【正文】 16:37:4616:37:4616:37Thursday, March 11, 2023n 1知人者智，自知者明。 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1行動出成果，工作出財富?；蚓酆贤黄屏嘶亟挥N改良個別性狀的局限 ,使品種在多個性狀上同時得到改良。n 長期以來，選擇都是基于植株的表型性狀進行的。n 對遺傳差異與雜種優(yōu)勢關系的評價方法經(jīng)歷了從形態(tài)性狀遺傳距離，到生化標記遺傳差異，親緣系數(shù)，以及分子標記遺傳差異等各種嘗試。? 前者以欲克隆基因的功能為基礎，通過鑒定其產(chǎn)物或某種表型的突變進行；? 后者則著眼于基因本身，通過其特定的序列或其在基因組中的特定位置進行。利用 NILs方法已定位了許多質(zhì)量性狀基因， eg.番茄抗病毒基因 Tm2a， 番茄抗細菌病毒基因及水稻半矮桿基因 Sdy等。mapn 分子標記技術的發(fā)展，使圖譜上標記的密度越來越高。n mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA， 克隆到質(zhì)?；蚴删w載體，構建 cDNA文庫，而后大規(guī)模隨機挑選克隆，對 5’或 3’端進行一步法測序，獲得對生長發(fā)育、遺傳變異、衰老死亡等過程認識的技術。7Step7 56℃ 混合后按如下 PCR程序擴增：Buffer l 混合后，在如下 PCR條件下擴增：MseⅠ （ 5）由于特定引物擴增，退火溫度高，因而假陽性低，可靠性高。l） 4181。l根據(jù)核心序列堿基數(shù)的不同 ,可分為單堿基、 2堿基、 3堿基、 4堿基等多種重復型。2分鐘Step210Buffer Target DNA sequenceGCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGdenature 95? C539。再放上另一張增感屏，裝人暗袋，并用夾板夾好。n 染色： EtBr染色 20分鐘 PolymorphismRFLPn 原理： Restrictionn 特點：直觀簡單n 從基因型到表現(xiàn)型存在基因表達、調(diào)控、個體發(fā)育等環(huán)節(jié)，表型差異有時難以反映基因型差異。Amplified印跡n 沖洗：以 2SSCn 5ul 339。dNTP（ 25mM） 加水至 20181。95℃ Step2PCR擴 增：主要特點? 無需雜交，設計引物也無須知道序列信息；? DNA需要量少，引物便宜，成本較低；? 技術簡便，操作方便、快速，不涉及分子雜交和放射性自顯影等技術。但隨著研究深入，證明并非如此。E00:539。PCR擴增，使目的序列擴增到 ～ 1μg；3.Step6 95℃ 5分鐘AFLP的 檢測216。相似系數(shù)(JaccardcSSR、 cSNP——— 從 EST中開發(fā) SSR、 SNPn 目前某些植物全序列的測定及 EST數(shù)據(jù)庫的開發(fā)，為 SSR、 SNP的開發(fā)開辟了 新的途徑 ?！皉oute在植物遺傳多樣性研究上的應用n 對植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的全面了解，對于拓寬遺傳基礎的育種策略十分重要。Trait? eg 番茄、馬鈴薯和辣椒（ Tanksley等 1988； 1992）；? 水稻、小麥和玉米（ Ahn等， 1993； 1994）；? 小麥、大麥和黑麥（ Devos等， 1993）；? 高粱和玉米（ Pereira等， 1994）；? 以及大麥和水稻（ Maroof等， 1996）? ．．．?。畁 比較基因組學研究表明，不同物種之間在標記探針的同源性，拷貝數(shù)及連鎖順序上都具有很大程度的保守性。n 應用 cDNA－ AFLP技術進行雜種優(yōu)勢機理的研究表明，強優(yōu)勢與弱優(yōu)勢組合間基因表達有明顯差異，有增強型、減弱型和沉默型。類群 快速選出以輪回親本為遺傳背景的單株n 在回交育種中不僅要考慮優(yōu)良性狀的導入，還必須考慮保持其整個基因組的遺傳背景基本不變。n Khan等（ 2023）以 AFLP等分子標記輔助選擇，將二粒小麥 6BS的高谷蛋白 QTL成功地轉(zhuǎn)入普通小麥品種 Glupro。 