【正文】 制。在 18世紀后期， Hansen在 Calsberg釀造廠中開始其開拓工作。 醋的生產(chǎn)，原先是在淺層容器中進行，或是在未充滿啤酒的木桶中，將殘留的酒經(jīng)緩慢氧化而生產(chǎn)醋，并散發(fā)出一種天然香味。在 18世紀末到 19世紀初，基礎(chǔ)培養(yǎng)基是用巴氏滅菌法處理，然后接種 10%優(yōu)質(zhì)醋使呈酸性，可防治染菌污染。其中面包酵母和有機熔劑的發(fā)酵有十分重大進展。限制營養(yǎng)物的初始濃度，使細胞生長寧可受到碳源的限制，而不使受到缺氧的影響；然后在培養(yǎng)過程中加入少量養(yǎng)料。所用的過程，至今還可以認為是一個在較少的染菌機會下提供良好接種材料和符合衛(wèi)生標準的方法。但是，使用 200M3容積的發(fā)酵器，使得在接種物的擴大和保持無雜菌狀態(tài)都帶來困難。青霉素的生產(chǎn)是在需氧過程中進行，它極易受到雜菌的污染。與此同時，大規(guī)?；厥涨嗝顾氐妮腿∵^程，也是另一大進展。最大的有機械攪拌發(fā)酵罐的容積，已經(jīng)從第三階段時的 80M3 擴大到 150M3。這個階段中，工業(yè)上普遍采用分批培養(yǎng)和分批補料培養(yǎng)法。超大型的連續(xù)發(fā)酵的操作周期已可超過100 天，其問題是染菌?；蚬こ滩粌H能在不相關(guān)的生物間轉(zhuǎn)移基因，而且還可以很精確地對一個生物的基因組進行交換。確信基因操作技術(shù)將引起發(fā)酵工業(yè)的革命，并出現(xiàn)大量新型過程。 2，二是生物催化合成已成為化學品合成的支柱之一。 乙醛酸是合成香蘭素和許多中間體的重要原料，乙醛酸目前主要采用化學法生產(chǎn)。 3，三是利用生物技術(shù)生產(chǎn)有特殊功能、性能、用途或環(huán)境友好的化工新材料，是化學工業(yè)發(fā)展的一個重要趨勢。 采用傳統(tǒng)化學法由丙烯腈合成的丙烯酰胺，轉(zhuǎn)化率僅為 97％～ 98％。化學法工藝有以下缺點：需在高溫條件下反應(yīng)，能源消耗大；高溫導致油脂的降解 ，產(chǎn)生深褐色和焦糊味；需要分子精餾分離單甘酯和二甘酯。許多生物功能材料都是由生物發(fā)酵法生產(chǎn)的，如透明質(zhì)酸、黃原膠等目前都已實現(xiàn)了發(fā)酵法生產(chǎn)。白酒的起源，當在元朝以前，尚待考證。直到 20 世紀中期才建立了一系列新的微生物工業(yè)。 1949 年新中國成立時，我國白酒的產(chǎn)量只有 萬 t。六家公司占據(jù)約 10％的市場份額，銷售收入占整個行業(yè)的 ％。 1915 年國人投資的雙合盛啤酒廠建成。步入新世紀后，戰(zhàn)國紛爭的格局又逐漸演變成青啤、燕京、華潤 “三強 ”鼎立的態(tài)勢。 1981 年在順義縣以 1 萬噸的年產(chǎn)量起步，到 2020年增至 141 萬噸，躍居全國第二。前不久，華潤啤酒將總部從沈陽遷至北京。目前我國葡萄酒工廠已有近八十家。 5，醬油和醋 早在三千年前便已掌握了醬油和醋發(fā)酵的技法，數(shù)千年來一直沿用自然發(fā)酵法，直到 20 世紀后才開始采用純種培養(yǎng)培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)，目前設(shè)備及釀造方法逐步實現(xiàn)了現(xiàn)代化醬油年產(chǎn)量約為 450萬噸，已居世界首位醋年產(chǎn)量約為 250 萬噸。 