堿基），再進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，可把相應(yīng)的單一位點(diǎn)鑒定出來。30秒Step4lGCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCanneal primers 60? CTaq polymerase binds 3’ and extendsGCTCGC539。Polymerase Chain ReactionPCR339。ng變性 DNA振蕩洗脫兩次（ 15min/次） ， 吸干包好。NaOH， 進(jìn)行 SouthernRepeatn AFLPn RAPD—Random分子標(biāo)記本質(zhì)是以核苷酸序列作為標(biāo)記，一般特點(diǎn)：（ 1）不受季節(jié)、環(huán)境、基因表達(dá)與否的限制；（ 2）多態(tài)性高，存在著豐富的等位變異； n 如穗形、芒長(zhǎng)、穗長(zhǎng)、粒色、穗形、矮稈、卷葉等。n 特點(diǎn)：直觀、快速而經(jīng)濟(jì)，但變異十分有限，當(dāng)染色體數(shù)目形態(tài)相似時(shí)難以分辨。FragmentAPPCR)n SSRn 變性： n 雜交：預(yù)雜交液中加入標(biāo)記好的 marker和探針，放入雜交膜浸勻。置 70℃ 超低溫冰箱中曝光 10天左右。n 2ul 339。72℃ （ CaetanoAnolles等， 1990）APPCR(arbitrarily primed polymerase chain reaction)l引物較長(zhǎng)（ 10～ 50bp） ；l引物濃度較高；l引物長(zhǎng)度不定，并且常常來自為其它目的而設(shè)計(jì)的引物（如 M13通用測(cè)序引物）。l不同物種其重復(fù)序列及重復(fù)單位頻率不同。 提高或降低臨近基因轉(zhuǎn)錄速率；216。lPrimer（ 1mM） 10Buffer Mg2+（ 25mM） Taq酶（ 5U/181?！?DNAMseI MseI MseI EcoRI EcoRI EcoRIn MseI MseI片段環(huán)化，不利小片段擴(kuò)增；n EcoRI EcoRI 引物的退火溫度高；n MseI EcoRI 片段優(yōu)先擴(kuò)增酶切連接接頭序列n MseⅠ 接頭、 PstⅠ 分別為：n MseⅠ ： n 5’GACGATGAGTCCTGAG3’ n 3’TACTCAGGACTCAT5’n PstⅠ ： n 5’CTCGTAGACTGCGTACC3’n 3’CTGACGCATGGTTAA5’n EcoRⅠ ：n 5’CTCGTAGACTGCGTACC3’n 3’CTGACGCATGGTTAA5’ M00:539。GACTGCGTACCAATTCNNN3‘PstIprimers +3: 539。（ 6）引物在不同物種間是通用的，可用于沒有任何分子生物學(xué)研究基礎(chǔ)的物種。l） MseⅠ 3單位 3單位MseⅠ l） 引物（ M00， 50ng/181。10PCR dNTP（ 25mM） Step6l） Taq酶（ 5U/181。Step3 65℃ 30秒（ ℃ /cycle）Step230在 ，且不能有降解。．同位素、熒光標(biāo)記分辨率較高，但價(jià)格昂貴，操作不方便；銀染方法方便快捷，掌握好各個(gè)環(huán)節(jié)，同樣可以達(dá)到很好的效果。（ Sequential Agglomerative Hierarchical and Nested） clusteringESTspectrometry植物基因組遺傳作圖構(gòu)建遺傳圖譜 （ molecular marker linkage map）以具有遺傳多型性的分子標(biāo)記為 “ 路標(biāo) ”PolymorphicinwithHeun等 1998） 原理：將分離群體 (F BC、 DH）中的個(gè)體依據(jù)目標(biāo)性狀 (如抗病、感病 )分成兩組，在每一組中將若干個(gè)體 DNA等量混合，形成兩個(gè) DNA混合池 (如抗病池和感病池 )。分子連鎖圖譜的發(fā)展，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè) QTL遺傳效應(yīng)的追蹤，從而應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助選擇。圖位克隆條件：n (1)目標(biāo)基因附近緊密連鎖的 DNA標(biāo)記；n (2)知道這些標(biāo)記與目的基因的位置n 一旦建立與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記圖，就可以找到染色體步行的起始點(diǎn)，從而進(jìn)行定位克隆。n 隨著最近一些生物的基因組全序列的獲得，比較基因組研究也隨之步入了一個(gè)新的時(shí)代。雜種優(yōu)勢(shì)預(yù)測(cè)及機(jī)理研究雜種優(yōu)勢(shì)預(yù)測(cè)及機(jī)理研究n DNA分子標(biāo)記的應(yīng)用，使得能夠在整個(gè)基因組范圍內(nèi)對(duì)大量親本材料間的遺傳距離進(jìn)行估測(cè)，并在此基礎(chǔ)上有效地預(yù)測(cè)具有強(qiáng)優(yōu)勢(shì)的組合（ Smith等， 1992；Bernardo， 1994）。我國(guó)玉米種質(zhì)基礎(chǔ)植物的許多性狀為數(shù)量性狀，受許多微效基因的控制，且易受環(huán)境的影響。n 計(jì)算機(jī)模擬表明：如果從每個(gè)回交世代含有目標(biāo)基因的 30個(gè)的單株中，通過 MAS選出 1株帶