【正文】 用抗病機(jī)制有交叉的生防菌復(fù)配協(xié)同抗病。在 和 的發(fā)酵產(chǎn)菌量差不多，本身實(shí)驗(yàn)過程中未調(diào)節(jié) pH， pH位于 ，增加了實(shí)驗(yàn)誤差。 通過對(duì)放線菌 F01 菌株 培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的研究 , 得出 F01菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為 淀粉（ 2g）、酪蛋白胨 ()、 K2HPO4 ()、 () 、 NaCl ()、 ()、水 100mL。 活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。 結(jié)果及分析 正交 重復(fù) 2菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 淀 /鉀 17 26 35 22 30 27 8 13 38 33 淀 /豆 21 27 22 5 9 44 14 23 39 35 淀 /酪 11 20 45 30 39 23 27 35 23 31 果 /鉀 25 29 14 21 33 36 14 23 39 30 果 /豆 9 15 40 14 19 26 16 25 36 34 果 /酪 27 35 23 17 26 35 27 43 37 32 玉 /鉀 12 14 14 19 27 30 33 41 20 21 玉 /豆 9 19 53 16 30 47 19 26 27 42 玉 /酪 23 28 18 14 19 26 29 38 24 23 小 /鉀 32 47 32 17 33 48 18 36 50 43 小 /豆 6 9 33 18 30 40 29 45 36 36 小 /酪 11 24 54 23 42 45 17 37 54 51 正交 重復(fù) 7菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 淀 /鉀 7 11 36 15 19 21 17 24 29 29 淀 /豆 11 20 45 21 32 34 39 淀 /酪 13 17 24 5 9 44 20 27 26 31 果 /鉀 23 29 21 5 8 37 21 25 16 25 果 /豆 17 20 15 13 16 19 20 27 26 20 果 /酪 12 17 29 8 15 47 27 34 21 32 玉 /鉀 14 22 36 8 13 38 29 37 22 32 玉 /豆 13 19 32 21 28 25 14 27 48 35 玉 /酪 19 27 30 9 17 47 12 23 48 42 小 /鉀 12 20 40 9 15 40 5 9 44 41 小 /豆 25 28 11 16 23 30 9 13 30 24 小 /酪 8 26 69 10 18 44 碳源 (淀 淀粉 。 氮源優(yōu)化 菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，所選氮 源：硝酸鉀，硫酸銨，大豆蛋白胨，蛋白胨，酪蛋白胨。 抑制率 =(對(duì)照枯斑數(shù)一處理枯斑數(shù) )／對(duì)照枯斑數(shù) 100％ 第二章 培養(yǎng)基優(yōu)化 菌株優(yōu)化 菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，所選碳源麥芽糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖，果糖代替原培養(yǎng)基中的 2%淀粉，制作培養(yǎng)基，通過高溫滅菌，冷 卻至常溫，并接種 F02菌株； F07 菌株； F12 菌株； FZH菌株四種菌株在搖床（ 28℃， 180rpm）中培養(yǎng)七天。 37℃孵育 ～ 1小時(shí)，洗滌。 檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法 : 1. 包被：用 1～ 10μ g／ ml。用精準(zhǔn)天平分別稱取高氏一號(hào)培養(yǎng)基中所需試劑分量，稱取完畢后，分別加入 100ml 的蒸餾水，并將其密封，將培養(yǎng)基放入滅菌框中在立體 式電熱壓力蒸汽滅菌器 中滅菌 30分鐘（ 120℃），滅菌完成后，取出滅菌后的培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在超凈工作臺(tái)里將菌株接種培養(yǎng)基中并密封，將接種的培養(yǎng)基放在搖床（ 28℃， 180rpm）環(huán)境下培養(yǎng) 7天， 7天后取出培養(yǎng)基，在超凈工作臺(tái)中，用移液槍從培養(yǎng)基中取菌液于 2ml 離心管中，菌液培養(yǎng)完成。實(shí)驗(yàn)過程中，分別用各種單糖代替 2%的淀粉選出較優(yōu)碳源，同理用氮源代替 %硝酸鉀選出較優(yōu)碳源，然后用較優(yōu)碳源和氮源進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，得到最優(yōu)碳源，氮源。 因此如何研究出高效，高質(zhì)，高優(yōu)的化學(xué)產(chǎn)品，減少化學(xué)藥品的使用量，采用生物農(nóng)藥，生物防治至關(guān)重要。