【正文】 ?采用有效的菌種保藏方法 菌種的復(fù)壯措施 ?純種分離 菌落純的分離方法 （平板表面涂布法，平板劃線分離法，瓊脂培養(yǎng)基澆注法） 細(xì)胞純的分離方法 （分離小室進(jìn)行單細(xì)胞分離，顯微操縱器進(jìn)行單細(xì)胞分離，菌絲尖端切割法進(jìn)行單細(xì)胞分離） ?通過宿主體內(nèi)生長進(jìn)行復(fù)壯 （如 Bacillus thuringiensis的復(fù)壯） ?聯(lián)合復(fù)壯（誘變復(fù)壯） 二、菌種的保藏 ?菌種保藏的任務(wù) ： 廣泛收集實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)菌種、菌株（包括病毒株以及動(dòng)、植物細(xì)胞株和質(zhì)粒等）的基礎(chǔ)上，使之達(dá)到不死亡、不退化、不污染 ，以便于研究、交換和使用的目的。 干燥 干燥抑制微生物生長或造成其死亡的原因： 干燥能引起微生物細(xì)胞內(nèi) 蛋白質(zhì)的變性 和鹽類等物質(zhì)濃度提高，從而抑制生長或造成微生物死亡 重金屬 ? 汞、銀、銅、鉛及其化合物 ? 殺菌機(jī)理： ? 與酶的基團(tuán)結(jié)合，使酶失去活性；或與菌體蛋白結(jié)合，使之變性或沉淀。 應(yīng)用：用于 殺菌或菌種誘變 。 ? 紫外線會(huì)使空氣中的分子氧變成臭氧，臭氧釋放的原子氧有殺菌作用。 舉例： Aspergillus niger在 pH2~，當(dāng)在~，而在 ，則以合成草酸為主。消毒效果取決于消毒時(shí)的溫度和消毒時(shí)間。 ★ 不同生理生化過程的最適溫度 ?微生物不同生理活動(dòng)要求不同溫度 ，所以最適生長溫度 ≠ 發(fā)酵速度快、積累代謝產(chǎn)物多。 ? 超過最低生長溫度時(shí)，微生物不生長，溫度過低，甚至?xí)劳觥? ? 影響細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 生長上升階段 生長下降階段 內(nèi)源呼吸階段 五、 微生物的生長曲線在廢水處理中的應(yīng)用 P120 ? 在生物處理中，控制了 — 定的 F／ M值就可得出不同的微生物生長率、微生物的活性和處理效果。 可分為三個(gè)階段： 生長停滯期 迅速生長期 衰退期 生長停滯期 : 造成生長停滯的原因一是孢子萌發(fā)前真正的停滯狀態(tài)，另一種是生長已經(jīng)開始，但還無法測定。若目標(biāo)是菌體，則在靜止期初期就要及時(shí)收獲菌體。 ： P117 ?生長速率 = 0 ?細(xì)胞形態(tài)變大或增長 ?細(xì)胞內(nèi) RNA特別是 rRNA含量增高 ?合成代謝活躍（核糖體、酶類、 ATP合成加快），易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶 ?對外界不良條件敏感，（如氯化鈉濃度、溫度、抗生素等化學(xué)藥物） ：適應(yīng)新的環(huán)境條件，合成新的酶，積累必要的中間產(chǎn)物 ① .停滯期（ lag phase） ◆ 菌種 ： 繁殖速度較快 (世代時(shí)間短 )的菌種的延遲期一般較短； ◆接種物菌齡 ： 用對數(shù)生長期的菌種接種時(shí)，其延遲期較短，甚至檢查不到延遲期； ◆ 接種量： 一般來說， 接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用 1/10的接種量）； ◆營養(yǎng)： 培養(yǎng)基成分 ◇在營養(yǎng)成分豐富的天然培養(yǎng)基上生長的延滯期比在合成培養(yǎng)基上生長時(shí)短；◇接種后培養(yǎng)基成分有較大變化時(shí)，會(huì)使延滯期加長，所以發(fā)酵工業(yè)上盡量使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分與種子培養(yǎng)基接近。 恒化器 Chemostat 或 bactogen 概念： 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基流速，使培養(yǎng)液濁度保持恒定的連續(xù)培養(yǎng)方法。不再補(bǔ)充和更換，最后一次性收獲。 原理： 是在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌數(shù)越多，光密度越大。 