20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀概述-預(yù)覽頁
【正文】 形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測量區(qū)。o)的產(chǎn)生與接收：染色的細(xì)胞在測量區(qū)受激光照射后發(fā)出熒光，同時(shí)產(chǎn)生光散射。,第十六頁，共七十二頁。o)分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)，從而達(dá)到細(xì)胞分類收集的目的。,當(dāng)某類細(xì)胞的特性與要分選的細(xì)胞相同時(shí)，流式細(xì)胞儀就會(huì)在這類細(xì)胞形成(x237。,第十九頁，共七十二頁。,第二十頁，共七十二頁。 前者的光斑直徑大于被檢細(xì)胞體積，只能提供細(xì)胞內(nèi)某種生物化學(xué)成分的參數(shù)。 f233。tǒng)；激光光源及光束成形系統(tǒng)(x236。tǒng)等五個(gè)部分。,第二十四頁，共七十二頁。,（二）激光光源與光束成形系統(tǒng) 激光是一種相干光源，它能提供單波長、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照(guāngzh224。,第二十六頁，共七十二頁。,（三）光學(xué)系統(tǒng) FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片和小孔組成。 3.帶通濾光片 帶通濾光片允許一定波長范圍內(nèi)的光通過,第二十八頁，共七十二頁。,1.散射光信號 射光分為前向角散射和側(cè)向角散射，散射光不依賴任何細(xì)胞樣品(y224。,2.熒光信號(x236。,第三十一頁，共七十二頁。,第三十二頁，共七十二頁。,第三十三頁，共七十二頁。,從右圖中可以看出，陰影為探測器檢測(jiǎn c232。 在光電倍增管前放上一小孔，作為空間濾波器，排除其它雜散光信號，從而(c243。,（五）細(xì)胞分選器 1．小水滴的形成 壓電晶體帶動(dòng)流動(dòng)室振動(dòng)，液流形成水滴。ng)為50μm時(shí)，信號頻率為40kHz，則每秒鐘產(chǎn)生4萬個(gè)水滴。li225。o)斷開時(shí)給整個(gè)流束充電，則水滴從流束上斷開后便帶有同極性的多余表面電荷。目前FCM所采用的都是多參數(shù)指標(biāo)，熒光標(biāo)記物參數(shù)數(shù)量在逐漸增多(zēnɡ duō)。,第三節(jié) 流式細(xì)胞儀的主要(zhǔy224。,二、儀器的分辨率 分辨率是衡量儀器測量(c232。xiǎo)，一般目前商品化的FCM可以測量到0.2～0.5μm左右。) 分析速度以每秒分析的細(xì)胞數(shù)來表示。,第四十五頁，共七十二頁。 分選收獲率指被分出的細(xì)胞與原來(yu225。,第四節(jié) 流式細(xì)胞儀應(yīng)用(y236。)是一項(xiàng)集多學(xué)科知識綜合應(yīng)用的復(fù)雜儀器(y237。)各方面性能指標(biāo)有嚴(yán)格的要求以外，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與樣品處理方面也需要有豐富的基礎(chǔ)理論及操作經(jīng)驗(yàn)。,第四十八頁，共七十二頁。 因此，被分析細(xì)胞在制備成單細(xì)胞懸液后，經(jīng)過與熒光染料染色后才能上機(jī)進(jìn)行檢測。ng)單個(gè)細(xì)胞DNA與RNA含量，還可區(qū)分出G0與G1期細(xì)胞； 若丹明123（rhodamin 123）是線粒體特殊染料。)工作環(huán)節(jié)和儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，以保證各項(xiàng)檢測數(shù)據(jù)和指標(biāo)的可靠性。在流路校正物中，有標(biāo)準(zhǔn)大小的熒光微球，其物理性質(zhì)、生物學(xué)特性和化學(xué)特性均經(jīng)過標(biāo)定。ngt224。o zhǔn) 為保證儀器在計(jì)數(shù)時(shí)的準(zhǔn)確性，儀器應(yīng)采用絕對計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品建立絕對計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。,第五節(jié) FCM的維護(hù)(w233。 2.冷卻水須用過濾器，并保證壓力和流量。 4.安裝單獨(dú)的可靠的地線。,二、常見故障及排除(p225。,第五十八頁，共七十二頁。nɡ)應(yīng)用,一、流式細(xì)胞儀在免疫學(xué)中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)廣泛地應(yīng)用于免疫(miǎny236。)分型、分選、腫瘤細(xì)胞的免疫(miǎny236。deficiency virus，HIV)后，HIV主要(zhǔy224。,利用流式細(xì)胞儀，采用多色熒光(y237。,第六十二頁，共七十二頁。n)出現(xiàn)的細(xì)胞表面標(biāo)志，可以對白血病進(jìn)行免疫分型，對其進(jìn)行導(dǎo)向治療。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測血小板膜上受體，主要是對血小板特異性膜糖蛋白和活化標(biāo)志物進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，結(jié)合(ji233。,細(xì)胞因子的檢測(jiǎn c232。,二、流式細(xì)胞儀在血液學(xué)中的應(yīng)用 血液病多為腫瘤性、免疫性和遺傳性疾病，惡性血液病約占其總數(shù)一半以上。,第六十六頁，共七十二頁。jǐn)可了解血/腫瘤細(xì)胞的增殖狀況，更可用于化療藥物作用機(jī)制的探討，從而將其區(qū)分為增殖周期特異性、非特異性藥物，以及周期時(shí)相特異性、非特異性藥物，以便更合理的配伍聯(lián)合化療方案，預(yù)測腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性等。對同一細(xì)胞的參數(shù)測定技術(shù)則導(dǎo)致了對細(xì)胞周期的一些新發(fā)現(xiàn)，典型的方法是吖啶橙雙染色技術(shù)。ngguāng)探針標(biāo)記的單克隆抗體，為流式細(xì)胞技術(shù)研究各種腫瘤抗原、腫瘤蛋白、致癌基因開辟了新途徑，極大地提高了腫瘤學(xué)的研究水平，并為流式細(xì)胞技術(shù)在腫瘤學(xué)的研究中開辟了更廣闊的應(yīng)用前景。通常58％～97％的強(qiáng)直性脊柱炎患者可檢出這種抗原，而正常人僅2％～7％可檢出這種抗原。 亦可用于篩選新藥，如化療(hu224。,內(nèi)容(n232。噴嘴的振動(dòng)頻率即每秒鐘產(chǎn)生水滴的數(shù)目。流式細(xì)胞分析儀器(y237。)，除了對儀器(y237。,
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