【正文】 的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。,第十八頁，共一百一十四頁。,3.3.5 植物組織器官(q236。,第二十頁，共一百一十四頁。y242。ng)后分裂前細(xì)胞的主要變化有：一是呼吸作用加強(qiáng)，消耗氧量明顯增加；二是多聚核糖體的不斷增加，到有絲分裂前RNA的含量可增加300%；三是蛋白質(zhì)合成加快，分裂前細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的總量增加200%；四是各種與分裂有關(guān)的酶活性大大加強(qiáng)。,分化期：停止分裂的細(xì)胞發(fā)生生理代謝方面的變化，出現(xiàn)(chūxi224。,第二十三頁，共一百一十四頁。ng)也有差別。,3.舉例(jǔ l236。(2）誘導(dǎo)愈傷組織與分化培養(yǎng)基：MS+6BA 1.0+2,4D 0.5+3.0%蔗糖。i)培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基。,（3）無菌苗的獲?。簩⒎庸麑?shí)在濃硫酸中浸泡約1h，流水沖洗30min。3周后，莖段周圍出現(xiàn)白色松脆的愈傷組織（圖示）。o),番杏愈傷組織(zǔzhī),第二十八頁，共一百一十四頁。通過愈傷組織的繼代培養(yǎng)，原來(yu225。隨著時(shí)間推移，綠色芽點(diǎn)不斷膨大，其中部分形成正常綠苗（圖示）。)綠苗,番杏盆栽(p233。 （8）煉苗與移栽：移栽前，敞瓶煉苗34d，取出洗凈后，栽至裝有蛭石的塑料杯中，加自來水，杯上罩上玻璃(bō l237。成活率為83.3%。)組織培養(yǎng)的應(yīng)用,1. 無性系快速繁殖技術(shù) 2. 獲得無病毒植株 3. 新品種培育 4. 在遺傳、生理生化和病理等研究上的應(yīng)用(y236。i s249。 目前,在國內(nèi)外已掀起“試管苗”熱,如國外在蘭花、杜鵑、月季、草莓、蘋果、柑桔、石竹、鐵線蓮、桉樹等進(jìn)行快速繁殖已達(dá)到商品化生產(chǎn)。試管苗在國際國內(nèi)市場上已形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn),如廣西都安縣山葡萄苗、羅城縣毛葡萄苗均由國內(nèi)組織培養(yǎng)公司提供,每年需要量達(dá)數(shù)十萬株。)無病毒植株,很多農(nóng)作物都帶有病毒,病毒是植物的嚴(yán)重病害,至2000 年,已定名或暫定名的植物病毒的種類已達(dá)909 種,極難防治。iyǎng)法可獲得無病毒植株,恢復(fù)植物的優(yōu)良品質(zhì),達(dá)到復(fù)壯的目的。iy249。n),節(jié)約人力物力,較快地獲得優(yōu)良品種,目前已有40多種植物獲得了單倍體植株。,第三十五頁，共一百一十四頁。分離單個基因，對它DNA進(jìn)行測序，再對其中的某些堿基實(shí)行突變，然后還需要將基因送到受體細(xì)胞當(dāng)中，看表達(dá)情況，以確定其功能。,第三十六頁，共一百一十四頁。 (2) 難以保存無性繁殖的作物。 (2) 不受病蟲害侵染。經(jīng)低溫貯藏的物種,保持了穩(wěn)定的遺傳性和良好的存活率。ng)、糖類、橡膠、香精油、色素等。這是我國第一個用組織培養(yǎng)進(jìn)行醫(yī)藥的工業(yè)化生產(chǎn)的例子。)也遠(yuǎn)沒有發(fā)揮出來。z236。,3.3.7 人工(r233。ngōng)種子,第四十一頁，共一百一十四頁。n gōngch233。ngōng)種子制作及培養(yǎng)流程圖示,第四十三頁，共一百一十四頁。 （2）體細(xì)胞胚胎發(fā)生的同步化控制。ngxiǎn)的胚根、胚芽的雙極性結(jié)構(gòu)，這是人工種子制作能否成功的關(guān)鍵所在。,化學(xué)抑制法：在細(xì)胞培養(yǎng)初期加入抑制DNA合成的藥物，使細(xì)胞DNA合成暫時(shí)停止，當(dāng)除去(chjiān)過后，恢復(fù)正常溫度，可以使胚性細(xì)胞達(dá)到同步分裂的目的。)萌發(fā)或貯藏。,滴注法,第四十九頁，共一百一十四頁。 瑞士、法國的一些大公司集中研究開發(fā)蔬菜芽人工種子和胚芽生產(chǎn)。,人工種子的產(chǎn)生是對植物傳統(tǒng)繁殖(f225。