2020年酒精產(chǎn)量約為 250萬噸左右。 8，檸檬酸 1953 年我國曾進行淺盤發(fā)酵制檸檬酸的中型生產(chǎn)。 1958年我國最大的抗生素工廠 ——華北制藥廠亦正式投入生產(chǎn)。目前年產(chǎn)量 130 多萬噸。 五、我國發(fā)酵工業(yè)的主要進步 1，發(fā)酵產(chǎn)品增長快、質(zhì)量明顯提高，在國民經(jīng)濟中起重要作用 新型發(fā)酵工業(yè)：年產(chǎn)量 115 萬噸；產(chǎn)值 150億；利稅 50億。 功能性發(fā)酵制品 : r亞麻酸；冬蟲夏草；蘑菇、靈芝多糖 。味精生產(chǎn)原料我國主要以淀粉為原料，成本相對比較高，噸產(chǎn)品制造成本比國外高 2020 元左右。 1998 年有 28 家生產(chǎn)，虧損企業(yè) 12 家，占 42％。 8年來結(jié)構(gòu)調(diào)整仍變化不大， 1999 年糖化酶占總產(chǎn)量比例達到 64％。 5， 技術(shù)裝備和檢測手段落后，自動化水平低。 2 儀器 下端彎曲與管身成直角的滴定管。 標定： 稱取于 120℃烘至恒重的重鉻酸鉀 克，稱準至 ，置于 500ml具塞錐形瓶中，溶于 25ml煮沸并冷卻的水中，加 2 克碘化鉀及 20ml 4N 的硫酸。 （ 3） %淀粉溶液 ，加少量水調(diào)成糊狀，在不斷攪拌下注入 200ml沸水中，微沸 2min，冷卻，加水稀釋成 250ml。斐林溶液的校正系數(shù) f 計算如下： 式中： V—— 硫代硫酸鈉標準溶液的用量（ ml） —— 每毫升 硫代硫酸鈉溶液相當?shù)你~的克數(shù) —— 每毫升斐林溶液的 A液中含有的銅的克數(shù) （ 6）次甲基藍指示液， 1% 1g次甲 基藍溶于 100ml水中。 6 計算 根據(jù)稀釋麥芽汁在正式測定中的用量，查表得相應(yīng)麥芽糖量，再用下式計算： 總還原糖（麥芽糖， g/ml麥汁）＝ f179。操作時可以按比例配成 100ml）。 查表得 100ml麥芽汁中麥芽糖毫克數(shù) 1000 f179。 D 實驗操作 取糖化的麥芽汁 （或者是其他的合適量，使稀釋后的濃度為 13mgα 氨基氮 /升），放入 100ml的容量瓶中，稀釋到刻度，搖勻。 加入 ，搖勻，在 30min 內(nèi)于 570nm 處測定吸光度值。由于其他聯(lián)二酮類都具有相同的反應(yīng)特性，再加上蒸餾過程中部分前驅(qū) 體要轉(zhuǎn)化成聯(lián)二酮，因此上述測定結(jié)果為總聯(lián)二酮含量 (以雙乙酰表示 )。 4 分析步驟 蒸餾 將雙乙酰蒸餾器安裝好，加熱蒸汽發(fā)生瓶，使水至沸。比色測定操作須在 20min 內(nèi)完成。 2 儀器 自動電位滴定儀：精度 177。 b) 標準緩沖溶液：現(xiàn)用現(xiàn)配。 b) 用標準緩沖溶液校正自動電位滴定儀。 所得結(jié)果應(yīng)表示至一位小數(shù)。 2 儀器 a) 全玻璃蒸餾器： 500mL； b) 恒溫水浴：精度 177。 將煮沸冷卻至 15℃的水注滿恒重的密度瓶，插上帶溫度計的瓶塞 (瓶中應(yīng)無氣泡 )，立即浸于 (20177。 試樣餾出液 (20℃ )的相對密度按式 (4)計算： mm mmd ??? 122020 ???????????????????????? (4) 式中： d2020 —— 試樣餾 出液 (20℃ )的相對密度 (比重 )； m2 —— 密度瓶和餾出液的質(zhì)量， g ； m —— 密度瓶的質(zhì)量， g ； m1 —— 密度瓶和水的質(zhì)量， g 。 