自從 1993 年首次從短葉紅豆杉的韌皮部分分離到一株產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌后，研究者就開始不斷地從內(nèi)生菌中分離出各種活性代謝產(chǎn)物 ?，這其中就包括抗病毒活性代謝產(chǎn)物。自 1925 年Duggur 等從商陸 (phytolacca）上發(fā)現(xiàn)第一個(gè)植物病毒抑制物以來 [14]，陸續(xù)開發(fā)了很多抗病毒制劑，像病毒 A、植病靈、金葉寶等。對(duì)煙草花葉病 (Tobacco Mosaic Virus，簡(jiǎn)稱 TMV)的防治，國(guó)內(nèi)外已做了大量的研究，特剃是在植物抗病毒基因研究上取得了一系列進(jìn)展，但是由于 遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，使由抗性基因轉(zhuǎn)移翡難度很大。天然產(chǎn)物是研究開發(fā)薪藥的重要資源，自 1983～ 1994 年間．約 60％被批準(zhǔn)應(yīng)用的抗癌和抗感染藥物來源于天然產(chǎn)物“’。 植物病毒病有“植物癌癥”之稱，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要病害之一。病毒的結(jié)構(gòu)、酶和復(fù)制機(jī)制是抗病毒藥物的作用靶點(diǎn)，所以抗病毒藥物在攻擊病毒的同時(shí)，往往對(duì)宿主產(chǎn)生毒性反應(yīng) 。由于鏈霉菌防治植物病害時(shí)存在防治效果難以穩(wěn)定、持久等缺點(diǎn)，尋找提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑顯得十分重要。 由于抗生素的廣泛及長(zhǎng)期應(yīng)用，細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性問題日益嚴(yán)重，因此迫切要進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和開發(fā)新型、高效 、低毒的抗耐藥菌抗生素。 放線菌中以鏈霉菌合成抗生素次生代謝產(chǎn)物的能力最強(qiáng)， 鏈霉菌可產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物，包括水解酶與抗生素等物質(zhì)，其在醫(yī)藥、飼料添加劑等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，而且在植物保護(hù)方面發(fā)揮了相當(dāng)大的作用。 關(guān)鍵詞 ： 抗病 毒生防菌 ?；钚晕镔|(zhì) 。鏈霉菌基因組是目前己知的最大的原核生物基因組，其基因組染色體呈線狀，而且具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。隨著抗生素?cái)?shù)量的不斷增加，從鏈霉菌中篩選到的新抗生素就變得越來越困難，篩選得到的化學(xué)物質(zhì)重復(fù)率非常高。提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑有誘變育種、固定化技術(shù)和改良發(fā)酵工藝等，其目標(biāo)是為了提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度，減少副產(chǎn)物，改變生物合成途徑，以獲得高產(chǎn)的新產(chǎn)品。 病毒是一類形態(tài)最小，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的細(xì)胞內(nèi)寄生微 生物。由于植物病毒屬絕對(duì)內(nèi)寄生生物，自身無(wú)能量代謝系統(tǒng)，對(duì)寄主植物細(xì)胞具有高度依賴性，因而植物病毒病的防治一直是植物病害防治中的一大難題。藍(lán)藻是地球上最早出現(xiàn)的光合自養(yǎng)生物，在長(zhǎng)期的演化過程中形成了廣泛的適應(yīng)性。其次，農(nóng)業(yè)栽培措施壺于受耕作制度和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的限制，在生產(chǎn)中有效的實(shí)施仍有一定難度，使用化學(xué)或生物制劑防治煙草花葉病不失為一種經(jīng)濟(jì)有效的措施。目前研究發(fā)現(xiàn)的抗病毒活性物質(zhì)，既有生物小分子的次生代謝產(chǎn)物，也有大分子的多糖、核酸和蛋白質(zhì)等。 目前臨床上常用的藥物主要有如下幾種：抗流感病毒及呼吸道病毒藥物：抗皰疹病毒藥物：抗巨細(xì)胞病毒藥物；抗肝炎病毒藥物：抗人類免疫缺陷病毒藥物。從而在未來的抗病毒，抗真菌，細(xì)菌的舞臺(tái)上，更多的需要依靠生物菌來防治病害，病毒等，這其中最主要的就是放線菌。利用最優(yōu)碳源，氮源對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。 TMV 病毒液制作：取癥狀明顯感染 TMV 病毒的煙草葉片，并稱取其質(zhì)量，將病毒葉放入研缽中，加入少量的石英砂和 PBS（ Phosphate Buffered Saline ） 進(jìn)行研磨，研磨大概 30分鐘，按照 1g 病毒葉配 100m