【正文】 的1至7號無菌試管中。（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細胞數106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數為橫坐標，繪制標準曲線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。各種操作條件必須與制作標準曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數就不準確。3．根據所測得的光密度值，從標準曲線查得每毫升的含菌數。（五）實驗報告l．結果每毫升樣品原液菌數=從標準曲線查得每毫升的菌數稀釋倍數2．思考題(1)光電比濁計數的原理是什么?這種計數法有何優(yōu)缺點?(2)光電比濁計數在生產實踐中有何應用價值?(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?四 大腸桿菌生長曲線的測定(一)目的要求1．通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。2．復習光電比濁法測量細菌數量的方法。(二)基本原理大多數細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。將一定量的細菌轉入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經歷延遲期，對數期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。用于測定細菌細胞數量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。如果需要，可根據公式1 klett units=OD/。圖15—5 帶側臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。圖15—6 直接用試管測OD值(四)操作步驟1．標記取11支無菌大試管，用記號筆分別標明培養(yǎng)時間，即0、1116和20h。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉入盛有50ml LB液的三角瓶內，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標記的11支無菌大試管中。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標有相應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。4．比濁測定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定，~(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細胞均勻分布)。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。該方法準確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準確度愈高。(五)實驗報告1．結果(1)將測定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時間對照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。2．思考題(1)如果用活菌計數法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？(2)細菌生長繁殖所經歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，其密度高達2108/ml，計計算出其代時。(3)次生代謝產物的大量積累在哪個時期？根據細菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產物積累更多？評論這張第三篇：環(huán)境微生物學一．緒論1）微生物：微生物是肉眼看不見的，必須在電子顯微鏡或光學顯微鏡下才能看見的所有微小生物的總稱。2）微生物的特點：1個體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細胞核，原核微生物只有擬核。第一章4）病毒：病毒是沒有細胞結構，專性寄生在活的敏感宿主體內的超微小生物。5）病毒的特點：只能在電子顯微鏡下看見。沒有核糖體，沒有酶系統(tǒng)，不具備代謝能力，必須專性寄生在活的敏感宿主細胞內。6）病毒的分類：按專性宿主分類：動物病毒，植物病毒，細菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質感染顆粒）。9）病毒的繁殖過程：1吸附2侵入3復制與聚集4宿主細胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細胞后，隨即引起宿主細胞裂解的噬菌體。溫和噬菌體，侵入宿主細胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復制，宿主細胞不裂解而繼續(xù)生長，不引起宿主細胞裂解。含有溫和噬菌體宿主細胞被稱作溶原細胞。溶原細胞內的溫和噬菌體核酸，稱為原噬菌體。11）噬菌體：噬菌體是感染細菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。第二章12）細菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。分別稱為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。13）細菌：一大類細胞核無核膜包裹，只存在稱作擬核區(qū)的裸露DNA的原始單細胞生物。14）細菌的結構：細菌為單細胞結構，所有的細菌均有如下結構：細胞壁，細胞質膜，細胞質及其內含物，擬核。部分細菌有特殊結構：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。15）細胞壁：細胞壁是包圍在細菌體表最外層的，堅韌而有彈性的薄膜。16）原生質體：原生質體包括細胞質膜，細胞質及其內含物，擬核。17）細胞質膜：細胞質膜是緊貼在細胞壁的內側而包圍細胞質的一層柔軟而富有彈性的膜。（半滲透膜），含有蛋白質，脂質和多糖。脂質是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。18）細胞質膜的生理功能：1,維持滲透壓的梯度和溶質的轉移2，膜上含有合成細胞壁和形成橫膈膜組分的膜，故在膜的外表面合成細胞壁3，膜內的中間體含有細胞色素，參與呼吸作用。4，細胞質膜上含有酶，進行物質代謝和能量代謝5，細胞質膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長出，為鞭毛提供附著點。19）核糖體。合成蛋白質20）擬核：細胞的核因沒有核膜和核仁，故稱為原始核或擬核。21）鞭毛：有細胞質膜上的鞭毛基粒長出穿過細胞壁伸向體外的一條纖細的波浪狀的絲狀物叫鞭毛。22）細菌的染色方法簡單染色法和復合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。2用草酸銨結晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。3用碘碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。4用中性脫色劑如乙醇或丙醇脫色，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。5，用番紅溶液復染1MIN，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色。