,3.3.8 植物組織(zǔzhī)與器官的生物反應(yīng)器培養(yǎng),生物反應(yīng)器技術(shù)是植物組織或器官培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物走向工業(yè)化和產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵技術(shù)。)。)反應(yīng)器培養(yǎng)青篙毛狀根生產(chǎn)青篙素為例來介紹生物(shēngw249。世界上青篙素原料主要來源我國和越南，由于天然青篙素受氣候，季節(jié)，蟲害等限制。,12,11,5,10,9,14,14,13,5,2,3,1,6,4,7,一體化設(shè)計(jì)的霧化生物(shēngw249。 hu224。 2. 技術(shù)上的問題 效率偏低、操作比較繁瑣、培養(yǎng)結(jié)果比較難以確定等技術(shù)問題 還需解決。 （2）提高生物反應(yīng)器技術(shù)內(nèi)部培養(yǎng)物生長的均勻性和空間利用率。,第五十五頁，共一百一十四頁。i)培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，從而獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。o)有單細(xì)胞培養(yǎng)、單倍體培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等。,細(xì)胞培養(yǎng),固體(g249。,3.4.3 植物(zh237。iyǎng)材料本身的因素外，培養(yǎng)(p233。,培養(yǎng)基的主要(zhǔy224。,糖,維生素,肌醇,氨基酸及有機(jī)添加物,植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì),瓊脂,第六十一頁，共一百一十四頁。bāo)無性系進(jìn)行細(xì)胞(x236。)的單細(xì)胞,看護(hù)培養(yǎng) 微室培養(yǎng) 平板培養(yǎng) 懸浮培養(yǎng),單細(xì)胞無性系,第六十二頁，共一百一十四頁。,用纖維素酶和果膠酸酶從組織(zǔzhī)分離,（1）機(jī)械法 （2）酶解法 （3）愈傷組織誘導(dǎo)法,第六十三頁，共一百一十四頁。 gāo)愈傷組織松散性；,莖段,第六十四頁，共一百一十四頁。iyǎng)物,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)：細(xì)胞團(tuán)成小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞；在培養(yǎng)基中均勻分布；有空氣交流。,單細(xì)胞培養(yǎng)常用(ch225。)培養(yǎng)法（Nurse culture）,用途：誘導(dǎo)(y242。,用一塊活躍生長的愈傷組織來看護(hù)單個細(xì)胞，并使 其生長和增殖。）已滅菌的濾紙，放置一晚上。,b.看護(hù)培養(yǎng)(p233。 缺點(diǎn)(quēdiǎn)： （1）不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長過程。ny236。iyǎng)法（Microculture）,第一節(jié) 單細(xì)胞培養(yǎng),含義:將單細(xì)胞培養(yǎng)在少量的培養(yǎng)基中。i)加石蠟油,凹穴載玻片,旁邊(p225。ngch233。ny236。,用途: 分離單細(xì)胞無性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計(jì)的一種單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。ngbǎn)培養(yǎng)圖示：,第七十五頁，共一百一十四頁。,第七十六頁，共一百一十四頁。 個/ml 。ngzhī)基本培養(yǎng)基+等量細(xì)胞培養(yǎng)液=0.7 % 瓊脂(qi243。iyǎng)基。,植板效率（或植板率）：已形成細(xì)胞(x236。,(4) 培養(yǎng)： 26℃置暗處(224。ng)比例均勻混合，倒成平板。bāo)懸浮培養(yǎng)（Suspension culture）,特點(diǎn) 1）細(xì)胞營養(yǎng)吸收、環(huán)境條件好，細(xì)胞增殖快, 形成高密度的細(xì)胞群體，適于大規(guī)模培養(yǎng)； 2）能夠(n233。