20xx年醫(yī)學專題—第五章菌落總數(shù)和大腸菌群的檢驗-預覽頁
【正文】 4 75%乙醇。,操作步驟,6.1.1 固體和半固體食品：以無菌操作稱取25g樣品，放入于裝有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或0.85％生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2min，制成1:10樣品勻液；或放入于225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min制成1:10的樣品勻液。）。 6.1.4 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1次1mL滅菌吸管或吸頭。1℃恒溫水浴(shuǐ y249。,6.2 培養(yǎng)(p233。2h。 6.2.2 瓊脂凝固后，如果懷疑樣品中含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），并在報告上記錄該操作，待覆蓋層凝固，翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進行操作,第十七頁，共五十六頁。 6.3.1 平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU個之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。,6.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2，代表全平板菌落數(shù)。如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應將每條鏈作為一個菌落計。)計數(shù)方法,第二十頁，共五十六頁。 2.若有兩個連續(xù)稀釋度在適宜計數(shù)范圍內(nèi)（30～300個菌落）時，按如下公式計算： N= ∑C/(n1 +0.1n2)d 式中： N — 樣品中菌落數(shù)； ∑C — 平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1 — 第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)； n2 — 適宜范圍菌落數(shù)的第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)； d — 稀釋因子（第一稀釋度）；,7. 結(jié)果(jiē guǒ)的表述,7.1菌落(jūnlu242。)數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示為25000 或 2.5104。 6. 若所有稀釋度的菌落數(shù)均不可(b249。)稀釋度) 按新公式計算 （舊標準：求比值 2 取較小稀釋倍數(shù) ； 300 最高稀釋度平均菌落數(shù) X 最高稀釋倍數(shù) 300 或 30 取最接近的 X 稀釋倍數(shù) 無法計數(shù) 報告無法計數(shù),第二十四頁，共五十六頁。) 倍數(shù),平均(p237。 7.2.3 若所有平板(p237。,7.菌落(jūnlu242。o)乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。ng)大腸桿菌，其它三屬稱為非典型(diǎnx237。 一方面，它可以作為糞便污染食品的指標菌。如有非典型大腸桿菌存在，說明該食品受到糞便陳舊污染。,我國和許多國家的大腸菌群檢驗結(jié)果均采用大腸菌群MPN來表示，2003標準采用每100ml（g）樣品中大腸菌群最近似數(shù)來表示，2008\2010標準采用每1mL(g)樣品中大腸菌群最近似數(shù)表示。,GB/T5009.32010 食品(sh237。,第三十一頁，共五十六頁。,GB 4789.32003,第三十三頁，共五十六頁。1 ℃。 3.4 天平：感量0.1 g。 3.8 無菌錐形瓶：容量500 mL。,第三十四頁，共五十六頁。ng)紅膽鹽瓊脂（Violet Red Bile Agar，VRBA） 4.4 磷酸鹽緩沖液 4.5 無菌生理鹽水 4.6 無菌1 mol/L NaOH 4.7 無菌1 mol/L HCl,第三十五頁，共五十六頁。,6 操作步驟,第三十六頁，共五十六頁。 6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。,6.2 初發(fā)酵(fā ji224。2 h產(chǎn)氣者進行(j236。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。,操作(cāozu242。 jūn)生理鹽水,雙料,復發(fā)酵 (BGLB/乳糖發(fā)酵管),陽性管進行,伊紅美藍瓊脂,第三十九頁，共五十六頁。1℃培養(yǎng)48 h177。,6.4 大腸菌群最可能(kěn233。,第四十一頁，共五十六頁。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆蓋平板表層。,8.3 平板菌落(jūnlu242。,第四十四頁，共五十六頁。1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h，觀察產(chǎn)氣情況。,第四十五頁，共五十六頁。zhōng)10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：1006/10104/g（mL）=6.0105CFU/g（mL）。),第四十七頁，共五十六頁。ng f232。121 ℃高壓 滅菌15 min。0.1 A.2.2 制法 將蛋白胨、乳糖溶于約500 mL蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200 mL（將20.0 g脫水牛膽粉溶于200 mL 蒸餾水中，調(diào)節(jié)(ti225。,第四十九頁，共五十六頁。煮沸2 min，將培養(yǎng)基冷卻至45 ℃～50 ℃傾注平板。,第五十頁，共五十六頁。n suān)90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。,第五十四頁，共五十六頁。ng)總結(jié),菌落總數(shù)與大腸菌群的測定。3.2 冰箱：2℃～5℃。ngbǎn)翻轉(zhuǎn)，36℃177。1℃培養(yǎng)72h
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