【正文】 applied potential, + V。 電位的選擇Fig. Dependence of the ECL intensity of the 108 M ECL probe on applied potential. Experimental condition: binding time, 60 min。 鉑超微電極在釕聯(lián)吡啶溶液中的循環(huán)伏安圖Fig. Cyclic voltammogram of 1 mM Ru(bpy)2(dcbpy)NHS in M PBS with 10 μm radius Pt ultramicroelectrode. Scan rate = 50 mV/s. 實驗條件的優(yōu)化考察電位對電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響，結(jié)果表明當(dāng)施加的電位從++，電化學(xué)發(fā)光信號逐漸增大，且在+。你需要寫出具體的公式，和參考文獻(xiàn)，你真翻譯英語了呀，你就不會把句子寫的通順點(diǎn)圖中的截距均接近于1。為了驗證該方法的可行性，在存在和不存在目標(biāo)蛋白時考察了電化學(xué)發(fā)光探針的電化學(xué)發(fā)光動力學(xué)。這表明Ru(bpy)2(dcbpy)NHS已標(biāo)記在肽上。Fig. Schematic diagram of homogeneous peptidebased ECL method for determination of cTnI. 電化學(xué)發(fā)光探針的制備釕聯(lián)吡啶衍生物標(biāo)記肽（Ru肽）探針的制備 [22，36]：1mg肽( mmol)溶解于100 μL無水乙醇中。通過電化學(xué)發(fā)光信號的降低進(jìn)行目標(biāo)物cTnI的檢測。已報道了以肽為分子識別物質(zhì)的生物傳感器用于心肌肌鈣蛋白I(cTnI)[2526]，前列腺特異性抗原(PSA)[2728]，蛋白激酶[29]，HIV[3031]，細(xì)菌[32]等的分析檢測，獲得了滿意的結(jié)果。Ikariyama報道了一種利用芘標(biāo)記人血清白蛋白(HSA)作為信號探針，檢測HSA抗體和HSA的均相電化學(xué)發(fā)光免疫分析[18]。例如，除了它們的靈敏度和選擇性，基于ELISA的光學(xué)方法需要多個步驟的樣品制備過程，電化學(xué)傳感器需要識別分子在傳感平臺上的固定。（2）以肽為分子識別物質(zhì)檢測活性前列腺特異性抗原(PSA)的電化學(xué)發(fā)光生物傳感的研究。 本論文的研究目的及意義利用肽為分子識別物質(zhì)，進(jìn)行蛋白質(zhì)、病毒或者小分子物質(zhì)的分析檢測，已引起了研究者們的廣泛關(guān)注。該技術(shù)有望成為生物分子分析的一個強(qiáng)大的工具。在“signal on”型適體傳感器中，巰基TBAⅠ自組裝在金電極表面用于捕獲到電極上的凝血酶，然后單臂碳納米管釕復(fù)合物標(biāo)記的TBAⅡ（ssDNA，29mer）與凝血酶的表位結(jié)合，產(chǎn)生一個高的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。制得的生物傳感器不僅能放大魯米諾的電化學(xué)發(fā)光信號，而且對于抗體的固定具有一個好的生物相容性和適當(dāng)?shù)奶匦?。?biāo)記有釕復(fù)合物的巰基發(fā)夾DNA電化學(xué)探針自組裝在金電極表面，不存在目標(biāo)單鏈DNA時，固定在電極表面的電化學(xué)發(fā)光探針處于折疊的構(gòu)型，端基與電極極為貼近，因此產(chǎn)生了一個極強(qiáng)的電化學(xué)發(fā)光信號。該工作證明了在金納米修飾的電極上增加電化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光免疫檢測的靈敏度，是一種很有前途的方法。它對于內(nèi)部和批間檢測分析顯示了高的精密度。Lowe[65]研究小組建立了一種液相電化學(xué)發(fā)光檢測方法，量化了病人血清中治療新生血管性老年性黃斑變性的單抗。作為一個模型系統(tǒng)，魯米諾作為發(fā)光標(biāo)記物，牛血清白蛋白（BSA）作為載體蛋白，地高辛作為檢測目標(biāo)物。隨后TPrA?