20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測細(xì)胞活力精講-預(yù)覽頁
【正文】 ml，10M HCl 0.1ml用雙蒸水溶解配成100ml）過夜， 第二天早晨置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。ow249。),MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4186。oji224。y224。可以以時間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細(xì)胞生線曲線，專門公式求IC50（半數(shù)抑制濃度 ）。xi224。ow249。bāo)接種濃度。,第十三頁，共二十四頁。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長滿時約有105個細(xì)胞。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。一定要多看文獻，參考別人的結(jié)果再定個比較大的范圍先初篩。在不同時間點的測定OD值，輸入(shūr249。100ul的培養(yǎng)液對于10的4～5次方的增殖期細(xì)胞來說，很難維持68h，如果營養(yǎng)(y237。,第十六頁，共二十四頁。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。由于試驗本底增加，會試驗敏感性。,關(guān)于(guāny故而MTT細(xì)胞密度多采用10000/ml，100ul/孔。)細(xì)胞每孔的細(xì)胞數(shù)可達到105,貼壁細(xì)胞可為103104。 注意細(xì)胞懸液一定要混勻，已避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致(dǎozh236。所以要熟練鞋、快些上板。)清除上清,直接吸出：加DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會吸去，可在這之前先用平板離心機離心96孔板，2000r，5分鐘，然后吸掉上清(如果是懸浮細(xì)胞，則推薦此法,懸浮細(xì)胞要離心2500rpm10min.且其做MTT最好用圓底型96孔板,清除上清時注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉,建議各孔吸棄150160ul即可)。,第二十頁，共二十四頁。guǒ)培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測時可以盡量去除培養(yǎng)液的影響，DMSO的量也可為100ul或150ul. 加了DMSO后用振蕩器輕輕振蕩5－10min, 時間控制盡量嚴(yán)格一點,放置時間長了會影響結(jié)果,值會偏大,且結(jié)果不可信. 加入DMSO溶解后盡快檢測。ng),至于測定波長的選擇是因顯色溶液而異的。如果各個孔的孔間差異性特別(t232。,謝謝(xi232。ng)總結(jié),MTT法檢測細(xì)胞活力。s表示，應(yīng)用SPSS軟件進行方差分析，p0.05時為相差顯著，p0.01時為相差非常顯著
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