【正文】 菌將不易分散或長(zhǎng)成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。實(shí)際工作中同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。平板菌落計(jì)數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。(4)當(dāng)你的平板上長(zhǎng)出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長(zhǎng)出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間(48h)后觀察結(jié)果?三 光電比濁計(jì)數(shù)法一、目的要求1．了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測(cè)定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。光電比濁計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、迅速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)控制。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測(cè)定。再分別裝入已編好號(hào)的1至7號(hào)無菌試管中。測(cè)定時(shí)用無菌生理鹽水作空白對(duì)照。2．復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。也可以直接用試管或帶有測(cè)定管的三角瓶(圖155)測(cè)定“klett units”值的光度計(jì)。3．儀器或其他用具 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。4．比濁測(cè)定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，選用600nm波長(zhǎng)進(jìn)行光電比濁測(cè)定。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測(cè)定OD值。2．思考題(1)如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不同？?jī)烧吒饔惺裁磧?yōu)缺點(diǎn)？(2)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所經(jīng)歷的四個(gè)時(shí)期中，哪個(gè)時(shí)期其代時(shí)最短？若細(xì)胞密度為103/ml，其密度高達(dá)2108/ml，計(jì)計(jì)算出其代時(shí)。5）病毒的特點(diǎn)：只能在電子顯微鏡下看見。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。溫和噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細(xì)胞不裂解而繼續(xù)生長(zhǎng)，不引起宿主細(xì)胞裂解。第二章12）細(xì)菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。部分細(xì)菌有特殊結(jié)構(gòu)：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。（半滲透膜），含有蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和多糖。19）核糖體。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。24）革蘭氏染色的機(jī)制：1）革蘭氏染色與細(xì)菌等電點(diǎn)有關(guān)系：革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)比革蘭氏陰性菌的等電點(diǎn)低，說明革蘭氏陽(yáng)性菌帶的負(fù)電荷比革蘭氏陰性菌多。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。28）原生動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)類型：1全動(dòng)性營(yíng)養(yǎng)2植物性營(yíng)養(yǎng)3腐生性營(yíng)養(yǎng)29）原生動(dòng)物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動(dòng)物的作用：所有原生動(dòng)物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。有性生殖和無性生殖。分發(fā)酵型和氧化型兩種。36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生38）霉菌的繁殖：有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2轉(zhuǎn)移酶類：AR+B=A+BR水解酶類：AB+H2O=AOH+BH裂解酶類：AB=A+B異構(gòu)酶：葡萄糖=果糖（例）合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi或A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對(duì)環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高46）酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程式：E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物47）酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：下圖48)底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱酶的激活劑。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。按物理性質(zhì)分為。雜亂運(yùn)動(dòng)的，水溶性的溶質(zhì)分子（水，無機(jī)鹽，O2，CO2）通過細(xì)胞質(zhì)膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴(kuò)散，不與膜上的分子發(fā)生反應(yīng)，這種擴(kuò)散是非特異的，擴(kuò)散速度慢。59)主動(dòng)運(yùn)輸：當(dāng)微生物細(xì)胞內(nèi)積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細(xì)胞外的濃度時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。與主動(dòng)運(yùn)輸相比，有一個(gè)復(fù)雜的運(yùn)輸系統(tǒng)，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)發(fā)生了化學(xué)變化，主要用于糖的運(yùn)輸，運(yùn)輸總效果與主動(dòng)運(yùn)輸相似，可以逆濃度梯度將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移向細(xì)胞內(nèi)，結(jié)果使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的物質(zhì)濃度大大超過未改變結(jié)構(gòu)的同類物質(zhì)的濃度。63）微生物的發(fā)育：從生長(zhǎng)到繁殖這個(gè)由量變到質(zhì)變的過程叫發(fā)育 64）代時(shí)：細(xì)菌兩次細(xì)胞分裂之時(shí)的時(shí)間。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開，均會(huì)產(chǎn)生滲透壓。