和Ru(bpy)32+反應(yīng)產(chǎn)生Ru(bpy)3+，Ru(bpy)3+和TPrA?+反應(yīng)形成激發(fā)態(tài)Ru(bpy)32+*。該體系的機(jī)制近些年已被詳細(xì)的闡述?；诜枷阕寤衔锏拇蟛糠諩CL體系都屬于這種機(jī)制。然而，70年代ECL的分析應(yīng)用在文獻(xiàn)中零星的出現(xiàn)，直到80年代才大量出現(xiàn)。第六，同時獲得電流信號和光信號，通過電化學(xué)方法促進(jìn)了光發(fā)射機(jī)制的研究，電化學(xué)反應(yīng)的研究通過ECL以及ECL和電化學(xué)的同時檢測。反應(yīng)物的再生也能發(fā)展發(fā)光器件，簡化儀器，節(jié)約試劑。通過掃描電子顯微鏡（SEM）和原子力顯微鏡（AFM）確認(rèn)了二茂鐵胃酶抑制劑與HIV1 PR之間的相互作用，利用微分脈沖伏安法（DPV）進(jìn)行檢測。研究發(fā)現(xiàn)，肽與費(fèi)頓試劑孵育之后，肽的電化學(xué)信號顯著降低?；诖?，使用一個嵌合的纖維蛋白絲聚蛋白合成肽（CFFCP1）作為識別元件固定在基于電化學(xué)傳感器多壁碳納米管聚苯乙烯（MWCNTPS）上。結(jié)果，供體的熒光恢復(fù)（）。結(jié)果，氧化石墨烯接近部分芘有效地猝滅了芘的熒光。使用對于特異性細(xì)胞周期蛋白A2結(jié)合基序的一個眾所周知的p21(WAF1)共識序列，通過在CMB的N端化學(xué)修飾，納入一個Tb3+螯合大環(huán)。結(jié)合的部分肽有多種蛋白酶的切割位點(diǎn)。這些大分子通過和目標(biāo)分子結(jié)合位點(diǎn)的多重相互作用產(chǎn)生了高的特異性或高的催化活性，弄清楚結(jié)合或者催化的控制與產(chǎn)生人工宏觀識別的機(jī)制，這需要相當(dāng)大的努力。一個基于反射干涉光譜的無標(biāo)記和時間分辨?zhèn)鞲衅骼檬删w展示選擇的肽探測了內(nèi)雌激素受體α結(jié)合各種配體的構(gòu)象變化[38]。噬菌體展示小分子連接困難的一個典型的例子是2，4，6 三硝基甲苯（TNT）的生物傳感器的發(fā)展[32]。粘合劑肽的選擇通過包含展示肽和一個固定化的目標(biāo)物的一個必要結(jié)合事件的文庫，允許來自于文庫中表現(xiàn)最佳的粘合劑的物理分離。首先，在一個固定的支架上嵌入一個識別位點(diǎn)導(dǎo)致了一個合適的候選者，只要蛋白支架就算突變?nèi)匀荒鼙３炙姆€(wěn)定性。折疊的肽聚集成一個二聚體卷曲，即使當(dāng)固定它們在金納米粒子上時，也會因此原因而聚集。大部分的這些序列，例如CALNN和 3巰基丙酸(Ser)5OH，通過合理或組合設(shè)計來提供。 銅在三肽附著的微懸臂上的選擇性結(jié)合Fig. Selective binding of copper to a microcantilever coated with the GlyGlyHis tripeptide. EDC NethylN(dimethylaminopropyl)carbodiimide, MPA mercaptoproprionic acid, NHS Nhydroxysuccinimide. 基于設(shè)計合成肽傳感器Table Sensors based upon designed synthetic peptidesReference TargetSensing peptideSensorSensitivitySelectivity[7]Cu2+3mer GGHSilicon nanowire FET1 nM to 1 mMCu2+ in the presence of Zn2+[8]Cu2+3mer GGHPolypyrrole nanowire electrode20–300 nM[9]Cu2+3mer GGHMicrocantilever1 μMto1mM[10]Cu2+8mer NCGAITIGIonselective electrode15–50 μM[11]Zn2+Zincfinger peptideFRET fluorimetric[12]Ni2+Tetanus toxin (P12)。已知和鎳相互作用的肽序列（來自于破傷風(fēng)毒素（P12），C型肝炎病毒，片段（NS4/7）以及一個聚H的序列）已被用于基于微陣列的表面等離子體共振成像，對肽和金屬的相互作用或者金屬含量進(jìn)行多參數(shù)和同時分析，以便于監(jiān)測一個大型面板上金屬介導(dǎo)的生物活性[12]。