方法： 用鏡臺(tái)測微尺計(jì)算出視野面積；取 1cm2面積上，計(jì)數(shù)后代入公式： 每 ml原菌液含菌數(shù) =視野中平均菌數(shù) 涂布面積 /視野面積 10稀釋倍數(shù) ★ 技術(shù)要求 ：樣品充分混勻，操作熟練快速（ 15~20min完成操作），嚴(yán)格無菌操作； ★注意事項(xiàng)： 每一支吸管只能用于一個(gè)稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度； ★適用范圍： 中溫、好氧和兼性厭氧、能在營養(yǎng)瓊脂上生長的微生物， ★誤差： 多次稀釋造成的誤差是主要來源，其次還有由于樣品內(nèi)菌體分布不均勻、以及不當(dāng)操作 ★ A standard plate count (viable count) reflects the number of viable microbes and assumes that each bacterium grows into a single colony。 總菌數(shù)的測定 （計(jì)數(shù)器直接計(jì)數(shù)，染色涂片計(jì)數(shù)，比濁法） 2。 一些細(xì)菌的代時(shí) 菌名 培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度 代時(shí) E. coli（大腸桿菌） 肉湯 37℃ 17min E. coli 牛奶 37 Enterobacter aerogenes（產(chǎn)氣腸細(xì)菌） 肉湯或牛奶 37 16~18 E. aerogenes 組合 37 29~44 B. Cereus（蠟狀芽孢桿菌） 肉湯 30 18 B. thermophilus（嗜熱芽孢桿菌） 肉湯 55 Lactobacillus acidophilus（嗜酸乳桿菌） 牛奶 37 66~87 Streptococcus lactis（乳酸鏈球菌） 牛奶 37 26 S. lactis 乳糖肉湯 37 48 Salmonella typhi（傷寒沙門氏菌） 肉湯 37 Azotobacter chroococcum（褐球固氮菌） 葡萄糖 25 344~46 Mycobacterium tuberculosis（結(jié)核分枝桿菌）組合 37 792~93 Nitrobacter agilis（活躍硝化桿菌） 組合 27 1200 第一節(jié) 微生物純培養(yǎng)分離及生長測定方法 一、 獲得純培養(yǎng)的方法 純培養(yǎng) (pure culture) 微生物學(xué)中把從一個(gè)細(xì)胞或一群相同的細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)繁殖而得到的后代 ,稱純培養(yǎng) . （ 1） 液體稀釋法 （ 2） 平板劃線分離法（ Streak Plate） （ 3） 平板涂布分離法（ Spread Plate） （ 4） 選擇性培養(yǎng)分離法 （ 5）單細(xì)胞（單孢子）分離法 首先將待分離的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋 ,目的是得到高度稀釋的效果 ,使一支試管中分配不到一個(gè)微生物 .如果經(jīng)過稀釋后的大多數(shù)試管中沒有微生物生長 ,那么有微生物生長的試管得到的培養(yǎng)物可能就是由一個(gè)微生物個(gè)體繁殖而來的純培養(yǎng)物 . 這種方法適合于細(xì)胞較大的微生物 . （ 1） 液體稀釋法 （ 2） 平板劃線分離法（ Streak Plate） 特點(diǎn)：快速、方便。第六章微生物的生長與環(huán)境因子 Microbial Growth 生長 —— 微生物細(xì)胞吸收營養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，當(dāng)同化作用 異化作用時(shí)，生命個(gè)體的重量和體積不斷增大的過程。 分區(qū)劃線（適用于 濃度較大 的樣品） 連續(xù)劃線（適用于 濃度較小 的樣品） An inoculating loop is used to thin out anisms on the surface of the agar.