【正文】 菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數(shù)。實際工作中同一稀釋度重復(fù)對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。(4)當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?三 光電比濁計數(shù)法一、目的要求1．了解光電比濁計數(shù)法的原理。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標準曲線。光電比濁計數(shù)法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進行測定。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。2．復(fù)習(xí)光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。4．比濁測定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。2．思考題(1)如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？(2)細菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，其密度高達2108/ml，計計算出其代時。5）病毒的特點：只能在電子顯微鏡下看見。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。溫和噬菌體，侵入宿主細胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細胞不裂解而繼續(xù)生長，不引起宿主細胞裂解。第二章12）細菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。部分細菌有特殊結(jié)構(gòu)：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。（半滲透膜），含有蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和多糖。19）核糖體。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。24）革蘭氏染色的機制：1）革蘭氏染色與細菌等電點有關(guān)系：革蘭氏陽性菌的等電點比革蘭氏陰性菌的等電點低，說明革蘭氏陽性菌帶的負電荷比革蘭氏陰性菌多。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長而得名。28）原生動物的營養(yǎng)類型：1全動性營養(yǎng)2植物性營養(yǎng)3腐生性營養(yǎng)29）原生動物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動物的作用：所有原生動物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。有性生殖和無性生殖。分發(fā)酵型和氧化型兩種。36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生38）霉菌的繁殖：有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2轉(zhuǎn)移酶類：AR+B=A+BR水解酶類：AB+H2O=AOH+BH裂解酶類：AB=A+B異構(gòu)酶：葡萄糖=果糖（例）合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi或A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高46）酶促反應(yīng)的動力學(xué)方程式：E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物47）酶的濃度對酶促反應(yīng)速率的影響：下圖48)底物濃度對酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱酶的激活劑。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。按物理性質(zhì)分為。雜亂運動的，水溶性的溶質(zhì)分子（水，無機鹽，O2，CO2）通過細胞質(zhì)膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴散，不與膜上的分子發(fā)生反應(yīng)，這種擴散是非特異的，擴散速度慢。59)主動運輸：當微生物細胞內(nèi)積累的營養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細胞外的濃度時，營養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴散到細胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進細胞內(nèi)。與主動運輸相比，有一個復(fù)雜的運輸系統(tǒng)，被運輸?shù)奈镔|(zhì)發(fā)生了化學(xué)變化，主要用于糖的運輸，運輸總效果與主動運輸相似，可以逆濃度梯度將營養(yǎng)物質(zhì)移向細胞內(nèi)，結(jié)果使細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的物質(zhì)濃度大大超過未改變結(jié)構(gòu)的同類物質(zhì)的濃度。63）微生物的發(fā)育：從生長到繁殖這個由量變到質(zhì)變的過程叫發(fā)育 64）代時：細菌兩次細胞分裂之時的時間。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開，均會產(chǎn)生滲透壓。71)競爭關(guān)系：競爭關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對食物等營養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競爭，互相收到不利影響。74)偏害關(guān)系：共存于同一環(huán)境的兩種微生物，甲方對乙方有害，乙方對甲方無任何影響。75)捕食關(guān)系：有的微生物不是通過代謝產(chǎn)物對抗對方，而是吞食對方，這種關(guān)系稱為捕食關(guān)系。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。