【正文】 12121212RRRRVVttkkKK ?????溫影響?。┵|(zhì)和固定相性質(zhì)（受柱：調(diào)整流動(dòng)相種類、性?039。 167。 21 高效液相色譜法的特點(diǎn) 一 、 HPLC與 GC差別 1． 分析對象的區(qū)別 GC：適于能氣化 、 熱穩(wěn)定性好 、 且沸點(diǎn)較 低的樣品；但對高沸點(diǎn) 、 揮發(fā)性差 、 熱穩(wěn)定性差 、 離子型及高聚物的樣 品 ， 尤其對大多數(shù)生化樣品不可檢測 占有機(jī)物的 20% HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品 （ 包括 有機(jī)介質(zhì)溶液 ） ， 不受樣品揮發(fā)性和 熱穩(wěn)定性的限制 ， 對分子量大 、 難 氣化 、 熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分 子和離子型樣品均可檢測 用途廣泛 ， 占有機(jī)物的 80% 2． 流動(dòng)相差別的區(qū)別 GC：流動(dòng)相為惰性 ， 氣體組分與流動(dòng)相無親合作用 力 ， 只與固定相有相互作用 。 Signal wi Ai wi ?167。)m(immAmAfff ?? 校正因子（ Molar calibration factor fM ） 各物質(zhì)的量以摩爾數(shù)計(jì)， Mi , Ms分別表示被測 物與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對分子質(zhì)量（摩爾質(zhì)量） ismisisis39。 ? 由于 I 的值溫度之間呈線性關(guān)系，所以可以方便的外推求出文獻(xiàn)測定條件下的 I 值而進(jìn)行定性分析，無須標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 Exam: 熱導(dǎo)池的構(gòu)造，工作原理及影響檢測靈敏度的因素。 ? 特點(diǎn)是：表面空隙適中、比表面積適中、機(jī)械強(qiáng) ? 度較強(qiáng)、耐高溫、耐強(qiáng)腐蝕、價(jià)格偏高。最好用程序升溫方法，以實(shí)驗(yàn)優(yōu)化選擇的條件為工作條件。 所以 R=分開。 ? 理論塔板數(shù)（ n）可根據(jù)色譜圖上所測得的保留時(shí)間（ tR）和峰底寬（ w）或半峰寬（ wh/2 ）按下式推算 ： 2)(16Wtn R?22)(hRWtn ?或 有效塔板數(shù)（ neff）的計(jì)算公式為； 222/)(16)(wtwtn RhRe f f????通常用有效塔板數(shù)（ neff）來評價(jià)柱的效能比較符合實(shí)際。 22 氣相色譜分析理論基礎(chǔ) ? 一、分配平衡的幾個(gè)參數(shù)：? 分配系數(shù) （ distribution coefficient） ? 在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相間達(dá)到分配平衡時(shí)的濃度比值， 用 K表示。（ F0為柱尾載氣體積流量） ? VM = tM F 0 ? 調(diào)整保留值 : 1) 調(diào)整保留時(shí)間：扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間。 國產(chǎn)氣相色譜儀 ? 皂膜流量計(jì) 轉(zhuǎn)字流量計(jì) 調(diào)整儀，標(biāo) 準(zhǔn)儀 Setup of Gas Chromatograph ? ? ? ? 圖 1 、色譜過程 圖 色譜圖 A B KAKB ? 色譜圖 （ chromatogram）： 試樣中各組分經(jīng)色譜柱分離后，按先后次序經(jīng)過檢測器時(shí)，檢測器就將流動(dòng)相中 各組分濃度變化轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的電信號(hào) ， 由記錄儀所記錄下的 信號(hào) —— 時(shí)間曲線或 信號(hào) —— 流動(dòng)相體積曲線 ，稱為 色譜流出曲線 ， 色譜圖界面 常用術(shù)語： 基線： 在操作條件下，僅有 純流動(dòng)相 進(jìn) ? 入檢測器時(shí)的流出曲線。 ? 固定相： （ stationary phase） 管內(nèi)保持固 ? 定、起分離作用 的填充物。 ? 流動(dòng)相： （ mobile phase） 流經(jīng)固定相的空隙 ? 或表面的 沖洗劑 。 峰高與峰面積： 色譜峰頂點(diǎn)與峰底之間的 ? 垂直距離稱為峰高 (peak height)。 tR?= tR – tM 2) 調(diào)整保留體積：扣除死體積后的保留體積。 。 neff 越大或Heff越小，則色譜柱的柱效越高。 ? 二、色譜分離關(guān)系式 ? 設(shè)兩相鄰峰的峰寬相等，即 w1=w2，則 2)1()2(21)1()2( )(2wttwwttRRRRR ?????2)(16Wtn R?ntntW RR )2(2)2(2416??又知 另 1,21212)1()2( rkkttttttMRMRRR ???????）（）（2)2( kttMR ??)1)(1)(4(221,21,2???kkrrnR)1(1,21,2rr ?)1(22?kk稱為柱效項(xiàng)； 稱為柱選擇項(xiàng)； 容量因子項(xiàng)。 ? 固定液與擔(dān)體的選擇（與相比有關(guān)） ? 由實(shí)驗(yàn)手冊查出參考值，再由實(shí)驗(yàn)選擇。 ? 硅藻土型擔(dān)體用前要預(yù)處理：酸洗、堿洗、硅烷化。 ? 氫火焰離子化檢測器 ? 原理：利用有機(jī)化合物在氫火焰中燃燒時(shí)能產(chǎn)生帶電離子碎片，收集其荷電量進(jìn)行測定。 I TC A B X1 ? ? ? X2 ? ? nheptane: noctane: Figure Sketch map for determination of rotention index ?167。)M(s39。 28 毛細(xì)管氣相色譜法 ? 一、毛細(xì)管柱型： ? 壁涂開管柱 ? 多孔層開管柱 ? 載體涂漬開管柱 ? 化學(xué)鍵合毛細(xì)管柱 ? 交聯(lián)毛細(xì)管柱 ? 二、毛細(xì)管柱的特點(diǎn)： ? 滲透性好，柱壓降小，可用長柱型 ? 柱容量小，允許進(jìn)樣量小，進(jìn)樣必須分流 ? 總柱效高，可分離復(fù)雜物質(zhì)體系 ? 相比大，可以快速分析。 HPLC：流動(dòng)相為液體 ， 流動(dòng)相與組分間有親合作用 力 ， 能提高柱的選擇性 、 改善分離度 ， 對分離起 正向作用 。 22 基本理論和條件選擇 基礎(chǔ) 理論 ? 熱力學(xué)理論：塔板理論 —— 平衡理論 ? 動(dòng)力學(xué)理論：速率理論 —— Vander方程 一、塔板理論 理理 nLH /? 22212 )(16)()(WtWttn RRR ????理effeff nLH /? 22139。ttVVKVCVCWWk Rmsmmssms ??????。┑呐浔龋ㄊ苤鶞赜绊戄^：調(diào)整流動(dòng)相和固定相k三、 影響分離的因素 1. 固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相 （ dp≤10 μ m