20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力精講(存儲(chǔ)版)
【正文】 壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過(guò)滿。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時(shí)間范圍再細(xì)篩。ngyǎng)不夠的話，細(xì)胞會(huì)由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在48h換液的。對(duì)照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對(duì)照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組加入不同濃度的藥物。)細(xì)胞的接種(鋪板),細(xì)胞過(guò)了30代以后就不要用了。,第十八頁(yè)，共二十四頁(yè)。,第十九頁(yè)，共二十四頁(yè)。,加入(jiār249。對(duì)于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值 。 xie)觀看,第二十三頁(yè)，共二十四頁(yè)。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對(duì)每一種細(xì)胞都應(yīng)測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間。所有數(shù)值以x177。,第二十二頁(yè)，共二十四頁(yè)。d236。可以輕拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，但前提是細(xì)胞貼壁要比較牢。另外，吹散次數(shù)過(guò)多也會(huì)影響細(xì)胞活力。nf,第十七頁(yè)，共二十四頁(yè)。)調(diào)零孔，對(duì)照孔，加藥孔。,4.培養(yǎng)時(shí)間。,2.藥物濃度的設(shè)定。n)前應(yīng)明確的問題,1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。,注意事項(xiàng),1． 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞(x236。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiē guǒ)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,公式如下(r,實(shí)驗(yàn)(sh237。izh236。x249。 7.同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對(duì)照孔（細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）,第六頁(yè)，共二十四頁(yè)。 3. 5%CO2，37℃孵育分別孵育24小時(shí)后，倒置顯微鏡下觀察。,活細(xì)胞(x236。ng) 用于評(píng)價(jià)藥物產(chǎn)生的細(xì)胞毒作用,第二頁(yè)，共二十四頁(yè)。bāo)活力,甘肅中醫(yī)藥大學(xué),第一頁(yè)，共二十四頁(yè)。n yu225。,貼壁細(xì)胞操作步驟,1. 接種(jiēzh242。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖23遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。)細(xì)胞操作步驟：,1）將細(xì)胞離心收集后，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度大約1104/ml，每孔先加細(xì)胞懸液90ul,相應(yīng)梯度的藥物每孔10ul；共100ul加入到96孔板（邊緣孔用PBS填充）。,第七頁(yè)，共二十四頁(yè)。尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1