第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-預(yù)覽頁
【正文】 細(xì)胞、組織等 承載工具 鞘液及流動(dòng)室 載玻片 檢測(cè)信號(hào) 光學(xué)信號(hào) 形態(tài)及染色 放大方式 PMT、放大電路 目鏡 物鏡、光學(xué)放大 統(tǒng)計(jì) 計(jì)算機(jī)， 5000 人工， 200 結(jié)果 多參數(shù)，綜合分析 簡(jiǎn)單，單參數(shù) 流式細(xì)胞儀與顯微鏡的區(qū)別 細(xì)胞在液柱中與激光束相交時(shí)向周圍 360176。 細(xì)胞不被破壞，測(cè)量快速、大量、準(zhǔn)確、靈敏、定量 流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn) 流式細(xì)胞儀 是測(cè)量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀，是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對(duì)細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、 RNA、蛋白質(zhì)、抗原等）進(jìn)行快速測(cè)量并可分類收集的高技術(shù)。 流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號(hào)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。主要作用是包裹樣本流的周圍，保持樣本流中細(xì)胞處于噴嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。 ～ 10176。 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 側(cè)向散射光 示意圖 測(cè)得的 FS與 SS信號(hào)通過計(jì)算機(jī)處理，可得到 FSSS圖，由此可僅用散射光信號(hào)對(duì)未染色的活細(xì)胞進(jìn)行分析或分選。 ? 選擇不同的單抗及染料就可同時(shí)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)不同特征。 ? 分選純度： 分選出的目的細(xì)胞占所有收獲細(xì)胞的百分率。與分選速度成反比。 （二）雙參數(shù)直方圖 綠色熒光強(qiáng)度 紅色熒光強(qiáng)度 雙參數(shù)直方圖點(diǎn)圖 2. 二維等高圖 ? 由類似地圖上的等高線組成，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖。 二維等高圖 3. 假三維等高圖 （三）三參數(shù)直方圖 多參數(shù)分析：當(dāng)細(xì)胞標(biāo)記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號(hào)和散射光信號(hào)可根據(jù)需要進(jìn)行組合分析。 D1 CD4+/CD3 D2 CD4+/CD3+ D3 CD4 /CD3 D4 CD4 /CD3+ 如十字門分析時(shí)，起就可以由四個(gè)區(qū)域構(gòu)成，即G=D1+D2+D3+D4。 三、免疫膠乳顆粒技術(shù)的應(yīng)用 微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒光色（固相芯片是用探針在芯片上的坐標(biāo)位置給基因的特異性編碼；而液相芯片則是用顏色來編碼） 通過對(duì)標(biāo)記不同熒光素分子的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn) FCM對(duì)可溶性物質(zhì)的定量分析 ? 適當(dāng)?shù)闹苽浞绞? ? 處理紅細(xì)胞 ? 實(shí)體組織來源標(biāo)本用機(jī)械法 ? 溫度 25~37℃ ， ~ 四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 （一）單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)控 ? 溫度 ? pH ? 染料濃度 ? 固定劑 （二）免疫熒光染色的質(zhì)控 ? 光路與流路校正 : 確保激光光路與樣品流處于正交狀態(tài)，減少變異（ CV）。 ? 全程質(zhì)量控制：與待測(cè)標(biāo)本一起標(biāo)記和檢測(cè)，結(jié)果達(dá)靶值，提示本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。目前移植免疫中的 FCM應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)的交叉配型（ Flow cytometry crossmatching, FCXM）和群體反應(yīng)性抗體（ Panel reactive antibody, PRA）檢測(cè)。 ?FCM分析中前向散射光反映顆粒的大??；側(cè)向散射光反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度；熒光反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少，根據(jù)其標(biāo)記的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表
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