71)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系：競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對(duì)食物等營(yíng)養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競(jìng)爭(zhēng)，互相收到不利影響。74)偏害關(guān)系：共存于同一環(huán)境的兩種微生物，甲方對(duì)乙方有害，乙方對(duì)甲方無任何影響。75)捕食關(guān)系：有的微生物不是通過代謝產(chǎn)物對(duì)抗對(duì)方，而是吞食對(duì)方，這種關(guān)系稱為捕食關(guān)系。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。80)遺傳可改變的一面是變異81)遺傳是相對(duì)的，變異是絕對(duì)的。原因有多因素低劑量的誘變效應(yīng)，互變異構(gòu)效應(yīng)。87)雜交。通過溫和噬菌體的媒介作用，把供體細(xì)胞內(nèi)特定的基因攜帶至受體細(xì)胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。基因工程是用人工方法把所需要的某一供體生物的DNA提取出來，在離體的條件下用限制性內(nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長(zhǎng)度有幾千個(gè)核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中，以便外來的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行復(fù)制，擴(kuò)增和表達(dá)，再進(jìn)行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對(duì)外源基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離提純，從而獲得新品種。2水體中好氧細(xì)菌利用溶解氧把有機(jī)物分解為簡(jiǎn)單有機(jī)物和無機(jī)物，并用以組成自身有機(jī)體，水中溶解氧急速下降至零，此時(shí)魚類絕跡，原生動(dòng)物，輪蟲，浮游甲殼動(dòng)物死亡，厭氧細(xì)菌大量繁殖，對(duì)有機(jī)物進(jìn)行厭氧分解。如果河流不再被有機(jī)物污染，河水中溶解氧恢復(fù)到原來的水平，甚至達(dá)到飽和。A=n178?！财鞑挠镁摺筹@微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細(xì)菌、放線菌等固定裝片；；無菌水、生理鹽水。10（179。凡實(shí)驗(yàn)中學(xué)生的所思所想，如無菌操作技術(shù)要點(diǎn)、自行處理實(shí)驗(yàn)材料、失敗與思考等均可進(jìn)行討論（如涂片時(shí)蒸餾水不宜過多、取用菌時(shí)防止菌被灼燙變形、取菌宜少不宜多等均是可以討論的內(nèi)容）。10（179。10（179。哪些因素會(huì)影響到革蘭氏染色結(jié)果的正確？其中是關(guān)鍵的一步是什么？ 菌齡及培養(yǎng)條件和染色技術(shù)是最主要的，關(guān)鍵是脫色?！财鞑挠镁摺车扰涓鞣N培養(yǎng)基的組成成分，瓊脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或臺(tái)秤高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。(三)培養(yǎng)基的分裝 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置選用15179。(五)培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。但制作后，其貯藏時(shí)間有一定限制，一般室溫條件下不超過三周；冰箱4℃條件下可貯藏半年，過期不能用。學(xué)習(xí)酵母死活細(xì)胞的鑒別方法。〔結(jié)果分析〕描述釀酒酵母霉菌的菌落形態(tài)特征；繪圖釀酒酵母的菌體、出芽方式及細(xì)胞細(xì)節(jié)；（一）酵母的菌落濕潤(rùn)，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；菌名：釀酒酵母放大倍數(shù)：100179。10（179。10（179。目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果（精確到零點(diǎn)幾小格）物鏡倍數(shù)（目鏡均為10倍）目鏡測(cè)微尺的格數(shù)（小格）鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)（小格）目鏡測(cè)微尺的每格的長(zhǎng)度（μm）40倍酵母菌大小測(cè)定結(jié)果 菌號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 目鏡測(cè)微尺的格數(shù)（小格）長(zhǎng)軸短軸酵母大小平均值＝177。平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)過適當(dāng)稀釋，使其中的微生物充分分散形成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。土壤中微生物分離純化及平板計(jì)數(shù)采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口（三角瓶）中，吹吸三次，振蕩均勻(103)。選擇平均菌落數(shù)在30－300之間的平板。主要通過其菌落特征來判斷?！矊?shí)驗(yàn)原理〕各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物存在差別。在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫（～），當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，培養(yǎng)基由紫色變黃，氣體的產(chǎn)生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判斷。〔材料用具〕，變形桿菌，枯草芽孢桿菌，產(chǎn)氣桿菌，糞水中分離的未知菌種斜面，糖發(fā)酵培養(yǎng)基；超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱，試管，移液管，杜氏小管。〔實(shí)驗(yàn)結(jié)果〕表7－1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 編號(hào) 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 產(chǎn)氣桿菌 未知菌 CK 葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵甲基紅實(shí)驗(yàn)〔實(shí)驗(yàn)討論〕如：討論通過哪些生理生化反應(yīng)可以區(qū)分大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌？大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇。2．學(xué)習(xí)從樣品中分離、純化出所需菌株。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。各類菌的稀釋度因菌源、采集樣品時(shí)的季節(jié)、氣溫等條件而異。若分離霉菌，需降低細(xì)菌增殖率，一般培養(yǎng)基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素。[材料與用品] 選定采土地點(diǎn)舌。也可用酒曲等替代。