24）革蘭氏染色的機制：1）革蘭氏染色與細菌等電點有關系：革蘭氏陽性菌的等電點比革蘭氏陰性菌的等電點低，說明革蘭氏陽性菌帶的負電荷比革蘭氏陰性菌多。革蘭氏陽性菌的等電點低，與草酸銨結晶紫結合的牢固，對乙醇脫色抵抗力強，所以革蘭氏陽性菌呈紫色。2，革蘭氏染色與細胞壁有關：革蘭氏陽性菌的脂質的含量很低，肽聚糖含量高，革蘭氏陰性菌則相反，因此用乙醇脫色時革蘭氏陰性菌的脂質被乙醇溶解，增加細菌細胞壁的孔徑和通透性，乙醇很易進入細胞內將結晶紫和碘碘化鉀復合物提取出來，噬菌體呈現無色。3,*革蘭氏陽性菌含特殊的RNAMg2+鹽與革蘭氏染色有關。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長而得名。分為三類營養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。26）放線菌的結構：放線菌的菌體由纖細的，長短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細胞，在菌絲生長過程中，核物質不斷復制分裂，然后細胞不形成橫膈膜，也不分裂，而是無數分枝的菌絲組成很細密的菌絲體。第三章27）原生動物：原生動物是動物中最原始，最低等，結構最簡單的單細胞動物。28）原生動物的營養(yǎng)類型：1全動性營養(yǎng)2植物性營養(yǎng)3腐生性營養(yǎng)29）原生動物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動物的作用：所有原生動物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。31）主要的原生動物：P71 32）微型后生動物：原生動物以外的多細胞動物叫后生動物。因有些后生動物體型微小，要借助光學顯微鏡方可看得清楚，故叫微型后生動物。33）藻類的繁殖。有性生殖和無性生殖。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類繁多，形態(tài)，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。真菌屬真核微生物，有單細胞和多細胞之分。35）酵母菌：酵母菌是單細胞真菌。分發(fā)酵型和氧化型兩種。氧化型的酵母菌則是無發(fā)酵能力或發(fā)酵能力弱而氧化能力強的酵母菌。球擬酵母菌，白色假絲酵母菌，類酵母的阿氏囊霉屬，短梗霉屬在石油加工業(yè)中起積極作用，如石油脫蠟，降低石油的凝固點等。處理廢水及用酵母菌檢測重金屬。36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生38）霉菌的繁殖：有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。39）傘菌：無毒的有機廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。40）酶：酶是由細胞產生的，能在體內或體外起催化作用的一類具有活性中心和特殊構想的生物大分子。41）酶的分類：化學組分；單成分酶（只含有蛋白質）和全酶（蛋白質及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質小分子有機物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時存在起作用）42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質小分子有機物2酶蛋白+非蛋白質小分子有機物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉移酶，水解酶類，裂解酶類，異構酶類和合成（連接）酶類。44）酶的反應通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2轉移酶類：AR+B=A+BR水解酶類：AB+H2O=AOH+BH裂解酶類：AB=A+B異構酶：葡萄糖=果糖（例）合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi或A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質）3酶的催化反應條件溫和4酶對環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高46）酶促反應的動力學方程式：E酶S底物ES中間產物P最終產物47）酶的濃度對酶促反應速率的影響：下圖48)底物濃度對酶促反應速率的影響：P116 49)溫度對酶促反應速率的影響：上圖 50)PH對酶促反應速率的影響：P117 51)激活劑對酶促反應速率的影響：凡能激活酶的物質稱酶的激活劑。分為無機離子激活劑和有機化合物兩類。52)抑制劑對酶促反應速率的影響：引起抑制作用的物質稱為酶的抑制劑。抑制作用是指由于某些物質與酶的活性部位結合。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。53)培養(yǎng)基。根據各種微生物對營養(yǎng)的需要，包括水，碳源，能源，氮源，無機鹽及生長因子等按一定的比例配置而成的，用以培養(yǎng)微生物的基質，稱為培養(yǎng)基。54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營養(yǎng)物的濃度及配比3調PH值4考慮加生長因子5培養(yǎng)基物美價廉55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機物配制而成的培養(yǎng)基），復合培養(yǎng)基。按物理性質分為。液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基。根據培養(yǎng)基對微生物的功能和用途不同：選擇培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，加富培養(yǎng)基。56)營養(yǎng)物質進入微生物細胞的方式：單純擴散，促進擴散，主動運輸，基團轉位57)單純擴散：單純擴散是物理過程，不包括細胞的主動代謝。雜亂運動的，水溶性的溶質分子（水，無機鹽，O2，CO2）通過細胞質膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴散，不與膜上的分子發(fā)生反應，這種擴散是非特異的，擴散速度慢。58)促進擴散：細胞膜上的載體蛋白分子有和被運輸物質特異結合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質結合，形成的底物載體蛋白復合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴散或越膜。由于被運輸物質的濃度在膜的內表面較低，所以復合體傾向解離，被運輸的物質就留在細胞內，而載體回到膜的外表面，只要存在需要運輸物質的越膜濃度梯度，這個過程就將繼續(xù)進行，從而加快了物質的運輸速度。不消耗能量。59)主動運輸：當微生物細胞內積累的營養(yǎng)物質濃度高于細胞外的濃度時，營養(yǎng)物質就不能按濃度梯度擴散到細胞內，而是逆濃度梯度被“抽”進細胞內。這一過程需要滲透酶和消耗能量。滲透酶在此過程中起改變平衡點的作用，這種需要能量和滲透酶的逆濃度梯度積累營養(yǎng)物質的過程。60)基團轉位：基團轉位是存在于某些原核生物中的一種物質運輸方式。與主動運輸相比，有一個復雜的運輸系統(tǒng)，被運輸的物質發(fā)生了化學變化，主要用于糖的運輸，運輸總效果與主動運輸相似，可以逆濃度梯度將營養(yǎng)物質移向細胞內，結果使細胞內結構發(fā)生變化的物質濃度大大超過未改變結構的同類物質的濃度。需要代謝能量。61)微生物的能量代謝：P135P15062）微生物的生長：微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷吸收營養(yǎng)物質，按