電泳技術及其在分子生物學中的應用-免費閱讀
【正文】 倒掉一抗溶液，用 PBST(或 TBST)漂洗液濾膜 3次，每次 10min。 特點 ?大多在 不連續(xù)緩沖體系 中進行，其電泳槽緩沖液的 pH值與離子強度不同于配膠緩沖液； ?不連續(xù)緩沖體系具有把樣品中的復合物全部濃縮于極小體積的能力，故提高了 SDSPAGE的分辨力； ?系統中所有組分都含有 %的 SDS。 ?聚丙烯酰胺凝膠一律進行垂直電泳 . 假如 DNA 順序中的某個堿基發(fā)生了突變，使突變所在部位的 DNA 序列產生（或缺失）某種限制性內切酶的位點。 雙鏈 DNA分子在凝膠基質遷移的速率與堿基對數目的常用對數成反比。 電泳 低電壓下，分離效果較好。 ? 電泳的實現還依賴于 支持介質 的存在。 ?電泳的三要素 以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區(qū)帶電泳法稱為 凝膠電泳 。在低電壓條件下，線性 DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。 雙鏈 DNA分子在凝膠中的 遷移率 ?影響 DNA 在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素 ?DNA分子的大小 ?瓊脂糖濃度 ； ?DNA的構象 ：超螺旋環(huán)狀（ I型）、切口環(huán)狀（ II型）和線狀（ III型）； 共價閉環(huán) DNA＞直線 DNA＞開環(huán)雙鏈 DNA。這樣，利用該限制性內切酶消化此 DNA 時，便會產生與正常不同的限制性片段。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE） 負極 積層膠 分離膠 加樣孔 正極 配置 積層膠 分離膠 丙烯酰胺濃度 5% 1015% TrisHCl 1M， PH= ， PH= SDS，過硫酸銨， TEMED濃度相同 電泳 積層膠 分離膠 電壓 80V 120V TrisHCl 甘氨酸電泳緩沖液 ()在凝膠中的電離情況 甘氨酸 → 帶負電的蛋白質亞基→ Cl 帶負電的蛋白質亞基 → 甘氨酸 →Cl 被分離蛋白質亞基的電離情況 蛋白質亞基由于甘氨酸的擠壓作用，在積層膠
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