【正文】 BHABHABHBBHHLocus3 may be misscored in individual 12!*locus4 ABHHABAAAHABABHABHH*locus5 ABHABHAAABHABHAHHHB*trait1 EST (Expressed Sequence Tags)SNP（ single nucleotide polymophism）cSSR、 cSNPDNA微陣列（ Microarray）蛋白質(zhì)組學(xué)n ．．．　．．．新型分子標(biāo)記n EST相似系數(shù)(Jaccard5． EcoRⅠ 受甲基化胞嘧啶的影響較小，而PstⅠ 對(duì)富含的甲基化胞嘧啶十分敏感，因而 PstⅠ MseⅠ 檢測(cè)的多為表達(dá)區(qū)域，而EcoRⅠ MseⅠ 檢測(cè)位點(diǎn)聚集在甲基化較高的重復(fù)序列區(qū)域。5分鐘AFLP的 檢測(cè)216。Step10 30秒Step6 95℃ ddH2O l） AFLP實(shí)驗(yàn)程序DNA片段的預(yù)擴(kuò)增取 ，加入 18181。 10NEBPCR擴(kuò)增，使目的序列擴(kuò)增到 ～ 1μg；3.（ 4） AFLP分析用樣量少（ E00:539。銀染檢測(cè)程序脫色 ：加 1升 10%HAC液，脫色 20分鐘沖洗 ：用重蒸水沖洗膠板 2次，每次 5分鐘染色 ：加染色液 (1%AgNO3， %甲醛 )30分鐘沖洗 ：用重蒸水沖洗膠板不超過(guò) 5秒鐘；顯影 ：預(yù)冷顯影液（ 30g/LNaCO3， %甲醛， ）， 輕搖到帶紋出現(xiàn)；定影 ：在固定 /停止液并輕搖 35分鐘；沖洗 ：用重蒸水沖洗 2次，每次 2分鐘；干膠 ：室溫下自然干燥過(guò)夜。SSR分析SSR分子標(biāo)記的創(chuàng)制基因組文庫(kù)的構(gòu)建探針制備 預(yù)雜交 帶有 SSR克隆的選擇測(cè)序引物設(shè)計(jì)檢測(cè)其它方法 :但隨著研究深入，證明并非如此。n 具有更高的可重復(fù)性n 共顯性微衛(wèi)星標(biāo)記 (SSR)l真核生物基因組普遍存在，呈隨機(jī)分布 ,大約每隔 1050kb就存在一個(gè) SSR.l哺乳動(dòng)物中約為植物的 56倍 。PCR擴(kuò) 增：主要特點(diǎn)? 無(wú)需雜交，設(shè)計(jì)引物也無(wú)須知道序列信息；? DNA需要量少，引物便宜，成本較低；? 技術(shù)簡(jiǎn)便，操作方便、快速，不涉及分子雜交和放射性自顯影等技術(shù)。Step295℃ dNTP（ 25mM） 加水至 20181。 339。 539。n 5ul— 放射自顯影將洗脫好的雜交膜置于增感屏上 ,印跡n 沖洗：以 2SSC電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜同位素或非放射標(biāo)記（如地高辛等）的探針雜交膠片放射自顯影，顯示酶切片段大小n 酶切： 35ug—AmplifiedAmplified（ 3）數(shù)量豐富，多態(tài)性遍及整個(gè)基因組；（ 4）表現(xiàn)為 “中性 ”，不影響目標(biāo)性狀的表達(dá)，與不良性狀無(wú)必然的連鎖；（ 5）許多分子標(biāo)記表現(xiàn)共顯性，能鑒別純合雜合基因型，提供完整的信息。n 特點(diǎn)：直觀簡(jiǎn)單n 從基因型到表現(xiàn)型存在基因表達(dá)、調(diào)控、個(gè)體發(fā)育等環(huán)節(jié)，表型差異有時(shí)難以反映基因型差異。n 隨著分帶、細(xì)胞原位雜交等研究技術(shù)的發(fā)展，可在染色體水平揭示更多遺傳變異。Restriction(DAF,PolymorphismRFLPn 原理： n 染色： EtBr染色 20分鐘 封好后置 65℃ 溫箱中振蕩 5－ 6小時(shí)。再放上另一張?jiān)龈衅?，裝人暗袋，并用夾板夾好。[α32P]dCTPTarget DNA sequenceGCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGdenature 95? C539。AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCDNA is doubled with each cycleRepeat 2540 timesRAPD的操作PCR反應(yīng)：10Buffer 2分鐘Step246循環(huán)Step6DAF(DNA amplification fingerprinting)：與 RAPD不同的是 :引物濃度更高，引物長(zhǎng)度更短（一般 5－ 8個(gè)堿基），且往往用聚丙烯酰胺凝膠電泳，通常會(huì)產(chǎn)生非常復(fù)雜的帶型，譜帶信息比 RAPDs大得多。l根據(jù)核心序列堿基數(shù)的不同 ,可分為單堿基、 2堿基、 3堿基、 4堿基等多種重復(fù)型。 