即使是非常簡單的三肽GlyGlyHis，因為肽與銅的選擇性相互作用，設(shè)計上體現(xiàn)了離子選擇性，然而它的同分異構(gòu)體GlyHisGly與銅和鋅能夠交叉反應(yīng)。肽是以隨機(jī)的方式從大的、不集中的、常常先前就存在以及市場上可買到的噬菌體展示庫中選擇，沒有設(shè)計元素?？傊?，肽涉及人體的神經(jīng)、激素、生殖和細(xì)胞生長等多個領(lǐng)域，可被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)療、保健、衛(wèi)生、食品、化妝品等方面。氨基酸的不同側(cè)鏈對肽的生化模式起著重要的作用。DNA生物傳感器是指固定在基體表面的探針DNA分子與樣品中的靶DNA進(jìn)行雜交，通過檢測探針分子的雜交信號，進(jìn)而獲取靶DNA的相關(guān)信息。近年來，通過指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)篩選得到的寡核苷酸肽，不僅具備類似抗體對靶分子的高親合力、高特異性、分子量小、結(jié)構(gòu)簡單、易合成和可進(jìn)行連接性修飾等特點(diǎn)，而且可反復(fù)使用和長期保存，在疾病診斷的檢測方面受到人們的關(guān)注。肽按其組成氨基酸的數(shù)目分為不同的種類：通常由210個氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；1050個氨基酸組成的肽稱為多肽；含有50個以上氨基酸殘基的肽衍生物則被歸類于蛋白質(zhì)[3]。隨著醫(yī)學(xué)及生化技術(shù)的發(fā)展，肽類藥物因具有原料簡單易得、藥效高、副作用低、不蓄積中毒、用途廣泛、種類繁多等優(yōu)點(diǎn)，已成為21世紀(jì)重要的診斷、監(jiān)測、預(yù)防和治療藥物。這樣的肽往往比抗體有更好的性能，但當(dāng)目標(biāo)物是小分子時它們很難選擇，因為固定它相當(dāng)是修改其結(jié)構(gòu)。在此基礎(chǔ)上，建立了一個場效應(yīng)晶體管選擇性對銅敏感和一個聚吡咯納米線電極[7，8]。一個電極表面附著肽納米管，自組裝肽作為識別分子，與鉛離子結(jié)合。HCV sequence (NS4/7)。我們報道了兩個生物傳感器，利用自組裝肽作為分子識別元件，檢測肉毒素A和萬古霉素。 萬古毒素的結(jié)合模型Fig. Model of binding of vanycin to stable, wellpacked, and mixed SAMs presenting DAlaDAla (blue sticks). The mixed SAMs are linked by ligand 1 (a short ethylene glycol oligomer) and SAM ponent 3 (thiolipoic acid).如果在某種程度上設(shè)計肽的環(huán)區(qū)域結(jié)合目標(biāo)物，那么它的識別干擾聚集，金納米離子被轉(zhuǎn)向一個自由的形式，這與聚集的光譜特性差異很大（）。然而，穩(wěn)定的支架一般大，難以大量合成或表達(dá)。在噬菌體上的融合表達(dá)蛋白和目標(biāo)物的固定體系均能影響結(jié)合事件。為了允許固定，TNT的甲基被一個苯磺酸基取代，適用于通過磺酰胺鍵的形成共價連接載體蛋白。選定一個噬菌體展示肽庫對同一受體的兩種形式，產(chǎn)生了兩種不同的粘合劑肽，能夠區(qū)分不同的構(gòu)象。嗅覺受體蛋白作為一個例子已經(jīng)進(jìn)行了重要的研究[50]。通過末端固定熒光標(biāo)記肽在金納米粒子的表面，一旦納米探針被制作，引入蛋白酶，結(jié)合的部分肽的殘基發(fā)生酶裂解，作為蛋白酶特異性基質(zhì)識別的一個結(jié)果，以強(qiáng)的熒光信號恢復(fù)形式顯現(xiàn)出來。基于此，曲曉剛[53]研究小組建立了一個簡單，超靈敏和高選擇性的信號放大熒光檢測細(xì)胞周期蛋白A2（）。存在目標(biāo)蛋白時，目標(biāo)蛋白和氧化石墨烯對肽的競爭結(jié)合導(dǎo)致了芘熒光信號的恢復(fù)。同時發(fā)現(xiàn)在水溶液中熒光的恢復(fù)程度與MMP2的濃度在10?500 pg/mL范圍內(nèi)是成比例的。