重量法 a) 蒸餾 稱取制備好的試樣 () 100g，精確至 ，全部移入 500mL 已知質(zhì)量的蒸餾瓶中，加水 50mL 和數(shù) 粒玻璃珠，裝上蛇型冷凝器 (或冷卻部分的長度不短于 400mm 的直型冷凝器 )，開啟冷卻水，用已知質(zhì)量的 100mL 容量瓶接收餾出液 (外加冰浴 )，緩緩加熱蒸餾 (冷凝管出口水溫不得超過 20℃ )，收集約 96mL餾出液 (蒸餾應(yīng)在 30～ 60min內(nèi)完成 )，取下容量瓶，調(diào)液溫至 20℃，然后補加水，使餾出液質(zhì)量為 100 .0g(此時總質(zhì)量為 十容量瓶質(zhì)量 )，混勻。即為啤酒試樣的酒精度， %(m/m) 。按經(jīng)驗公式計算出啤酒試樣的原麥汁濃度。 a) 試樣的制備：將重量法 (在已知重量的蒸餾燒瓶中 )蒸餾除去酒精后的殘液，冷卻至20℃，準確補加水使殘液至 ，混勻。即為啤酒的真正濃度，以 plato 度 (176。 P [％ (m/m)]； A —— 酒精度，％ (m/m)； E —— 真正濃度， 176。 P [％ (m/m)]； b —— 校正系數(shù)。 ZY ZYR D F ?????? 0051 1)(100 ?????????????? (8) 式中： RDF —— 啤酒的真正發(fā)酵度， % ； Y —— 啤酒的原麥汁濃度， 176。此時杯內(nèi)加入 100ml 70℃水，保持恒溫； D) 5 分鐘后，用玻棒取麥芽汁 1 滴，置于白滴板上，再 加碘液 1 滴 ，混合，觀察碘液顏色。 外加酶糖化法 根據(jù)麥芽的指標，釀造 40%輔料比的麥汁，要求麥汁的 ?氨基氮符合要求。水分過高，原料在貯藏時容易發(fā)霉變質(zhì)，影響原料的利用價值。試樣的水分一般是指在 100℃左右直接干燥的情況下，所失去的總量。 計算 %100% 01 21 ???? WW WW）水分（ 式中 W0：稱量瓶重（ g） W1：干燥前試樣與稱量瓶重（ g） W2：干燥 后試樣與稱量瓶重（ g） 4 說明 （ 1）原料的水分測定一般需采用 100105℃烘箱中直接干燥，其結(jié)果較為準確。 斐林試劑由甲、乙液組成。因次甲基藍氧化能力較二價銅弱，故待二價銅全部被還原后，過量一滴還原糖立即使次甲基藍還原，溶液藍色消失以示終點： =+( C H O H )4H CC H 2 O HO( C H O H ) 4C O O HC H 2 O H+SN( C H 3 ) 2 NN+（ C H 3 ） 2 C l+ H 2 OSHN( C H 3 ) 2 NN ( C H 3 ) 2+ H C l次 甲 基 藍 （ 藍 色 ）（ 無 色 ） 2 試劑 斐林試劑 甲液：稱取 (CuSO4178。 20％鹽酸溶液 量取 20 毫升濃鹽酸，緩慢倒入 80 毫開水中。 3 儀器與設(shè)備 （ 1）三角瓶 （ 2）長玻璃管 (約 1 米 ) （ 3）容量 瓶 （ 4）分析天平 （ 5）干燥器 （ 6）電熱恒溫干燥箱 （ 7）滴定管 （ 8）稱量瓶 （ 9）移液管 （ 10） pH 試紙試驗 （ 11）電爐 （ 12）小銅鍋 4 測定步驟 試樣水解 粗淀粉測定中試樣水解：準確稱取試樣 ~2克，置入 250 毫升三角瓶中。濾紙過濾濾液用 500 毫升容量瓶接收，用水充分洗 搽殘渣，然后用水定容至刻度，搖勻，為供試糖液。 