本次實(shí)驗(yàn)分離細(xì)菌、放線菌、霉菌時(shí)采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法：(1)細(xì)菌的分離 1)制備土壤稀釋液 稱取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10一20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成102稀釋度的土壤稀釋液。另取一只未用過的無菌移液管在試管內(nèi)反復(fù)吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。再?gòu)募執(zhí)兹〕鲈瓉淼囊埔汗?，插入稀釋液已搖勻的試管內(nèi)，再吹吸三次， 103的稀釋液。2)傾注法分離 取無菌培養(yǎng)皿69套，分別于培養(yǎng)皿底面按稀釋度編號(hào)。注意：溫度過高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會(huì)影響分離效果；低于45％培養(yǎng)基易凝固，平板易出現(xiàn)凝塊、高低不平。(2)放線菌的分離1)制備土壤稀釋液 稱取土樣l g，加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．并加人lo滴10％酚溶液(抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，可用l％的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液．效果更好)。若選用果園上樣，也依前法稱取土樣，制成102壤稀釋液。2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時(shí)或混合菌懸液常用劃線法進(jìn)行純種分離。劃線分離主要有連續(xù)劃線法和分區(qū)劃線法兩種。將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸人平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。劃線完畢，關(guān)上皿蓋。(2)分區(qū)劃線法平板分四區(qū)，故又稱四分區(qū)劃線法。分區(qū)劃線法劃線分離的平板分4個(gè)區(qū)，其中第四區(qū)是單菌落的主要分布區(qū)，故其劃線面積應(yīng)最大。第二次劃線完畢，同時(shí)再把平皿轉(zhuǎn)動(dòng)約60一70176。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進(jìn)一步純化。每克菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)＝(同一稀釋度的3個(gè)平板上菌落平均數(shù)X稀釋倍數(shù))/含菌樣品克數(shù)。也可用菌落計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類菌株的主要菌落特征和細(xì)胞形態(tài)。置冰箱保藏。應(yīng)該如何進(jìn)一步分離和純化；經(jīng)過次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應(yīng)采用哪種分離方法最合適? 、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細(xì)胞結(jié)構(gòu)表現(xiàn)在菌落形態(tài)上有什么聯(lián)系？第五篇：微生物學(xué)教學(xué)大綱微生物學(xué)課程教學(xué)大綱課程中文名稱：微生物學(xué)課程英文名稱：Microbiology 課程類別：專業(yè)基礎(chǔ)課課程編號(hào): 09003011 課程歸屬單位：生命科學(xué)學(xué)院 制定時(shí)間：2007年7月20日一、課程的性質(zhì)、任務(wù)微生物是生命科學(xué)的主要研究對(duì)象，學(xué)生應(yīng)從宏觀到微觀的各個(gè)層次上系統(tǒng)地了解微生物。（3）掌握研究微生物的基本方法和基本操作技能的理論基礎(chǔ)。（4）了解環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。學(xué)習(xí)該課程必須具備普通生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等方面的知識(shí)。（2） etc《Microbiology》，科學(xué)出版社，1999?；靖拍睿何⑸铩⑽⑸飳W(xué)。第二節(jié) 微生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史微生物學(xué)發(fā)展過程的五個(gè)時(shí)期及各時(shí)期的代表人物。第六節(jié) 微生物對(duì)于人類社會(huì)發(fā)展的重要性從醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工、發(fā)酵工業(yè)、農(nóng)業(yè)，微生物在現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展中的作用等多個(gè)方面闡述微生物對(duì)于人類發(fā)展的影響，說明學(xué)習(xí)微生物學(xué)的重要性。教學(xué)難點(diǎn)：細(xì)胞壁的構(gòu)造。第四節(jié) 放線菌放線菌的形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)；繁殖方式；放線菌的主要類群。基本概念：真菌、菌絲、菌絲體。第二節(jié) 真菌的繁殖真菌的繁殖方式（無性繁殖和有性繁殖）及其特點(diǎn)；各類繁殖所形成的孢子類型。第四章 非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物——病毒（4學(xué)時(shí)）基本內(nèi)容：病毒的定義、病毒的一般特征、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、病毒的增殖、病毒的溶原性、亞病毒。第一節(jié) 病毒的一般特征病毒的定義；一般形態(tài)特征。第五節(jié) 亞病毒亞病毒的種類和特點(diǎn)。教學(xué)重點(diǎn)：微生物的營(yíng)養(yǎng)類型和培養(yǎng)基。第三節(jié) 微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式（被動(dòng)運(yùn)輸、促進(jìn)擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)輸和基團(tuán)轉(zhuǎn)位）和運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)。教學(xué)難點(diǎn)：微生物的代謝調(diào)節(jié)。第四節(jié) 微生物代謝的調(diào)節(jié)酶活性調(diào)節(jié)和酶合成調(diào)節(jié)的類型和機(jī)制；微生物代謝調(diào)節(jié)在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用。教學(xué)難點(diǎn)：環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。第八章 微生物的遺傳變異和基因重組（6學(xué)時(shí)）基本內(nèi)容：微生物的遺傳物質(zhì)、基因突變和誘變育種、微生物的基因重組。第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化、噬菌體感染和植物病毒的重建等三個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)；遺傳物質(zhì)存在的部位和方式。第五節(jié) 菌種保藏菌種的衰退與復(fù)壯，菌種的保藏。教學(xué)難點(diǎn)：微生物在自然界氮素循環(huán)中的作用。第四節(jié) 微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用微生物在自然界碳素、氮素、磷素和硫素等物質(zhì)循環(huán)中的作用。教學(xué)難點(diǎn)：抗原抗體