nf)培養(yǎng)類型和方法,成批(ch233。b236。,成批培養(yǎng)(p233。,細(xì)胞(x236。,b. 連續(xù)培養(yǎng)（Continuous culture）,含義：指在培養(yǎng)過程中，以不斷抽取懸浮培養(yǎng)物并注入等量新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)物不斷得到養(yǎng)分補(bǔ)充(bǔchōng)，保持其恒定體積的培養(yǎng)。n)的充分供應(yīng)； （2）可使細(xì)胞保持在增殖旺盛的對數(shù)生長期中； （3）適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn),第八十八頁，共一百一十四頁。i)：,Production of anthocyanin,第八十九頁，共一百一十四頁。,條件培養(yǎng)基 細(xì)胞(x236。如高等植物細(xì)胞、海藻等的細(xì)胞。溫度達(dá)到196℃ 。w249。 d224。不僅節(jié)約能源，減少耕地占用面積，而且不受季節(jié)、地域的限制。,第九十四頁，共一百一十四頁。,第九十五頁，共一百一十四頁。w249。,3.5.1 原生質(zhì)體,1. 定義 植物原生質(zhì)體（protoplast)是指將植物細(xì)胞壁除去后得到裸露的球形細(xì)胞。w249。,2. 原生質(zhì)體的特點(diǎn)(t232。 （3）原生質(zhì)體適合進(jìn)行誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞。),（1）提供相關(guān)生理生化研究（如細(xì)胞壁的生物合成、質(zhì)膜的結(jié)構(gòu)與功能、物質(zhì)運(yùn)輸、能量轉(zhuǎn)換、信息傳遞、細(xì)胞識別、細(xì)胞間相互關(guān)系與激素作用等）的材料。chu225。b232。,原生質(zhì)體的來源： 從理論上講，植物體的任何(r232。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對數(shù)生長期的愈傷組織為材料，還有植物花粉，用于制備單倍體的原生質(zhì)體以及體細(xì)胞胚及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中獲得，一旦細(xì)胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。 （2）酶解法 該法具有條件溫和，原生質(zhì)體完整性好，活力高、得率高等優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)。n hu224。)測定,原生質(zhì)體鑒定(ji224。,3.5.3 原生質(zhì)體培養(yǎng)(p233。,3.5.5 原生質(zhì)體培養(yǎng)(p233。ngkāi)的大花萱草,第一百零七頁，共一百一十四頁。排列相對疏松的花肉細(xì)胞很容易被酶液消化。ili224。,4.酶解好的原生質(zhì)體經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾到離心管中，除去未消化的大塊(d224。,第一百一十頁，共一百一十四頁。蔗糖漂浮法：細(xì)口吸管吸20%蔗糖溶液，小心插入盛有原生質(zhì)體懸液的離心管底部，緩緩將蔗糖溶液擠出，由于比重不同，蔗糖溶液與原生質(zhì)體懸液中間有一明顯界面. 離心5分鐘（500轉(zhuǎn)/分），此時(shí)死細(xì)胞及碎片降至蔗糖溶液內(nèi)，聚集在離心管底部，而活細(xì)胞由于有大量泡沫，故漂浮在上下界面處，用細(xì)管輕輕插入底部將沉降在離心管底部的碎片小心吹打，混勻在蔗糖溶液中，連同蔗糖溶液一起小心吸出， 再吸去上清液即得到健康的原生質(zhì)體。iyǎng)。,第一百一十二頁，共一百一十四頁。,第一百一十三頁，共一百一十四頁。無性繁殖系(clone)：由同一個外植體反復(fù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)后所得一系列的無性繁殖后代。一體化設(shè)計(jì)的霧化生物反應(yīng)器（培養(yǎng)青篙毛狀根生產(chǎn)青篙素