蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法匯總-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 NaCl配制，試管7只 ；4．721分光光度計(jì)。1～5為標(biāo)準(zhǔn)曲線管，測(cè)得吸光度后，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。酒石酸鉀鈉與CuSO44．黃疸血清、嚴(yán)重溶血對(duì)本法有明顯干擾。1．雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的原理是什么?其它還有什么方法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量?2．請(qǐng)用雙縮脲法，設(shè)計(jì)一個(gè)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的定量方法(除標(biāo)準(zhǔn)曲線法外)。3H2OP2O5?13WO2?5MoO3?10H2O烯醇化反應(yīng)乙液：取硫酸銅（CuSO4此液需現(xiàn)用現(xiàn)配。：取鎢酸鈉（Na2WO4?2H2O）100g和鉬酸鈉（Na2MoO4?2H2O）25g,溶于700ml蒸餾水中，再加入85%磷酸50ml和濃硫酸100ml充分混勻，置于1500ml圓底燒瓶中溫和地回流10小時(shí)，冷卻，取下冷凝裝置，再加入硫酸鋰（Li2SO4?2H2O）150g,水50ml,溴3～4滴，開口繼續(xù)沸騰15分鐘，驅(qū)除過(guò)量的溴，冷卻后稀釋至1000ml，過(guò)濾，溶液應(yīng)呈黃色或金黃色（如帶綠色不能使用，應(yīng)繼續(xù)加溴煮沸），置于棕色瓶中保存。試劑放置過(guò)久，變成綠色時(shí)，可再加溴數(shù)滴煮15分鐘，如能恢復(fù)原有的金黃色仍可使用。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）蛋白合成增加，大多數(shù)發(fā)生多發(fā)性骨髓瘤患者中，主要是血清球蛋白增加。（4）血液中水分增加，血漿被稀釋，因各種原因引起的水鈉潴留或輸注過(guò)多低滲溶液。但如控制在低濃度范圍內(nèi)，則不影響測(cè)定，Lowry法很靈敏，可以對(duì)5～100μg蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行很好的顯色反應(yīng)，而如此低的蛋白質(zhì)濃度常常已把干擾物質(zhì)的濃度稀釋到一個(gè)不起作用的水平。[思考題]？？應(yīng)如何注意？利用一定波長(zhǎng)下，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān)系，可以進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。核酸的干擾可以通過(guò)查校正表，再進(jìn)行計(jì)算的方法，加以適當(dāng)?shù)男Ｕ?．紫外分光光度計(jì)。在280nm處測(cè)定各管溶液的吸光度值。2.熟悉紫外分光光度計(jì)的使用。因此如溶中存在核酸時(shí)必須同時(shí)測(cè)定280nm及260nm的吸光度，方可通過(guò)計(jì)算測(cè)得溶液中的蛋白質(zhì)濃度。= －式中C：蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）；A280nm：蛋白質(zhì)溶液在280nm處測(cè)得的吸光度；A260nm：蛋白質(zhì)溶液在260nm處測(cè)得的吸光本法對(duì)微量蛋白質(zhì)的測(cè)定既快又方便，它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時(shí)用其他方法測(cè)定往往較困難。管號(hào)試劑012345671mg/ml卵清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液/ml蒸餾水/ml蛋白濃度/（mg/ml）A280nm000試劑和器材一、試劑 1. 卵清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：%NaCl溶液，離心，取上清液，用克氏定氮法測(cè)定其蛋白質(zhì)含量。或用稀釋血清代替：，用生理鹽水稀釋至刻度?！?. 容量瓶50ml（1）。內(nèi)容總結(jié)
（1）實(shí)驗(yàn)七
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