20xx年醫(yī)學專題—mtt法檢測細胞活力精講(存儲版)
【正文】 壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細胞過滿。根據(jù)自己初篩的結果縮小濃度和時間范圍再細篩。ngyǎng)不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結果，我們是在48h換液的。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，而加藥組加入不同濃度的藥物。)細胞的接種(鋪板),細胞過了30代以后就不要用了。,第十八頁，共二十四頁。,第十九頁，共二十四頁。,加入(jiār249。對于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值 。 xie)觀看,第二十三頁，共二十四頁。在進行MTT試驗前，對每一種細胞都應測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間。所有數(shù)值以x177。,第二十二頁，共二十四頁。d236。可以輕拍，或者傾斜一點幫助吸液，但前提是細胞貼壁要比較牢。另外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。nf,第十七頁，共二十四頁。)調零孔，對照孔，加藥孔。,4.培養(yǎng)時間。,2.藥物濃度的設定。n)前應明確的問題,1.選擇適當?shù)募毎臃N濃度。,注意事項,1． 選擇適當?shù)募毎?x236。,實驗結果(jiē guǒ)統(tǒng)計學處理,公式如下(r,實驗(sh237。izh236。x249。 7.同時設置調零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）,第六頁，共二十四頁。 3. 5%CO2，37℃孵育分別孵育24小時后，倒置顯微鏡下觀察。,活細胞(x236。ng) 用于評價藥物產生的細胞毒作用,第二頁，共二十四頁。bāo)活力,甘肅中醫(yī)藥大學,第一頁，共二十四頁。n yu225。,貼壁細胞操作步驟,1. 接種(jiēzh242。若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖23遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。)細胞操作步驟：,1）將細胞離心收集后，調節(jié)細胞懸液濃度大約1104/ml，每孔先加細胞懸液90ul,相應梯度的藥物每孔10ul；共100ul加入到96孔板（邊緣孔用PBS填充）。,第七頁，共二十四頁。尤其當MTT變?yōu)榛揖G色
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