從相應(yīng)的脈沖電流響應(yīng)的重復(fù)性和再生性詳細(xì)的描述了傳感器的制作過程和它成功的電化學(xué)性能。有趣的是，酪氨酸的氧化產(chǎn)物L(fēng)二羥基苯丙氨酸可能和三價鐵形成復(fù)合物，這將抑制L二羥基苯丙氨酸的電化學(xué)氧化，導(dǎo)致響應(yīng)電流的減少。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，峰電位的移動與人類免疫缺陷病毒感染血清樣品中HIV1病毒復(fù)制數(shù)量的增加成線性關(guān)系。第二，極不穩(wěn)定的化學(xué)發(fā)光試劑和中間體能在原位被電致，需要極不穩(wěn)定試劑的化學(xué)發(fā)光分析，可以很容易的進(jìn)行ECL分析。此外，ECL在某些情況下是相對良性和友好的，因為它消除了在一些化學(xué)發(fā)光體系中有毒和/或腐蝕性試劑的使用，包括普及的Ru(bpy)32+體系。在接下來的二十年中，ECL發(fā)展迅速，已成為一個非常強(qiáng)大的技術(shù)。相比之下，在沒有足夠能量的體系中，三重態(tài)能量3A *將首先產(chǎn)生，之后通過3A *隨后的湮沒產(chǎn)生1A *（三重三重湮沒），這種反應(yīng)據(jù)說按照“T路徑”（方程（4）（6））。有四個可能的反應(yīng)路徑。Scheme 4中的ECL路徑，在一個低的氧化電位（LOP）下發(fā)生，這個低的氧化電位僅僅只能氧化TPrA，不足以氧化Ru(bpy)32+，稱為LOP電化學(xué)發(fā)光。通過形成魯米諾BSA地高辛復(fù)合物標(biāo)記地高辛。單抗，是一個重組人類Fab（“片段，抗原結(jié)合”），對血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)有高的結(jié)合親和力和特異性，抑制了它的活性。在檢測中沒有觀察到其它的重組人化抗體（全分子或或單克隆抗體片段）或者人類IgG的交叉反應(yīng)。 非均相電化學(xué)發(fā)光分析余京華[67]等報道了一種簡單和靈敏的夾心型電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，在一個金納米粒子修飾的玻碳電極上檢測癌胚抗原（CEA）。存在目標(biāo)單鏈DNA時，由于雜交，電極表面電化學(xué)發(fā)光探針的莖環(huán)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)橐粋€線性的雙螺旋構(gòu)型，導(dǎo)致標(biāo)記物遠(yuǎn)離電極表面，電化學(xué)發(fā)光信號降低。因而，抗AFP作為一個模型通過靜電和物理吸附固定在這個傳感界面。1011M范圍內(nèi)成線性關(guān)系，檢測限為31015M。 凝血酶適體傳感器的設(shè)計原理圖Fig. Design of thrombin aptasensor. (A) GNPs were taken as a capture probe carrier. (B) SWNT was taken as a signal probe carrier.張成孝[72]研究小組報道了一種高靈敏和可重復(fù)使用的電化學(xué)發(fā)光化學(xué)傳感器用于檢測三丙胺及一種基于適體的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器用于檢測可卡因。目前報道的方法大部分為熒光光譜法和電化學(xué)方法。以肽（CHSSLKQK）作為分子識別物質(zhì)，釕聯(lián)吡啶衍生物作為信號物質(zhì)，構(gòu)建電化學(xué)發(fā)光生物傳感器，進(jìn)行PSA的分析檢測。電化學(xué)發(fā)光方法由于其具有的高靈敏度，快速檢測及容易控制[1416]等優(yōu)點(diǎn)成為蛋白生物檢測的通用方法。徐等建立了一種均相電化學(xué)發(fā)光免疫分析，通過利用釕聯(lián)吡啶衍生物標(biāo)記血清PSA的分子形式，檢測PSA[20]。基于此，我們提出了一種以肽為分子識別物質(zhì)檢測cTnI的高靈敏高選擇性的均相電化學(xué)發(fā)光方法。此外，利用電化學(xué)方法驗證了電化學(xué)發(fā)光信號降低的原因