20xx年醫(yī)學專題—mtt法檢測細胞活力精講-全文預覽
【正文】 0、0.60.40.21，0.06。)： lgIC50=XmI(P(3PmPn)/4) Xm:lg 最大劑量 I:lg(最大劑量/相臨劑量) P:陽性反應率之和 Pm:最大陽性反應率 Pn:最小陽性反應率,第十一頁，共二十四頁?；蛴嬎阋种坡?。n)結(jié)果統(tǒng)計學處理,所有數(shù)值以x177。n)最好帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關(guān)系，因為時間較短。C避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在20度長期保存，避免反復凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。)的配制,濃度 體積(tǐjī) 過濾,第八頁，共二十四頁。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm測量各孔的吸光值。 2）置37℃，5%CO2孵育24小時，倒置顯微鏡下觀察。nfjīng)物充分溶解。,4. 每孔加入10ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。 2. 培養(yǎng)細胞：將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中，在37℃、5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板，大約12h），加入濃度梯度的藥物。jīng)物 Formazan,第四頁，共二十四頁。 在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與活細胞數(shù)成正比。nlǐ),四唑鹽（噻唑藍）是一種能接受氫原子的染料，簡稱MTT 活細胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原(hu225。)和意義,檢測細胞存活和生長情況(q237。MTT法檢測細胞(x236。d236。,原理(yu225。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的紫藍色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量，從而反映細胞的增殖情況。bāo)+MTT,琥珀酸脫 氫酶,紫藍色結(jié)晶(ji233。 （邊緣孔用PBS或空白培養(yǎng)基填充）。,第五頁，共二十四頁。 6. 每孔加入100ul二甲基亞砜（置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶(ji233。,懸浮(xu225。同時設置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設5個復孔。)培養(yǎng)4 h 4）每孔加三聯(lián)裂解液（10gSDS，異丁醇5
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