圖 21 水解裝置 校正值的計算： 先求得 10 毫升斐林試劑相當?shù)钠咸烟强藬?shù) (F)， F=CV 式中 C：標準葡萄糖溶液濃度 (g/ml) 再從斐林試劑糖量表 (見附表 21)查得 V 毫升時相當?shù)钠咸烟强藬?shù) (F0)，斐林試劑校正值 f 為： 00 FCVFFf ?? 定糖 吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 20 毫升水，并從滴定管中預(yù)先加入適量的水解糖液 (其量應(yīng)控制在后滴定時消耗水解糖液在 1毫升以內(nèi) )，搖勻，于電爐上加熱至沸，并保持微沸 2分鐘。另外，斐林試劑中加入亞鐵氰化鉀 (黃血鹽 )，使紅色氧化亞銅沉淀生成可溶性的復鹽，反應(yīng)終點更為明顯。 3 儀器與設(shè)備 （ 1）三角瓶 （ 2）容量瓶 （ 3）分 析天平 （ 4）干燥器 （ 5）電熱恒溫干燥箱 （ 6）滴定管 （ 7）稱量瓶 （ 8）移液管 （ 9）電爐 4 測定步驟 斐林試劑的標定 吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 10 毫升水，并從滴定管中預(yù)先加入約 20 毫升 %標準葡萄糖溶液 (其量控制在后滴定時消耗 %標準葡萄搪溶液1 毫升以內(nèi) )，搖勻，于電爐上加熱至沸，立即以 4~5 秒鐘 1 滴的速度繼續(xù)用 %標準葡萄糖溶液滴定至藍色消失，此滴定操作需在 1 分鐘內(nèi)完成，總耗糖量為 V0 毫升。 5 計算 %1001% 10 ?????? VnCVV ）（）還原糖（以葡萄糖計 式中 V0：斐 林試劑標定值 (毫升 ) V：斐林試劑測定值 (毫升 ) C：標準葡萄糖溶液濃度 (克 /毫升 ) n：試樣稀釋倍數(shù) v1：所取試樣稀釋液體積 (毫升 ) 6 說明 (1)滴定速度、三角瓶壁厚度和熱源的穩(wěn)定程度等，對測定精密度影響很大。 (3)樣品液中還原糖濃度不宜過高或過低，根據(jù)預(yù)備試驗結(jié)果，應(yīng)將樣品液稀釋至還原 糖的含量在 1%左右為宜。 7 參考書 （ 1）天津輕工業(yè)學院等，《工業(yè)發(fā)酵分析 》，輕工業(yè)出版社， 1980 年 實驗四 蛋白酶活力的測定方法 1 原理 根據(jù)福林試劑 (磷鉬酸與磷鎢酸混合物 )，在堿性情況下極不穩(wěn)定，可被酞類化合物還原而呈藍色反應(yīng) (鉬藍和鎢藍的混合物 )，由于蛋白質(zhì)分子中含有酚基的氨基酸 (如酪氨酸、色氨酸及苯丙氦酸等 )，它使蛋白質(zhì)或其水解產(chǎn)物也呈這個反應(yīng)，于是就可利用這個原理來測定蛋白酶活力的強弱，即以酪蛋白為作用底物，在一定 pH與溫度下，同酶液反應(yīng)，經(jīng)一定時間后，加入三氯醋酸，以終止酶反應(yīng)，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開，經(jīng)過濾后取 濾液 (即含蛋白水解產(chǎn)物的三氯醋酸液 )。 2 試劑 福林試劑 于 2020ml 磨 口 回 流 裝 置 內(nèi) 加 入 鎢 酸 鈉 (Na2WO4 178。再煮沸除去之。 (TCA)溶液 稱取三氯醋酸 ，定容至 1000ml。 取 A液 16ml與 B 液 1ml稀釋 1 倍即成 。 配制酪蛋白溶液定容時，若泡沫過多，則可加 1~2 滴酒精消泡 。 3 操作步驟 標準曲線的繪制 （ 1）按表配制各種不同濃度的酪氨酸溶液 試劑（ ml） 管 號 1 2 3 4 5 6 蒸餾水 10 8 6 4 2 0 100μ g/m1 酪氨酸 0 2