80)遺傳可改變的一面是變異81)遺傳是相對的，變異是絕對的。原因有多因素低劑量的誘變效應(yīng)，互變異構(gòu)效應(yīng)。87)雜交。通過溫和噬菌體的媒介作用，把供體細胞內(nèi)特定的基因攜帶至受體細胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)?；蚬こ淌怯萌斯し椒ò阉枰哪骋还w生物的DNA提取出來，在離體的條件下用限制性內(nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長度有幾千個核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細胞中，以便外來的遺傳物質(zhì)在其中進行復(fù)制，擴增和表達，再進行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對外源基因表達產(chǎn)物進行分離提純，從而獲得新品種。2水體中好氧細菌利用溶解氧把有機物分解為簡單有機物和無機物，并用以組成自身有機體，水中溶解氧急速下降至零，此時魚類絕跡，原生動物，輪蟲，浮游甲殼動物死亡，厭氧細菌大量繁殖，對有機物進行厭氧分解。如果河流不再被有機物污染，河水中溶解氧恢復(fù)到原來的水平，甚至達到飽和。A=n178?！财鞑挠镁摺筹@微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細菌、放線菌等固定裝片；；無菌水、生理鹽水。10（179。凡實驗中學(xué)生的所思所想，如無菌操作技術(shù)要點、自行處理實驗材料、失敗與思考等均可進行討論（如涂片時蒸餾水不宜過多、取用菌時防止菌被灼燙變形、取菌宜少不宜多等均是可以討論的內(nèi)容）。10（179。10（179。哪些因素會影響到革蘭氏染色結(jié)果的正確？其中是關(guān)鍵的一步是什么？ 菌齡及培養(yǎng)條件和染色技術(shù)是最主要的，關(guān)鍵是脫色?！财鞑挠镁摺车扰涓鞣N培養(yǎng)基的組成成分，瓊脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或臺秤高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。(三)培養(yǎng)基的分裝 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置選用15179。(五)培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。但制作后，其貯藏時間有一定限制，一般室溫條件下不超過三周；冰箱4℃條件下可貯藏半年，過期不能用。學(xué)習(xí)酵母死活細胞的鑒別方法?！步Y(jié)果分析〕描述釀酒酵母霉菌的菌落形態(tài)特征；繪圖釀酒酵母的菌體、出芽方式及細胞細節(jié)；（一）酵母的菌落濕潤，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；菌名：釀酒酵母放大倍數(shù)：100179。10（179。10（179。目鏡測微尺的標定結(jié)果（精確到零點幾小格）物鏡倍數(shù)（目鏡均為10倍）目鏡測微尺的格數(shù)（小格）鏡臺測微尺的格數(shù)（小格）目鏡測微尺的每格的長度（μm）40倍酵母菌大小測定結(jié)果 菌號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 目鏡測微尺的格數(shù)（小格）長軸短軸酵母大小平均值＝177。平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)過適當稀釋，使其中的微生物充分分散形成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞。土壤中微生物分離純化及平板計數(shù)采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口（三角瓶）中，吹吸三次，振蕩均勻(103)。選擇平均菌落數(shù)在30－300之間的平板。主要通過其菌落特征來判斷?！矊嶒炘怼掣鞣N細菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對營養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物存在差別。在配制培養(yǎng)基時預(yù)先加入溴甲酚紫（～），當發(fā)酵產(chǎn)酸時，培養(yǎng)基由紫色變黃，氣體的產(chǎn)生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判斷?！膊牧嫌镁摺?，變形桿菌，枯草芽孢桿菌，產(chǎn)氣桿菌，糞水中分離的未知菌種斜面，糖發(fā)酵培養(yǎng)基；超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱，試管，移液管，杜氏小管。〔實驗結(jié)果〕表7－1 實驗結(jié)果 編號 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 產(chǎn)氣桿菌 未知菌 CK 葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵甲基紅實驗〔實驗討論〕如：討論通過哪些生理生化反應(yīng)可以區(qū)分大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌？大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇。2．學(xué)習(xí)從樣品中分離、純化出所需菌株。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。各類菌的稀釋度因菌源、采集樣品時的季節(jié)、氣溫等條件而異。若分離霉菌，需降低細菌增殖率，一般培養(yǎng)基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素。[材料與用品] 選定采土地點舌。也可用酒曲等替代。本次實驗分離細菌、放線菌、霉菌時采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法：(1)細菌的分離 1)制備土壤稀釋液 稱取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10一20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成102稀釋度的土壤稀釋液。另取一只未用過的無菌移液管在試管內(nèi)反復(fù)吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。