20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—流式細(xì)胞術(shù)樣品制備(完整)-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 ，共三十一頁(yè)。 ②加入EDTA液5ml，室溫，半小時(shí)，棄之。,第十五頁(yè)，共三十一頁(yè)。 機(jī)械法常常造成嚴(yán)重的細(xì)胞損傷，較低的細(xì)胞產(chǎn)量，為使細(xì)胞碎片不影響FCM檢測(cè)結(jié)果，需采用適當(dāng)?shù)姆椒ǔニ槠虮M量減少碎片。 Ⅱ根據(jù)(gēnj249。 Ⅴ在使用酶學(xué)方法時(shí)，要重視酶的選用，如含有大量結(jié)締組織的腫瘤，如食管癌、乳癌、皮膚癌等，用膠原酶為好，因?yàn)槟z原酶具有在Ca2＋、Mg 2＋存在或在血清狀態(tài)下不發(fā)生活性降低的特征。 ③加入二甲苯58ml脫蠟(在室溫下)，12天，視石蠟脫凈與否，可更換一次二甲苯，蠟脫凈后棄去二甲苯。,石蠟包埋組織(zǔzhī)單細(xì)胞懸液的制備,第十八頁(yè)，共三十一頁(yè)。 ⑧收集細(xì)胞懸液，離心沉淀1500prm，以生理鹽水漂洗12次，離心沉淀1500prm，再以生理鹽水漂洗12次，離心沉淀500800prm，去碎片。,注意事項(xiàng)： 一定將石蠟從組織中脫干凈，檢驗(yàn)是否將石蠟脫凈的方法是，棄去二甲苯，加入100%乙醇，如無(wú)絮狀物浮起，即視為石蠟已脫凈，反之則沒(méi)有脫凈。,二、血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 血液是天然的單細(xì)胞分散細(xì)胞懸液，血中的細(xì)胞成分在生理狀態(tài)下呈分散的游離狀態(tài)，它是流式細(xì)胞分析的最合適的樣品，全血中含有紅細(xì)胞，白細(xì)胞和血小板三種有形成分，但流式細(xì)胞的檢測(cè)是以某一群細(xì)胞為測(cè)定對(duì)象，因此在檢測(cè)前須將所測(cè)的某群細(xì)胞分離出來(lái)，下面分別(fēnbi233。 ⒉先將3ml人淋巴細(xì)胞分離液放入另一個(gè)離心管，然后將稀釋后的血沿試管內(nèi)壁緩緩加入到分離液面之上，勿用力過(guò)大，以免造成血液與分離液混合，保持清晰的分層狀態(tài)。 ⒌70%冰乙醇固定，置4℃冰箱保存。 ⒊以吸管慢慢將粒細(xì)胞層吸出，置另一支離心管內(nèi)，以5ml的Hank′s液洗滌三次，每次離心沉淀1500prm，10分鐘。,㈢ 單核細(xì)胞制備 1. 取肝素1000u/ml抗凝全血3.0m1,加入3.0ml生理 鹽水將血稀釋,均在無(wú)菌條件下操作。,4.將粘附于培養(yǎng)瓶壁上的單核細(xì)胞消化下來(lái),用0.25%胰酶消化10－15分鐘,室溫下,并不斷搖震,以促使細(xì)胞脫落下,單核細(xì)胞的粘附力很強(qiáng),用酶消化往往獲得細(xì)胞數(shù)少,目前亦采用機(jī)械的方法,用一橡皮(xi224。 6.將細(xì)胞涂片,以丫啶橙染色,置熒光顯微鏡下觀察形態(tài)和純度。,三、脫落細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備 在臨床實(shí)際工作中，可收集到大量自然脫落的細(xì)胞，這些細(xì)胞標(biāo)本經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單(jiǎndān)的處理，就可得到較好的單分散細(xì)胞懸液，所以是流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的天然樣品，下面介紹幾種常見(jiàn)的脫落細(xì)胞樣品制備方法。,㈡食管脫落細(xì)胞懸液的制備 1.將食管拉網(wǎng)器上的細(xì)胞洗脫到10ml生理鹽水中,以1500prm離心(l237。 3.在標(biāo)記染色前如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有團(tuán)塊聚集，可用0.5%胃蛋白酶(PH1.52.0)在37℃水浴箱中消化510分鐘，振蕩分散為單細(xì)胞懸液。 3.離心沉淀后加入冷枸櫞酸緩沖液5ml，在室溫下放置(f224。,第二十九頁(yè)，共三十一頁(yè)。 2.以300目篩網(wǎng)過(guò)濾，去除細(xì)胞團(tuán)塊。,內(nèi)容(n232。EDTA0.2g溶解后，加入(jiār249。4.用300目篩網(wǎng)過(guò)濾后，以PBS洗去枸櫞酸緩沖液，離心沉淀去上清，加入(jiā
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