三月 2116:37:4616:37Mar2111Mar21n 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 2023/3/11 16:37:4616:37:4611 March 2023n 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 2023/3/11 16:37:4616:37:4611 March 2023n 1空山新雨后，天氣晚來秋。 三月 2116:37:4616:37Mar2111Mar21n 1故人江海別，幾度隔山川。有效選擇目標基因附近發(fā)生重組的個體n 回交育種中 , 傳統(tǒng)解決連鎖累贅方式是通過擴大選擇群體或增加回交次數(shù)。標準測驗種 AFLP研究基因表達是非常有效的方法，可同時比較植物發(fā)育的不同時期以及分離某些重要基因（ cDNAAFLP）。數(shù)量性狀基因的定位基于圖譜的基因克隆 誰最先了解基因的功能，誰就擁有了該基因的知識產(chǎn)權，也就獲得了更多的利潤。特點： 高度的個體特異性、環(huán)境的穩(wěn)定性及豐富的多態(tài)性 。asgel(1979)相似系數(shù) .其中 3．酶切 連接反應可以分開作，也可以合在一起作，但合在一起更方便些。Step8 72℃ 2分鐘 加水至 25181。 ATP（ 10mM） PstⅠ （ 2）多態(tài)性遠遠超過其它分子標記，一般可檢測到 50100個 AFLP擴增產(chǎn)物，能夠在遺傳關系十分相近的材料產(chǎn)生多態(tài)性，被認為是指紋圖譜技術中多態(tài)性最豐富的一項技術。SSR的特點：l 兩側順序保守，在同種間多相同；l 數(shù)量豐富，在整個基因組均勻隨機分布；l 實驗重復性好，結果可靠；l 多數(shù) SSR增減重復序列頻率高，在品種間具廣泛位點變異；l 共顯性標記，可鑒別雜合子和純合子；l 僅需微量組織，適合 PCR分析半自動化v 相對的物種專一性；v 由于開發(fā)時需針對每個座位的微衛(wèi)星序列，發(fā)現(xiàn)其兩端的單拷貝序列設計引物，需建立基因文庫、克隆識別與篩選、測序等過程，開發(fā)困難，費用較高，耗時長；v 實際分析時一般每次只分析單個位點；v 不同引物退火溫度不同，需要探索。30秒Step4 2分鐘Step2 部分 SSR可產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄啟動復合物或活化染色體v 兩端序列多是保守的單拷貝序列，可以根據(jù)兩端序列設計一對特異引物，通過 PCR將其間微衛(wèi)星序列擴增出來，利用電泳技術獲得長度多態(tài)性。l 缺點：l 對反應條件非常敏感，重復性差。95℃ l） 1181。RAPDn 原理：n 用一個隨機引物（ 810bp）、 堿基隨機排列的寡核苷酸序列，非定點地擴增基因組 DNA， 然后電泳分開擴增片段。n 洗脫：將膜轉(zhuǎn)入洗脫盒，加入洗脫液 65℃ Sequence生化標記 —— 貯藏蛋白和同工酶n 貯藏蛋白n 同工酶n 特點：經(jīng)濟、方便、成本較低n 結構基因表達產(chǎn)物，對非結構基因無能為力；所檢測位點只是基因組一部分；數(shù)量有限，有時受發(fā)育時期和環(huán)境影響。 —Simple封好雜交盒后，置65℃ 溫箱中振蕩過夜。Klenow酶n 加水至 50ul， 37℃ 溫箱中標記 2小時RFLP標記 特點l共顯性，可以區(qū)別純合和雜合基因型l穩(wěn)定、重復性強l某些植物中開發(fā)探針已遍及整個基因組l缺點： DNA需要量較大，技術復雜； 用于做圖較費時，難以分析大量樣品 ； 在基因組較大、嚴格自花授粉作物上多態(tài)性很低，使遺傳圖飽和度低。DNA（ 20ng/181。15秒Step3ISSRl 共同優(yōu)點： 在不需要知道所擴增 DNA序列情況下，產(chǎn)生 DNA片段的指紋； 需 DNA量少，產(chǎn)生多態(tài)性豐富。 基因重組的熱點，是基因變異的來源；216。不等。GACTGCGTACATCGAGNNN3‘ AFLP技術的特點（ 1）由于內(nèi)切酶及選擇性堿基組合數(shù)和種類很多，產(chǎn)生標記數(shù)無限，可覆蓋整個基因組。BufferStep5 GOTOl） cycles2． AFLP反應對模板 DNA濃度不是很敏感，在50pg50ng時，均可以觀察到多態(tài)性帶，但為了實驗的準確性， DNA濃度不能太低。Lime