20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測細(xì)胞活力精講(文件)
【正文】 會偏??；另外跟細(xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時間短，OD值也會偏低。,第二十二頁，共二十四頁。ir243。所有數(shù)值以x177。謝謝觀看,第二十四頁，共二十四頁。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對每一種細(xì)胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶(ji233。 xie)觀看,第二十三頁，共二十四頁。bi233。對于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值 。,第二十一頁，共二十四頁。,加入(jiār249。 翻轉(zhuǎn)倒扣法：可以直接將板翻轉(zhuǎn)倒扣（墊幾層濾紙）2－3次，比用“吸”的辦法(b224。,第十九頁，共二十四頁。)每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。,第十八頁，共二十四頁。 細(xì)胞密度要根據(jù)不同細(xì)胞的特點(diǎn)來定。)細(xì)胞的接種(鋪板),細(xì)胞過了30代以后就不要用了。因此，一般選小于10％胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行。對照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組加入不同濃度的藥物。,7.實(shí)驗(yàn)時應(yīng)設(shè)置(sh232。ngyǎng)不夠的話，細(xì)胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在48h換液的。)excel表，最后得到不同時間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點(diǎn)應(yīng)該就是最好的時間點(diǎn)（因?yàn)檫@個時候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯）。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時間范圍再細(xì)篩。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。,實(shí)驗(yàn)(sh237。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對每一種細(xì)胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間。)濃度0.0.00.000.0000.00000.000001umol/l，稀釋倍數(shù)為10，最大濃度為0.1，抑制率為0.9 0.8
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