染色體末端的 SSR，有保護(hù) DNA完整性、避免降解、融合及丟失的功能；216。l） 4181。31循環(huán)注： SSR引物退火溫度在 5265GATGAGTCCTGAGTAANNN3‘EcoRIprimers +3: 539。（ 5）由于特定引物擴(kuò)增，退火溫度高，因而假陽(yáng)性低，可靠性高。AFLP操作步驟：模板 DNA的酶切與連接DNA（ 200ng/181。pmol/181。MseⅠ l 混合后，在如下 PCR條件下擴(kuò)增：Step2 95℃ 60秒l如下反應(yīng)液：PstⅠ 引物（ 50ng/181。Buffer 混合后按如下 PCR程序擴(kuò)增：Step7 56℃ 30秒Step6 同位素檢測(cè)注意事項(xiàng) ：1． AFLP酶切反應(yīng)對(duì)模板 DNA質(zhì)量要求較高，要求 260/2807Nei遺傳距離n 聚類方法： SAHNn mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA， 克隆到質(zhì)?；蚴删w載體，構(gòu)建 cDNA文庫(kù)，而后大規(guī)模隨機(jī)挑選克隆，對(duì) 5’或 3’端進(jìn)行一步法測(cè)序，獲得對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、遺傳變異、衰老死亡等過(guò)程認(rèn)識(shí)的技術(shù)。n 蛋白質(zhì)組研究 了解生物體蛋白質(zhì)表達(dá)的時(shí)空分布規(guī)律 , 不同個(gè)體 /組織間的表達(dá)差異n 蛋白質(zhì)分子標(biāo)記 定位生物的表性變異(如抗病、抗逆等性狀 )和相關(guān)基因The key technique involves in proteomicsn 分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，使圖譜上標(biāo)記的密度越來(lái)越高。(%)mapn eg. 通過(guò) 288個(gè)位點(diǎn)上對(duì) 338個(gè)一粒小麥系群 AFLP指紋分析，結(jié)合種系分析，發(fā)現(xiàn)來(lái)源于土耳其 東南部 Karacadag山脈的一個(gè)野生一粒小麥（ T. boeoticum） 群體與栽培一粒小麥（ T. monococcum ） 遺傳上最為相近，從而推斷該地區(qū)為現(xiàn)代栽培一粒小麥的發(fā)源地（ 利用 NILs方法已定位了許多質(zhì)量性狀基因， eg.番茄抗病毒基因 Tm2a， 番茄抗細(xì)菌病毒基因及水稻半矮桿基因 Sdy等。數(shù)量遺傳學(xué)無(wú)法確定控制 數(shù)量性狀的 QTLs數(shù)目，也無(wú)法確定單個(gè) QTL的遺傳效應(yīng)及染色體位置。? 前者以欲克隆基因的功能為基礎(chǔ)，通過(guò)鑒定其產(chǎn)物或某種表型的突變進(jìn)行；? 后者則著眼于基因本身，通過(guò)其特定的序列或其在基因組中的特定位置進(jìn)行。應(yīng)用比較基因組學(xué)進(jìn)行基因的克隆n 綠色革命 Rht Rht2基因的克隆擬南芥 GAI 水稻 EST 篩選小麥 BAC文庫(kù) Rht Rht2Blast探針標(biāo)記深遠(yuǎn)意義n 比較基因組研究已使得傳統(tǒng)的植物遺傳學(xué)突破了物種的框架限定，發(fā)展成了新的系統(tǒng)遺傳學(xué)。n 對(duì)遺傳差異與雜種優(yōu)勢(shì)關(guān)系的評(píng)價(jià)方法經(jīng)歷了從形態(tài)性狀遺傳距離，到生化標(biāo)記遺傳差異，親緣系數(shù)，以及分子標(biāo)記遺傳差異等各種嘗試。l 通過(guò)對(duì)與雜種優(yōu)勢(shì)相關(guān) QTLs效應(yīng)的研究，可以加深對(duì)雜種優(yōu)勢(shì)機(jī)理的了解。n 長(zhǎng)期以來(lái)，選擇都是基于植株的表型性狀進(jìn)行的。n 賈繼增等（ 2023）根據(jù) AFLP標(biāo)記進(jìn)行小麥白粉病抗性的回交選擇，對(duì)小麥的外源染色質(zhì)及基因可以進(jìn)行準(zhǔn)確的跟蹤鑒定，從而加速種質(zhì)創(chuàng)新的進(jìn)程。基因聚合突破了回交育種改良個(gè)別性狀的局限 ,使品種在多個(gè)性狀上同時(shí)得到改良。n ．．．．．．成功的報(bào)道n 靜夜四無(wú)鄰，荒居舊業(yè)貧。 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 11 三月 20234:37:46 下午 16:37:46三月 21n 1楚塞三湘接，荊門九派通。 16:37:4616:37:4616:37Thursday, March 11, 2023n 1知人者智，自