20xx年醫(yī)學專題—流式細胞術樣品制備(完整)-預覽頁
【正文】 ，共三十一頁。 ②加入EDTA液5ml，室溫，半小時，棄之。,第十五頁，共三十一頁。 機械法常常造成嚴重的細胞損傷，較低的細胞產量，為使細胞碎片不影響FCM檢測結果，需采用適當的方法除去碎片或盡量減少碎片。 Ⅱ根據(gēnj249。 Ⅴ在使用酶學方法時，要重視酶的選用，如含有大量結締組織的腫瘤，如食管癌、乳癌、皮膚癌等，用膠原酶為好，因為膠原酶具有在Ca2＋、Mg 2＋存在或在血清狀態(tài)下不發(fā)生活性降低的特征。 ③加入二甲苯58ml脫蠟(在室溫下)，12天，視石蠟脫凈與否，可更換一次二甲苯，蠟脫凈后棄去二甲苯。,石蠟包埋組織(zǔzhī)單細胞懸液的制備,第十八頁，共三十一頁。 ⑧收集細胞懸液，離心沉淀1500prm，以生理鹽水漂洗12次，離心沉淀1500prm，再以生理鹽水漂洗12次，離心沉淀500800prm，去碎片。,注意事項： 一定將石蠟從組織中脫干凈，檢驗是否將石蠟脫凈的方法是，棄去二甲苯，加入100%乙醇，如無絮狀物浮起，即視為石蠟已脫凈，反之則沒有脫凈。,二、血液單細胞樣品的制備 血液是天然的單細胞分散細胞懸液，血中的細胞成分在生理狀態(tài)下呈分散的游離狀態(tài)，它是流式細胞分析的最合適的樣品，全血中含有紅細胞，白細胞和血小板三種有形成分，但流式細胞的檢測是以某一群細胞為測定對象，因此在檢測前須將所測的某群細胞分離出來，下面分別(fēnbi233。 ⒉先將3ml人淋巴細胞分離液放入另一個離心管，然后將稀釋后的血沿試管內壁緩緩加入到分離液面之上，勿用力過大，以免造成血液與分離液混合，保持清晰的分層狀態(tài)。 ⒌70%冰乙醇固定，置4℃冰箱保存。 ⒊以吸管慢慢將粒細胞層吸出，置另一支離心管內，以5ml的Hank′s液洗滌三次，每次離心沉淀1500prm，10分鐘。,㈢ 單核細胞制備 1. 取肝素1000u/ml抗凝全血3.0m1,加入3.0ml生理 鹽水將血稀釋,均在無菌條件下操作。,4.將粘附于培養(yǎng)瓶壁上的單核細胞消化下來,用0.25%胰酶消化10－15分鐘,室溫下,并不斷搖震,以促使細胞脫落下,單核細胞的粘附力很強,用酶消化往往獲得細胞數少,目前亦采用機械的方法,用一橡皮(xi224。 6.將細胞涂片,以丫啶橙染色,置熒光顯微鏡下觀察形態(tài)和純度。,三、脫落細胞單細胞懸液的制備 在臨床實際工作中，可收集到大量自然脫落的細胞，這些細胞標本經過簡單(jiǎndān)的處理，就可得到較好的單分散細胞懸液，所以是流式細胞術檢測的天然樣品，下面介紹幾種常見的脫落細胞樣品制備方法。,㈡食管脫落細胞懸液的制備 1.將食管拉網器上的細胞洗脫到10ml生理鹽水中,以1500prm離心(l237。 3.在標記染色前如發(fā)現細胞有團塊聚集，可用0.5%胃蛋白酶(PH1.52.0)在37℃水浴箱中消化510分鐘，振蕩分散為單細胞懸液。 3.離心沉淀后加入冷枸櫞酸緩沖液5ml，在室溫下放置(f224。,第二十九頁，共三十一頁。 2.以300目篩網過濾，去除細胞團塊。,內容(n232。EDTA0.2g溶解后，加入(jiār249。4.用300目篩網過濾后，以PBS洗去枸櫞酸緩沖液，離心沉淀去上清，加入(jiā
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