再從紙?zhí)兹〕鲈瓉淼囊埔汗?，插入稀釋液已搖勻的試管內(nèi)，再吹吸三次， 103的稀釋液。2)傾注法分離 取無菌培養(yǎng)皿69套，分別于培養(yǎng)皿底面按稀釋度編號。注意：溫度過高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會影響分離效果；低于45％培養(yǎng)基易凝固，平板易出現(xiàn)凝塊、高低不平。(2)放線菌的分離1)制備土壤稀釋液 稱取土樣l g，加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．并加人lo滴10％酚溶液(抑制細菌生長，可用l％的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液．效果更好)。若選用果園上樣，也依前法稱取土樣，制成102壤稀釋液。2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時或混合菌懸液常用劃線法進行純種分離。劃線分離主要有連續(xù)劃線法和分區(qū)劃線法兩種。將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸人平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。劃線完畢，關(guān)上皿蓋。(2)分區(qū)劃線法平板分四區(qū)，故又稱四分區(qū)劃線法。分區(qū)劃線法劃線分離的平板分4個區(qū)，其中第四區(qū)是單菌落的主要分布區(qū)，故其劃線面積應(yīng)最大。第二次劃線完畢，同時再把平皿轉(zhuǎn)動約60一70176。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進一步純化。每克菌樣品中微生物的活細胞數(shù)＝(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數(shù)X稀釋倍數(shù))/含菌樣品克數(shù)。也可用菌落計數(shù)器計數(shù)。記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類菌株的主要菌落特征和細胞形態(tài)。置冰箱保藏。應(yīng)該如何進一步分離和純化；經(jīng)過次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應(yīng)采用哪種分離方法最合適? 、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細胞結(jié)構(gòu)表現(xiàn)在菌落形態(tài)上有什么聯(lián)系？第五篇：微生物學(xué)教學(xué)大綱微生物學(xué)課程教學(xué)大綱課程中文名稱：微生物學(xué)課程英文名稱：Microbiology 課程類別：專業(yè)基礎(chǔ)課課程編號: 09003011 課程歸屬單位：生命科學(xué)學(xué)院 制定時間：2007年7月20日一、課程的性質(zhì)、任務(wù)微生物是生命科學(xué)的主要研究對象，學(xué)生應(yīng)從宏觀到微觀的各個層次上系統(tǒng)地了解微生物。（3）掌握研究微生物的基本方法和基本操作技能的理論基礎(chǔ)。（4）了解環(huán)境條件對微生物生長的影響。學(xué)習(xí)該課程必須具備普通生物學(xué)、生物化學(xué)、細胞生物學(xué)等方面的知識。（2） etc《Microbiology》，科學(xué)出版社，1999?；靖拍睿何⑸铩⑽⑸飳W(xué)。第二節(jié) 微生物學(xué)的發(fā)展簡史微生物學(xué)發(fā)展過程的五個時期及各時期的代表人物。第六節(jié) 微生物對于人類社會發(fā)展的重要性從醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工、發(fā)酵工業(yè)、農(nóng)業(yè)，微生物在現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展中的作用等多個方面闡述微生物對于人類發(fā)展的影響，說明學(xué)習(xí)微生物學(xué)的重要性。教學(xué)難點：細胞壁的構(gòu)造。第四節(jié) 放線菌放線菌的形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)；繁殖方式；放線菌的主要類群?；靖拍睿赫婢⒕z、菌絲體。第二節(jié) 真菌的繁殖真菌的繁殖方式（無性繁殖和有性繁殖）及其特點；各類繁殖所形成的孢子類型。第四章 非細胞結(jié)構(gòu)生物——病毒（4學(xué)時）基本內(nèi)容：病毒的定義、病毒的一般特征、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、病毒的增殖、病毒的溶原性、亞病毒。第一節(jié) 病毒的一般特征病毒的定義；一般形態(tài)特征。第五節(jié) 亞病毒亞病毒的種類和特點。教學(xué)重點：微生物的營養(yǎng)類型和培養(yǎng)基。第三節(jié) 微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的方式微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的四種方式（被動運輸、促進擴散、主動運輸和基團轉(zhuǎn)位）和運輸?shù)奶攸c。教學(xué)難點：微生物的代謝調(diào)節(jié)。第四節(jié) 微生物代謝的調(diào)節(jié)酶活性調(diào)節(jié)和酶合成調(diào)節(jié)的類型和機制；微生物代謝調(diào)節(jié)在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用。教學(xué)難點：環(huán)境條件對微生物生長的影響。第八章 微生物的遺傳變異和基因重組（6學(xué)時）基本內(nèi)容：微生物的遺傳物質(zhì)、基因突變和誘變育種、微生物的基因重組。第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化、噬菌體感染和植物病毒的重建等三個經(jīng)典實驗；遺傳物質(zhì)存在的部位和方式。第五節(jié) 菌種保藏菌種的衰退與復(fù)壯，菌種的保藏。教學(xué)難點：微生物在自然界氮素循環(huán)中的作用。第四節(jié) 微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用微生物在自然界碳素、氮素、磷素和硫素等物質(zhì)循環(huán)中的作用。教學(xué)難點：抗原抗體